Relationship of short tandem repeats flanking leptin-melanocortin pathway genes with anthropometric profile and leptinemia in Brazilian individuals / Relação de short tandem repeats (STR) em genes envolvidos na via da leptina-melanocortina com o perfil antropométrico e a leptinemia em brasileiros

OBJECTIVE: To investigate the relationship of short tandem repeats (STR) near genes involved in the leptin-melanocortin pathway with body mass index (BMI) and leptinemia. SUBJECTS AND METHODS: Anthropometric variables and leptinemia were measured in 100 obese and 110 nonobese individuals. D1S200, D2S1788, DS11912, and D18S858 loci were analyzed by PCR and high-resolution electrophoresis. RESULTS: Overall STR allele frequencies were similar between the obese and non-obese group (p > 0.05). Individual alleles D1S200 (17), D11S912 (43), D18S858 (11/12) were associated with obesity (p < 0.05). Individuals carrying these alleles showed higher BMI than non-carriers (p < 0.05). Moreover, a relationship between D18S858 11/12 alleles and increased waist circumference was found (p = 0.040). On the other hand, leptinemia was not influenced by the studied STRs (p > 0.05). CONCLUSIONS: D1S200, D11S912, and D18S858 loci are associated with increased BMI and risk for obesity in this sample.

OBJETIVO: Investigar a relação de short tandem repeats (STR) em genes envolvidos na via da leptina-melanocortina com índice de massa corporal (IMC) e leptinemia. SUJEITOS E MÉTODOS: Variáveis antropométricas e leptinemia foram medidas em 100 indivíduos obesos e 110 não obesos. Os loci D1S200, D2S1788, DS11912 e D18S858 foram analisados por PCR e eletroforese de alta resolução. RESULTADOS: As frequências globais dos alelos da STR foram similares entre os grupos obeso e não obeso (p > 0,05). Alelos individuais de D1S200 (17), D11S912 (43), D18S858 (11/12) foram associados com obesidade (p < 0,05). Indivíduos portadores desses alelos apresentaram valores de IMC maiores que os dos não portadores (p < 0,05). Além disso, a presença dos alelos D18S858 11/12 foi relacionada com circunferência abdominal elevada (p = 0,040). Por outro lado, a leptinemia não foi influenciada pelos STRs estudados (p > 0,05). CONCLUSÕES: Os loci D1S200, D11S912 e D18S858 são associados com IMC aumentado e risco de obesidade nesta amostra populacional.

Relationship between variants of the leptin gene and obesity and metabolic biomarkers in Brazilian individuals / Associação entre variantes do gene de leptina e obesidade e biomarcadores metabólicos em indivíduos brasileiros

OBJECTIVE: The relationship between variants of the leptin gene (LEP) and obesity and metabolic biomarkers was investigated in Brazilian individuals. SUBJECTS AND METHODS: One-hundred-ten obese (BMI > 30 kg/m²) and 100 non-obese individuals (145 women and 65 men, aged 49 ± 14 years) were randomly selected. Plasma leptin, glycemia, serum lipid measurements and LEP -2548G>A and 3'HVR polymorphisms were analyzed. RESULTS: The LEP -2548GG genotype was associated with a 2.2 percent and 2.0 percent increase in BMI (p = 0.009) and plasma leptin (p = 0.031), respectively. 3'HVR I/II (classes I/I+I/II) genotypes contributed with 1.8 percent of BMI values (p = 0.046). LEP I/G combined genotypes (I/IGG, I/IGA and I/IIGG) were associated with obesity, and increased BMI, waist circumference, leptin and triglycerides (p < 0.05). These relationships were found in women (p < 0.05) but not in men. LEP I/G combined genotypes were not associated with hypertension, hyperglycemia, dyslipidemia and coronary artery disease. CONCLUSIONS: LEP I/G combined genotypes are associated with obesity-related metabolic biomarkers and phenotype in a gender-dependent manner.

