Detección de anticuerpos contra los antígenos de diferenciación tumoral proteinasa 3 (PR3) y mieloperoxidasa (MPO) en la leucemia promielocítica / Detection of antibodies to antigens of proteinase 3 (PR3) tumor differentiations and myeloperoxidase (MPO) in cases of promyelocytic leukemia

La leucemia promielocítica (LPM) subtipo M3 representa del 5-15 por ciento en la clasificación FAB de las leucemias mieloides agudas (LMA). Está asociada con características genéticas únicas que incluyen la translocación recíproca t(15;17)(q22;q12). El mecanismo por el que ocurre la t(15;17) no se conoce. Las leucemias de estirpe mieloide expresan diversos antígenos de diferenciación tumoral como son la proteinasa 3 (PR 3) y la mieloperoxidasa (MPO) que se encuentran sobreexpresados en el promielocito. Se plantea que participan en la maduración y en la regulación de la división celular. Existe poca información acerca de la respuesta inmune de pacientes con LPM dirigida contra las células tumorales. En nuestro trabajo se detectó la presencia de anticuerpos contra los antígenos de diferenciación tumoral PR3 y MPO en diferentes fases del tratamiento de la enfermedad, mediante inmunofluorescencia indirecta. Los anticuerpos anti PR3 y anti MPO se detectaron en aquellos pacientes sin tratar y en fase de inducción, no así en la consolidación y mantenimiento, de ahí su posible utilidad como marcadores de diferenciación celular.

ABSTRACT Promyelocytic leukemia (PML) subtype M3 represents the 5-15 percent in the FAB classification of acute myeloid leukemias (AML). It is associated with the unique genetic features including the reciprocal t-translocation (15;17) (q22;q12). The mechanism of t is unknown. The myeloid leukemias express different tumoral differentiation antigens such as the proteinase 3 (PR 3) and myeloperoxidase (MPO) which are over-expressed in promyelocyte. It is involved in maturation and regulation of cell division. There is scarce information on the immune response of patients with PLM against tumor cells. In our paper we detected presence of antibodies to RP3 and MPO tumor differentiation antigens in different phases of disease treatment by indirect immunofluorescence. Anti-MPO and anti-PR3 antibodies were detected in those patients without treatment and in induction phase but not in the consolidation and maintenance, thus its potential usefulness as cellular differentiation markers.

Detección de anticuerpos antigliadina y antitransglutaminasa en pacientes con clínica sugestiva de enfermedad celíaca / Detection of anti-gliadin and anti-transglutaminase antibodies in patients with possible celiac disease

La enfermedad celíaca es una enfermedad autoinmune que cursa con procesos inflamatorios en la mucosa del intestino delgado. Se produce por la ingesta de una fracción proteica del gluten de la dieta en individuos genéticamente predispuestos. Tiene diferentes formas de presentación que van desde la sintomática, típica o atípica, hasta la silente. La detección de autoanticuerpos con diversas especificidades debe ser considerada como indispensable en todos aquellos enfermos donde predominan síntomas digestivos y afectaciones nutricionales, aunque no deben descartarse otras sintomatologías atípicas como son el retraso en el crecimiento y desarrollo. En nuestro trabajo se estudió la presencia de anticuerpos antigliadina y antitransglutaminasa en el suero de 110 enfermos con clínica sugestiva de enfermedad celíaca, y se detectaron anticuerpos en 23 enfermos: 11 con antigliadina, antitransglutaminasa y biopsia positiva; 6 con antigliadina positiva, antitransglutaminasa negativa y biopsia positiva y 6 con antigliadina positiva, antitransglutaminasa negativa y biopsia negativa.

Celiac disease is an autoimmune entity with inflammatory processes in small intestine. It is caused by ingesta of gluten protein fraction in the diet of subjects with genetic predisposition subjects and has different ways of presentation including the symptomatic, typical or atypical and silent type. The detection of autoantibodies with diverse specificities must to be considered as essential in all those patients where there is predominance of digestive symptoms and nutritional affections without to rule out other atypical symptomatologies including the growth and development retard. The objective of present paper was to study the presence of anti-gliadin and anti-transglutaminase in serum of 110 patients presenting with celiac disease and it was possible to detect antibodies in 23 patients: 11 with anti-gliadin and anti-transglutaminase and a positive biopsy; 6 with positive anti-gliadin, negative anti-transglutaminase and a positive biopsy, negative anti-transglutaminase and also a negative biopsy.

