Niveles séricos de factor de necrosis tumoral-α e interferón-γ en pacientes con dengue febril / Serum levels of tumor necrosis factor-α and interferon-γ in patients with dengue

Los monocitos/macrófagos constituyen las células diana para el virus dengue, activando linfocitos T, liberando citoquinas proinflamatorias como el Factor de Necrosis Tumoral alfa e Interferón gamma. El objetivo del estudio fue determinar TNF-α e IFN-γ en suero de pacientes dengue IgM positivo e IgM negativo, que concurrieron al Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, de febrero a abril 2007. Se realizó un estudio analítico en 163 sueros de pacientes con dengue, 143 IgM positivo y 20 IgM negativo, de ambos sexos con edad promedio de 30 y rango entre 18 a 70 años. El anticuerpo IgM para dengue y las citoquinas fueron determinados por ELISA de captura. En los 143 sueros dengue IgM positivo, el IFN-γ se detectó en 73% (104/143) con valores entre 558 y superiores a 2000 pg/ml y en el 27% (39/143) valores por debajo del punto de corte. Se encontró una diferencia estadísticamente significativa comparado con sueros dengue IgM negativo (p = < 0.005). El TNF-α se detectó en 24% (35/143) sueros IgM positivo, de los cuales 33 presentaron valores entre 45 a 176 pg/ml y 2 con valores superiores a 2000 pg/ml. No hubo significancia estadística comparando con sueros dengue IgM negativo (p = 0.26). Niveles elevados de IFN-γ y TNF-α podrían ser considerados marcadores de pronóstico para la progresión al dengue hemorrágico. Se debería tener en cuenta la potencial significancia terapéutica de estas citoquinas que podrían ayudar en las estrategias de inhibir o inducir perfiles de citoquinas adecuadas en respuesta al dengue.

Monocytes/macrophages are target cells for dengue virus, taking part in the activation of T lymphocytes, releasing proinflammatory cytokines such as tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interferon gamma (IFN-γ). The objective of this study was to determine TNF-α and IFN-γ in sera of dengue patients with IgM positive and negative who attended the Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud from February to April 2007. An analytical study was performed in 163 sera of dengue patients, 143 IgM positive and 20 IgM negative, men and women with an mean age of 30 years and a range from 18 to 70 years. The IgM antibody for dengue and the serum levels of cytokines were performed by capture ELISA. Serum levels of IFN-γ were detected in 73% (104/143) of the patients with dengue IgM positive, with values between 558 and higher than 2000 pg/ml, and in 27% (39/143) were below the cut-off value. A statistically significative difference was found when they were compared with dengue IgM negative sera (p=<0.005). TNF-α serum levels were detected in 24% (35/143) of the dengue IgM positive patients, 33 patients presented values between 45 and 176 pg/ml and 2 had values above 2000 pg/ml. No statistical significance was found when these values were compared with those of dengue IgM negative sera (p=0.26). IFN-γ and TNF-α high levels could be considered prognostic markers for progression to hemorrhagic dengue. The potential therapeutic significance of these cytokines should be considered as they could help in the strategies to inhibit or induce appropriate cytokine profiles in response to dengue virus.

Mantenimiento y titulación del virus de dengue para obtención de antígeno viral / Maintenance and titration of dengue virus for the obtainment of viral antigens

El dengue es un grave problema de salud pública que no posee vacuna ni tratamiento específico. El método de diagnóstico más utilizado es el serológico, específicamente, la detección de anticuerpos IgM anti-dengue. Los antígenos virales utilizados en este método pueden ser preparados en cultivo de células de Aedes albopictus (C6/36). El objetivo de este trabajo fue el mantenimiento de los cuatro serotipos virales (D1 (RIO), D2 (RIO), D3 (H-87), D4 (BV)) en células C6/36 para la futura preparación de antígenos virales. Las células C6/36 fueron cultivadas en medio L-15 con 10% de SFB a 28ºC, e infectadas con 50 ml de cada uno de los serotipos virales por 5 a 7 días. Una vez confirmada la infección por inmunoflurescencia indirecta, los virus fueron titulados por la técnica de placa de lisis. Los títulos de los serotipos fueron D1 (RIO) (2,9 x 106 PFU/ml), D2 (RIO) (4,4 x107 PFU/ml), D3 (H87) (6,4 x 107 PFU/ml) y D4 (BV) (5,1 x106 PFU/ml). La producción de antígenos virales es de gran importancia dado que los mismos pueden ser utilizados en diversos métodos diagnósticos.