OBJETIVO: A relação entre as variantes do gene da leptina (LEP) e obesidade e biomarcadores metabólicos foi investigada em indivíduos brasileiros. SUJEITOS E MÉTOODS: Cento e dez indivíduos obesos (IMC > 30 kg/m²) e 100 não obesos (145 mulheres e 65 homens, idade 49 ± 14 anos) foram selecionados aleatoriamente. Leptina plasmática, glicemia, lípides séricos e polimorfismos LEP -2548G>A e 3'HVR foram analisados. RESULTADOS: O genótipo -2548GG foi associado com aumento de 2,2 por cento e 2,0 por cento no IMC (p = 0,009) e leptina plasmática (p = 0,031), respectivamente, enquanto os genótipos 3´HVR I/II (classes I/I+I/II) contribuíram com 1,8 por cento dos valores de IMC (p = 0,046). Os genótipos combinados LEP I/G (I/IGG, I/IGA e I/IIGG) foram associados com obesidade e IMC aumentado, circunferência abdominal, leptina e triglicérides aumentados (p < 0,05). Essas relações foram encontradas em mulheres (p < 0,05), mas não em homens. Os genótipos LEP I/G combinados não foram associados com hipertensão, hiperglicemia, dislipidemia e doença arterial coronariana. CONCLUSÕES: Genótipos combinados LEP I/G são associados com biomarcadores metabólicos e fenótipo de obesidade de forma gênero-dependente.

Bacteriophage: laboratorial diagnosis and phage therapy / Bacteriofagos: diagnóstico laboratorial e terapia fágica

Bacteriophages have been researched as a new alternative to antibiotics. These viruses inject their genetic material into bacteria and use their host machinery to multiply themselves. The research of bacteriophages in Brazil will certainly provide low-cost treatment of multidrug resistant bacteria, new microbiological diagnosis and advantages for the Brazilian food industry.

Bacteriófagos têm sido pesquisados como uma alternativa ao uso de antibióticos. Estes vírus infectam as bactérias e utilizam a maquinaria celular para multiplicar o próprio material genético. O estudo de bacteriófagos no Brasil levará ao desenvolvimento de tratamentos de baixo custo, novos testes diagnósticos e vantagens para a industria alimentícia.

Effects of APOE, APOB and LDLR variants on serum lipids and lack of association with xanthelasma in individuals from Southeastern Brazil

Xanthelasma might be a clinical manifestation of dyslipidemia, a recognized risk factor for coronary artery disease. We investigated the association of apolipoprotein E (APOE HhaI), apolipoprotein B (APOB XbaI and Ins/Del) and LDL receptor (LDLR AvaII and HincII) gene polymorphisms with lipid profiles in 100 Brazilians with xanthelasma and 100 controls. Allele frequencies were similar in both groups. APOE, APOB and LDLR genotypes were not correlated with differences in the serum lipid profile. In individuals with xanthelasma, the APOB D allele was associated with less chance of having increased LDL-cholesterol (O.R. = 0.16, CI95 percent = 0.03-0.94, p = 0.042). In the control group, the APOB X+ allele was associated with less chance of having both increased total cholesterol (O.R. = 0.16, CI95 percent = 0.03-0.78, p = 0.023) and increased LDL-cholesterol (O.R. = 0.10, CI95 percent = 0.02-0.60, p = 0.012). Moreover, there was a significantly higher frequency of control individuals (68 percent) with elevated serum triglyceride levels, compared to patients (48 percent, p = 0.008). On the other hand, triglyceride levels in controls also seemed to be influenced by all other gene polymorphisms studied, an effect that might be enhanced by environmental factors.