Antígenos de histocompatibilidad HLA-G y embarazo / HLA-G histocompatibility antigens related to pregnancy

El componente HLA-G es una molécula clase I no clásica (Ib) del sistema principal de histocompatibilidad. Esta adopta 7 isoformas como resultado del empalme alternativo de un mismo RNA inmaduro; 4 se encuentran ligadas con la membrana (HLA-G1-G2-G3-G4) y las otras 3 formas son solubles (HLA-G5,-G6,-G7), que tienen en común el dominio extracelular a1. Las primeras se expresan en células del citrofoblasto extravelloso de la placenta, células epiteliales del amnio, células endoteliales fetales, macrófagos del mesénquima de las vellosidades coriónicas y en las células epiteliales de la médula del timo; y las segundas, en el líquido amniótico, en la sangre periférica materna y en el cordón umbilical. En el embarazo, las moléculas HLA-G se expresan de forma temprana en las células del trofoblasto, se mantienen durante todo el embarazo y es mayor en el citrofoblasto velloso. La HLA-G está asociada con algunas complicaciones en la gestación, tales como las infecciones intrauterinas, la pre-eclampsia y el aborto recurrente espontáneo, por lo que el estudio de la molécula HLA-G es de gran utilidad en el seguimiento del embarazo.

HLA-G component is a class I non-classic molecule (Ib) from the Histocompatibility Principal System, adopting 7 isoforms as result of alternative connection of a same immature ARN; four of them are kinked to membrane (HLA-G1-G2-G3-G4) and the other three forms are soluble (HLA-GG5-G6-G7) with a a1 extracellular common domain. The first ones are expressed in the extravillous cytotrophoblast cells of placenta, epithelial cells of amnion, fetal endothelial cells and mesenchymal macrophages of chorionic villi and in epithelial cells of thymus medulla; and the second ones in amniotic fluid, in maternal peripheral blood and in umbilical cord. During pregnancy, the HLA-G molecules are expressed in an early way in trophoblast cells, maintained during the pregnancy and it is higher in the villous trophoblast. The HLA-G is associated with some complications in gestation, such as intrauterine infections, the pre-eclampsia and the spontaneous recurrent abortion where the HLA-G molecule is useful in pregnancy follow-up.

Detección de anticuerpos contra la proteína de fusión PML/RARa en la leucemia promielocítica / Detection of antibodies to PM/RARa fusion protein in promyelocytic leukemia

La leucemia promielocítica (LPM) está asociada con características genéticas únicas que incluyen la translocación recíproca t(15;17)(q22;q12) con la formación del complejo PML-RARa, el cual representa más del 95 por ciento de las proteínas de fusión en la LPM y resulta una diana potencial de la respuesta inmune. Los tratamientos actuales conocidos por terapias de diferenciación combinan el ácido trans retinoico (ATRA) y las antraciclinas, así como el trióxido de arsénico; resultan en una sobrevida a largo plazo y la cura potencial aproximadamente entre el 70 y 80 por ciento de los pacientes. En estudios realizados en ratones con LPM inmunizados con una vacuna de ADN elaborada mediante la fusión del oncogen PML-RARa al fragmento C de la toxina tetánica como adyuvante, conjuntamente con ATRA, se produjeron títulos elevados de anticuerpos. Se logró una sobrevida significativa, entre 120-300 días, comparada con la de ratones a los que se administró placebo. En nuestro trabajo se detectó la presencia de anticuerpos contra la proteína de fusión PML-RARa en diferentes fases del tratamiento, lo que indica la capacidad de respuesta de estos pacientes frente al antígeno tumoral. Los anticuerpos anti PML-RARa se detectaron en aquellos pacientes sin tratar y en fase de inducción, no así en la consolidación y mantenimiento, de ahí su posible utilidad como marcador de diferenciación celular a partir de la presencia o ausencia de la proteína de fusión en la célula leucémica.