Dengue is a serious public health problem that has neither vaccine nor specific treatment. Serology is the most frequently used diagnosis method, specifically the anti-dengue IgM detection. The viral antigens employed in this method could be prepared from Aedes albopictus cell cultures (C6/36). The objective of this study was to maintain the four viral serotypes (D1 (RIO), D2 (RIO), D3 (H-87), D4 (BV)) on C6/36 cells for the preparation of viral antigen in the future. The C6/36 cells were cultured in L-15 medium supplemented with 10% FCS, infected with 50 µl of each viral serotype and then incubated for 5-7 days at 28°C. After confirmation of the infection by indirect immunofluorescence (IIF), viral titration was performed by lysis plaque assay. The serotypes titres obtained were as follows: [2.9 x 106 PFU/ml] for D1 (RIO), (4.4 x107 PFU/ml) for D2 (RIO), (6.4 x 10 7 PFU/ml) for D3 (H87) and (5.1 x106 PFU/ml) for D4 (BV). The production of viral antigens is very important because they could be used in several diagnosis methods.

Implementación y evaluación de un sistema localmente sustentable de diagnostico prenatal que permite detectar casos de transmisión congénita de la enfermedad de Chagas en zonas endémicas del Paraguay / Implementation and evaluation of a locally sustainable system of prenatal diagnosis to detect cases of congenital Chagas disease in endemic areas of Paraguay

A locally sustainable system of prenatal screening of Trypanosoma cruzi infection has been implemented in rural health care centers of endemic areas in Paraguay A total of 61.091 women from Paraguari and Cordillera Departments were serologically evaluated, where 7.802 (12,7%) resulted to be anti-T. cruzi IgG positive. A total of 1,865 infants born to seropositive mothers were examined by parasitological techniques, such as direct microscopic observation and polymerase chain reaction, and serologically by ELISA, ELISA-SAPA and IFI. 104 infected babies were detected and treated with benznidazole. The recovery of babies born to seropositive mothers performing a single examination at the age of 6 months was significantly higher, as compared with the recommended method involving two examinations, both at birth and after 6 months of age. Although at 6 months of age in 7% of the infants maternal IgG was still detected. PCR was the most sensitive technique for early detection of T. cruzi infection in babies, but we do not recommend it use for diagnosis in high endemic areas, considering that for the screening of 815 babies, 2000 reactions were needed. We propose a strategy to detect congenital transmission of Chagas disease, based on a large-scale study, where the shortcomings of the different serological and parasitological techniques are discussed.

Clonación y expresión del ADNc para el activador tisular del plasminógeno en cèlulas de animales / Cloning and expresion of human tissue-type plasminogen activator cDNA in eukararyotic cells

Una alta expresión de tPA humana recombinante en células de hamster chino (CHO), fue obtenida usando el sistema de coamplificación del gen de la dehidrofolato reductasa (DHFR). La proteina fue secretada activa al medio de cultivo. En varios clones se mantuvo la producción estable, aun en ausencia de presión selectiva. No obstante, cuando el mismo ADN complementario fue clonado en un vector de expresión de baculovirus, sólo fue posible detectar niveles muy bajos de actividad tPA

Síntesis y secreción del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B en células de mamíferos / Synthesis and secretion of the hepatitis B surface antigen in mammalian cells

La infección por el virus de la hepatitis B (HBV), es uno de los problemas más serios de la humanidad. La utilización de células de mamíferos en cultivo para la producción de una vacuna contra el HBV, ofrece un conjunto de ventajas en comparación con otros sistemas celulares. Nosotros hemos producido el antígeno de superficie de la hepatitis tipo B (HBsAg) recombinante, en células CHO utilizando el sistema de amplificación DHFR/mtx. Se obtuvo una producción de 1 * HBsAg/10 a la 6 células/día, y el HBsAg recombinante fue caracterizado por microscopía electrónica y resultó similar a las partícyulas de HBsAg derivadas de plasma