A novel point mutation in a class IV glucose-6-phosphate dehydrogenase variant (G6PD São Paulo) and polymorphic G6PD variants in São Paulo State, Brazil

In this study, we used red cell glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) activity to screen for G6PD-deficient individuals in 373 unrelated asymptomatic adult men who were working with insecticides (organophosphorus and carbamate) in dengue prevention programs in 27 cities in São Paulo State, Brazil. Twenty-one unrelated male children suspected of having erythroenzymopathy who were attended at hospitals in São Paulo city were also studied. Fifteen of the 373 adults and 12 of the 21 children were G6PD deficient. G6PD gene mutations were investigated in these G6PD-deficient individuals by using PCR-RFLP, PCR-SSCP analysis and DNA sequencing. Twelve G6PD A-202A/376G and two G6PD Seattle844C, as well as a new variant identified as G6PD São Paulo, were detected among adults, and 11 G6PD A-202A/376G and one G6PD Seattle844C were found among children. The novel mutation c.660C > G caused the replacement of isoleucine by methionine (I220M) in a region near the dimer interface of the molecule. The conservative nature of this mutation (substitution of a nonpolar aliphatic amino acid for another one) could explain why there was no corresponding change in the loss of G6PD activity (64.5 percent of normal activity in both cases).

Leptin G-2548A promoter polymorphism is associated with increased plasma leptin and BMI in Brazilian women / Polimorfismo do promotor do gene da leptina está associado ao aumento de leptina plasmática e IMC em mulheres brasileiras

Variants in leptin gene (LEP) have been implicated in the pathogenesis of obesity. The relationship between LEP G-2548A polymorphism and obesity-related traits was evaluated in a sample of Brazilian women (n = 228) who were randomly selected from two clinical centers in Sao Paulo city. Blood samples were collected for DNA extraction, plasma leptin and serum lipids measurements. LEP G-2548A genotypes were identified by a PCR- RFLP strategy using the endonuclease Alw44I. LEP G-2548A was associated with obesity after adjustment for covariates (age, hypertension, coronary artery disease, smoking and physical activity). Women carrying G allele had a four times higher risk of obesity than the A allele carriers (OR: 4.11, CI95 percent: 1.06-15.90, p = 0.041). G allele was also related to increased plasma leptin (p = 0.024) and body mass index (p = 0.027). Hypertension, hyperglycemia, dyslipidemia and coronary artery disease were associated with obesity. However LEP G-2548A polymorphism was not related to these variables. All together these data suggest that LEP G-2548A polymorphism has an important role in regulating plasma leptin levels and body mass index in women.

Variantes no gene da leptina (LEP) foram implicados na patogênese da obesidade. A relação entre o polimorfismo LEP G-2548A e as características relacionadas com a obesidade foram avaliadas em mulheres brasileiras (n = 228), que foram selecionadas randomicamente de dois centros de pesquisa clínica na cidade de São Paulo. As amostras de sangue foram coletadas para extração de DNA e determinações de leptina plasmática e lipídeos séricos. Os genótipos do LEP G-2548A foram identificados pela estratégia de PCR-RFLP, empregando a endonuclease Alw44I. O polimorfismo LEP G-2548A foi associado com obesidade, após ajuste para as covariáveis: idade, hipertensão, doença arterial coronariana, tabagismo e atividade física. Mulheres com alelo G tiveram quatro vezes maior risco de obesidade que as portadoras do alelo A (OR: 4,11, CI95 por cento: 1,06-15,90; p = 0,041). O alelo G também foi relacionado com leptina plasmática (p = 0,024) e o índice de massa corporal (p = 0,027) aumentado. A hipertensão, a hiperglicemia, a dislipidemia e a doença arterial coronariana foram associadas com obesidade. Entretanto, o polimorfismo LEP G-2548A não foi relacionado com essas variáveis. Os resultados deste estudo são sugestivos de que o polimorfismo LEP G-2548A tem papel importante na regulação da leptina plasmática e no índice de massa corporal em mulheres.