Promyelocytic leukemia (PML) is associated with unique genetic features including the t reciprocal translocation (15; 17) (q22; q22) with PML-RARa, which accounted for more than 95 percent of fusion protein in PML and is a potential target of immune response. The current treatments known as differentiation therapies combine the trans-retinoic acid (TRA) and the anthracyclines, as well as the trioxide arsenic (As(2)0(3)); become in a long-term survival and the potential cure in about the 70 to 80 percent of patients. In studies conducted in LPM-mice immunized with a DNA vaccine made the PML-RARa oncogene fusion to C fragment of tetanus toxin as coadjuvant together with TRA were antibodies high titers. It was possible to achieve a significant survival among 120-130 days compared with that of placebo-mice. In our paper it was detected the presence of antibodies to PML-RARa fusion protein in different phases of treatment indicating the response to these patients to tumor antibody. The anti-PML-RARa were detected in those non-treated patients and in induction fusion, but not in consolidation and maintenance, thus its potential usefulness as cellular differentiation marker from presence or absence of fusion protein un leukemic cell.

Probabilidad de encontrar donantes HLA idénticos en familiares no relacionados para posible trasplante de células hematopoyéticas / Probability of finding HLA-identical donors in non-related relatives for possible transplantation of haematopoietic cells

Este trabajo se ha realizado en un período de 10 años, muestra los estudios familiares de 21 pacientes con un rango de edad de 2-51 años, 15 del sexo masculino y 6 femeninos, 18 fenotípicamente blancos y 3 no blancos, que no tenían hermanos o que estos no eran compatibles. Los familiares extendidos fueron 60 tíos (32 paternos y 28 maternos), y 85 primos (48 paternos y 37 maternos), para un total de 145 familiares estudiados....

Evaluación de un método de aglutinación con látex para la detección de factor reumatoide / Evaluation of a latex agglutination method for the detection of rheumatoid factor

Se evaluó un método de aglutinación con látex de producción nacional (Centis), para la detección de factor reumatoide, empleándose como procedimiento de referencia un ensayo turbidimétrico con látex (Spin React, España) en un grupo de pacientes con artritis reumatoide. Los resultados obtenidos en el método evaluado: sensibilidad 93 por ciento; especificidad 80 porciento; valor predictivo positivo 97,6 por ciento; valor predictivo negativo 57,1 por ciento; y un límite de detección de 15 UI/mL, indican su calidad y utilidad.

An agglutination method with latex of national production (Centis) was evaluated to detect the rheumatoid factor by using a turbidimetric assay with latex (Spin React, Spain) as a reference procedure in a group of patients with rheumatoid arthritis. The results obtained in the evaluated method (sensitivity 93 percent, specificity 80 percent, positive predictive value 97.6 percent, negative predictive value 57.1 percent, and a detection limit of 15 UI/mL) showed its quality and usefulness.

Frecuencia fenotípica y génica de los antígenos HLA en una muestra de la población cubana / Phenotypic and genic frequency of HLA antigens in a sample of the Cuban population

Se realizó un estudio de la frecuencia fenotípica y génica de los antígenos del sistema principal de histocompatibilidad HLA en personas no relacionadas, supuestamente sanas, tomadas como muestra de la población cubana. Se analizó la distribución de 87 antígenos HLA clase I ( loci A, B y C) y 25 clase II ( loci DR y DQ). Se emplearon las técnicas de microlinfocitotoxicidad (serológica) descrita por Terasaki y modificada por el NIH para los antígenos de clase I, y las técnicas de biología molecular para los de clase II. Los antígenos clase I del locus A: HLA A2, A9 y A19; del locus B: B5, B12 y B35; y del locus C: Cw4, Cw7; y los antígenos clase II de los locus DR y DQ: DR2, DR3, DR6, DR7, DQ2, DQ5 y DQ6, tienen las frecuencias más altas. Estos resultados son útiles como referencia para los estudios de asociación HLA-enfermedad, en la evaluación de la respuesta a los trasplantes, y a ciertas vacunas por la población cubana

Estudio de la compatibilidad por métodos serológicos (HLA) y celulares (CML) en 22 años de trabajo en el Instituto de Hematología e Inmunología / Compatibility study by serological (HLA) and cellular methods (MLC) during 22 years of work at the Institute of Hematology and Immunology

Se estudió la histocompatibilidad de los loci ABC y del locus D del sistema principal de histocompatibilidad mediante las técnicas serológicas de microlinfocitotoxicidad en 383 pacientes con diferentes enfermedades hematológicas. Se realizó una comparación por la técnica celular y la reactividad linfocitaria en el cultivo mixto de linfocitos (CML), en 39 de los 145 individuos idénticos para los antígenos HLA, tomados de los estudios familiares realizados en el IHI. Resultaron 29 CML negativos, para el 74,35 por ciento. No se corresponden en el 100 por ciento los estudios serológicos y celulares, ya que no se compatibilizó en todos los casos para los antígenos HLA de clase II, y en ninguno para los antígenos menores de histocompatibilidad, que influyen tanto en los resultados del CML y en las causas de fracaso del trasplante de médula ósea (TMO) en individuos idénticos. Esto corrobora la importancia de los estudios de tipificación de biología molecular y antígenos menores de histocompatibilidad

Alteraciones de la solubilización e inhibición de la precipitación / de inmunocomplejos en la anemia drepanocítica / Alterations of the solubilization and inhibition of the precipitation of immunocomplexes in sickle cell anemia

Se estudiaron los fenómenos de solubilización e inhibición de la precipitación de inmunocomplejos en un grupo de 39 pacientes con anemia drepanocítica en crisis hepática (13) y en estado basal (26), utilizando como modelo el complejo125 I-toxoide tetánico/anti-toxoide tetánico. La inhibición de la precipitación estuvo disminuida en la crisis hepática y en el estado basal, con valores normales de la actividad hemolítica de la vía clásica y de los niveles séricos del C4, mientras que la disminución de la solubilización en la crisis hepática estuvo relacionada con una disminución de la actividad hemolítica de la vía alternativa, la actividad hemolítica del factor B y los niveles del componente C3, y con un aumento de los inmunocomplejos circulantes. Nuestros resultados sugieren la posible utilidad de estos mecanismos para evaluar otras funciones del complemento, no detectadas mediante una determinación de la actividad hemolítica, como medida de la función de las vías clásica y alternativa.

Alteraciones del sistema complemento en pacientes con nefropatía diabética / Alterations of the complement system in patients with diabetic nephropathy

Se determinó la actividad del sistema complemento en 26 pacientes adultos que se hallaban en la fase terminal de la nefropatía diabética. En estos pacientes se observó una disminución significativa (p<0,001) de la actividad hemolítica de la vía clásica, de los niveles séricos del subcomponente Clq y de los niveles séricos del componente C4. Por el contrario, la actividad hemolítica de la vía alternativa, la actividad hemolítica del factor B y los niveles séricos del componente C3, se mantuvieron dentro del rango normal. Estos resultados sugieren que la disminución prolongada de alguno de los componentes iniciales de la vía clásica del complemento, puede constituir un factor que predispone a estos pacientes para los procesos autoinmunes, o que puede contribuir al mantenimiento del estado de autoinmunidad.

Alteraciones de las inmunoglobulinas en pacientes con enfermedad de Hodgkin / Alterations of immunoglobulins in patients with Hodgkin disease

Se determinaron las concentraciones de IgG, IgA e IgM en el suero de 24 pacientes adultos con enfermedad de Hodgkin. Se detectó una disminución significativa (p < 0,001) de las 3 inmunoglobulinas en el grupo total de pacientes al compararlas con los controles normales. Se demostró una disminución de las inmunoglobulinas estudiadas en todos los enfermos en los estadios clínicos más avanzados, IIIB y IVB; la IgG e IgM se mantuvieron dentro de límites normales en el estadio IIA, no así la IgA que estaba disminuida. Los datos obtenidos en nuestro trabajo sugieren una posible asociación entre los niveles de IgG e IgM con la extensión de la enfermedad.

Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA): una herramienta importante en el diagnóstico de las vasculitis / Antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA): an important tool for the diagnosis of vasculitis

Se determinó la presencia de anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA) específicos para la proteinaza 3 (cANCA) y la mieloperoxidasa (pANCA) en 166 pacientes, 45 con vasculitis no precisadas y el resto con diferentes enfermedades asociadas con procesos inflamatorios, fenómenos autoinmune e infecciones, mediante inmunofluorescencia indirecta. Se detectó la presencia de cANCA en 12 casos con vasculitis, y pANCA en 8 pacientes con enfermedades autoinmunes y en 14 con anemia drepanocítica. Nuestros resultados sugieren la posibilidad de cierto grado de participación de estos autoanticuerpos en el daño del endotelio vascular que se observa en estas enfermedades, debido a la activación de los neutrófilos.

Posible participación del sistema complemento en el desarrollo de manifestaciones autoinmunes en la leucemia linfocítica crónica / Possible role of the complement system in the development of autoimmune manifestations in chronic lymphocytic leukemias

Se efectuó la medición de la actividad de la vía clásica, alternativa, factor B, factor D, así como la cuantificación de C1q, C3 y C4 del sistema complemento en 27 pacientes con leucemia linfocítica crónica de tipo B (LLC-B) CD5+ estadificados en 2 grupos: 12 pacientes en fase poco avanzada de la enfermedad (estadios 0, I, II) y 15 en fase avanzada (estadios III, IV). Se demostró una disminución de la actividad de la vía clásica y de la concentración de C1q y C4 en 10 pacientes en fase avanzada, 7 de los cuales tenían asociada una anemia hemolítica autoinmune (AHAI); en el grupo en fase poco avanzada de la enfermedad no se demostraron deficiencias de complemento ni manifestaciones autoinmunes. Los datos obtenidos sugieren la posible participación del sistema complemento en el mantenimiento de la tolerancia inmunológica, cuya ruptura pudiera provocar la síntesis de anticuerpos antieritrocitarios, y por lo tanto, la anemia hemolítica que se asocia en determinados pacientes en fase avanzada de la enfermedad

Alteraciones de las subclases de IgG en pacientes con anemia drepanocítica / IgG subclasses alterations found in patients with sickle cell anemia

Se cuantificaron los niveles de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 mediante inmunodifusión radial simple en un grupo de 46 pacientes con anemia drepanocítica (AD) (hemoglobina SS) en estado basal, 21 sin complicaciones clínicas y 25 con complicaciones clínicas referentes a número de infecciones, úlceras maleolares, crisis vasooclusivas, hepáticas y aplásticas, considerando como límite un año anterior a la toma de muestra de sangre. Se demostró un aumento significativo de IgG1 e IgG2 en el grupo de pacientes con complicaciones clínicas en comparación con el resto de los pacientes y controles normales. Se observó una correlación significativa entre el número de crisis vasooclusivas y las concentraciones de IgG1, IgG2 e IgG4. Nuestros resultados sugieren la posibilidad de que algunos fenómenos inflamatorios que pueden persistir en pacientes con AD en estado basal, fundamentalmente aquellos con historia anterior de complicaciones clínicas, pudieron provocar un aumento en la síntesis de IgG1 e IgG2

Alteraciones del sistema complemento en pacientes con anemia drepanocítica en estado basal / Alterations of the complement system in patients with basal sickle cell anemia

Se determinó la actividad de las vías clásica y alternativa del complemento, así como la cuantificación de algunos de sus componentes en 46 pacientes con anemia drepanocítica (AD) (hemoglobina SS), 21 sin complicaciones clínicas y 25 con estas; entre las más frecuentes encontramos: número de infecciones, úlceras maleolares, crisis vasooclusivas, hepáticas y aplásticas, considerando como límite un año anterior a la toma de muestra de sangre. Se demostró una disminución significativa de la actividad de la vía alternativa, factor B y del componente C3 en el grupo de pacientes con complicaciones clínicas. Se observó una correlación significativa entre el número de crisis vasooclusivas e infecciones y la actividad de la vía alternativa, el factor B y el C3. Estos resultados sugieren que los fenómenos inflamatorios que pueden persistir en pacientes con AD en estado basal, fundamentalmente aquellos con historia anterior de complicaciones clínicas, pueden provocar alteraciones en la actividad del complemento.

The activity of the classic and alternative complement pathways, as well as the quantitation of some of their components was determined in 46 patients with sickle cell anemia (haemoglobin SS), 21 with no clinical complications and 25 with them. Among the most frequent complications we found: number of infections, malleolar ulcers, and vaso-occlusive, hepatic and aplastic crises. A year previous to the blood sample taking was considered as the limit. A significant reduction of the activity of the alternative pathway, factor B and component C3 was proved in the group of patients with clinical complications. A marked correlation was observed between the number of vaso-occlusive crises and infections and the activity of the alternative pathway, factor B and complement C3. These results suggest that the inflammatory phenomena that may persist among patients with basal sickle cell anemia, mainly those with prior history of clinical complications, may produce alterations in the complement activity.

Estudio preliminar de la frecuencia fenotípica y génica de los antígenos HLA en la enfermedad de Voght-Koyanagi-Harada / Preliminary study of the phenotypical and genic frequency of HLA antigens in Voght-Koyanagi-Harada’s disease

Se determinó la frecuencia de 67 antígenos HLA de clase I (loci A, B y C) y 18 de clase II en 15 pacientes portadores del síndrome de Voght-Koyanagi-Harada, diagnosticados en los servicios de Oftalmología del Hospital General “Enrique Cabrera” y el Hospital Oftalmológico “Ramón Pando Ferrer”. Se utilizaron como controles 276 personas sanas procedentes de diferentes regiones de Cuba. Al analizar los resultados no se observó asociación entre los antígenos HLA de clases I y II y la enfermedad en la muestra de pacientes en comparación con los controles sanos.

The frequency of 67 HLA class I (loci A, B and C) antigens and of 18 HLA class II antigens was determined in 15 patients carriers of Voght-Koyanagi-Harada’s syndrome that were diagnosed in the Ophthalmology Service of “Enrique Cabrera” General Hospital and “ Ramón Pando Ferrer” Hospital. 276 persons from different regions of Cuba were used as controls. On analyzing the results, no association was found between the HLA class I and class II antigens and the disease in the sample of patients compared with the sound controls.

Purificación de IgG1, IgG2 e IgG3 mediante cromatografía de afinidad a partir de intacglobín / Purification of IgG1, IgG2 and IgG3 by affinity chromatography starting from Intacglobin

Se describe un método de purificación de las subclases IgG1, IgG2 e IgG3 a partir de Intacglobin mediante cromatografía de afinidad con el empleo de proteína A Sepharose y la aplicación de un gradiente lineal de pH. Se detectó la presencia de IgG1, IgG2 e IgG3 en las fracciones eluidas mediante doble inmunodifusión e inmunoelectroforesis, utilizando sueros comerciales anti IgG, anti IgG1, anti IgG2 y anti IgG3. El procedimiento desarrollado se caracterizó por su sencillez, elevada resolución y la relativa pureza de las subclases aisladas. Se logró un rendimiento total del 53,7 %, lo que indica la eficiencia del método.

A method for the purification of IgG1, IgG2, and IgG3 subclasses starting from Intacglobin by affinity chromatography with the use of protein A Sepharose and the application of a lineal gradient of pH is described. IgG1, IgG2 and IgG3 were detected in the eluted fractions by doble immunodifussion and immunoelectrophoresis by using anti IgG, anti IgG1, anti IgG2 and anti IgG3 commercial sera. The procedure developed was characterized by its simplicity, high resolution and the relative purity of the isolated subclasses. A total yield of 53.7 % was attained, which demonstrates the efficiency of this method.

Preparación de un conjugado peroxidasa-anti IgG humana (cadena ) en conejo / Preparation of a peroxidase-anti human IgG conjugate (chain g) in rabbit

Se preparó un conjugado con peroxidasa a partir de los anticuerpos específicos aislados de un suero de conejo anti cadenas g de la IgG humana. Los anticuerpos específicos se aislaron por cromatografía de afinidad, y el conjugado se preparó por el método de oxidación con peryodato. El conjugado obtenido presentó una relación molar IgG/peroxidasa de 1,07, un valor de RZ de 0,33 y resultó evaluado satisfactoriamente en cuanto a su especificidad y reactividad en los ensayos inmunoenzimáticos realizados.

A peroxidase conjugate was prepared starting from the specific antibodies isolated from an anti-chain rabbit serum and from human IgG. The specific antibodies were isolated by affinity chromatography and the conjugate was prepared by the method of oxidation with periodate. The conjugate obtained presented a molar IgG/peroxidase relation of 1.07, a RZ value of 0.33 and it was satisfactorily evaluated as regards its specificity and reactivity in the immunoenzimatic assays carried out.