Micrométodo para extraçäo de DNA genômico útil no diagnóstico molecular da Hipercolesterolemia Familial / A micromethod for DNA extraction useful in the molecular diagnostic of Familial Hypercholesterolemia

Os métodos para para extraçäo de DNA empregados hoje em dia na rotina laboratorial, utilizam grandes volumes de sangue, o que constitui um problema quando se usam amostras pediátricas. Outros métodos envolvem várias etapas, näo sendo adequadas para rotina laboratorial. No presente trabalho, foi desenvolvido um mátodo rápido de extraçäo de DNA de sangue total para pequenos volumes de amostra. Brevemente, volumes iguais de sangue total e NaI a 6M foram misturados. A seguir, as proteínas e debris celulares foram removidas por adiçäo de uma mistura de clorofórmio/álcool isoamílico (24:1). O DNA foi isolado da fase aquosa e purificado com isopropanol. Amostras de DNA foram também extraídas pelo método de precipitaçäo salina, previamente desenvolvido em nosso laboratório. A quantificaçäo e a pureza do DNA foram realizadas por espectrofotometria em 260 e 280 nm, sendo a sua integridade verificada por eletroforese em gel de agarose a 1 porcento. A quantidade de DNA de sangue total obtida pelo método proposto foi 1,5 vezes superior à obtida pela técnica de precipitaçäo salina (28,6 ñ 7,8 vs. 19,1 ñ 3,5µg/ml de sangue, respectivamente; p=0,0003). A pureza do DNA foi também superior (A subscrito 260/280=1,73ñ0,18 vs. 1,61ñ0,06, respectivamente; p=0,0164). Utilizando o DNA extraído pelo micrométodo, obtivemos sucesso na triagem de alteraçöes genéticas no receptor da LDL e na apolipoproteína B em pacientes com Hipercolesterolemia Familial (HF). Em resumo, o procedimento de extraçäo de DNA é simples, rápido e aplicável para obtençäo de DNA genômico de alta qualidade em 30 minutos, sendo portanto, útil no diagnóstico molecular da HF

Avaliaçäo do desempenho analítico da determinaçäo de uréia sérica por método enzimático / Evaluation of the analytical performance of the urea assay in serum by enzymatic method

A uréia é um produto do metabolismo dos aminoácidos no organismo humano e sua análise é relevante na avaliação das funções renal e hepática. A determinação da uréia é usualmente realizada por métodos colorimétricos e enzimáticos, que devem ser avaliados para implantação na rotina laboratorial. Com a finalidade de avaliar o desempenho analítico de método enzimático no UV para a determinação da concentração de uréia sérica, por procedimentos manual e automatizado, foram analisados materiais de referência, de controle e 30 amostras de soro provenientes do Hospital Universitário da USP. Embora os dados de desempenho analítico tenham mostrado que o procedimento automatizado apresenta maior grau de precisão e exatidão (C.V.-1,9 por cento, C.D.-3,3 por cento) que o manual (C.V.-5,0 por cento, C.D.-5,0 por cento) não se observou diferença significativa entre os resultados obtidos pelos dois procedimentos, utilizando materiais de referência certificado ou materiais de controle...

Analysis of Treponema pallidum recombinant antigens for diagnosis of syphilis by Western blotting technique

Os antigenos recombinantes de Treponema pallidum GST-rTp47, GST-rTp17 e GST-rTp15, produzidos em fusao com glutationa S-transferase (GST) em E. coli, foram analisados quanto ao potencial diagnostico da sifilis pela tecnica de Western blotting. Foram testadas 53 amostras, sendo 25 pacientes em diferentes estagios clinicos da sifilis, com resultados positivos no teste treponemico classico; 25 amostras procedentes de doadores de banco de sangue, com sorologia negativa e 3 de pacientes com doenca sexualmente transmissivel nao relacionado a sifilis. Todas as amostras de pacientes com sifilis apresentaram alta reatividade com o antigeno GST-rTp17...

Polimorfismo Ava II do gene do receptor da LDL: um marcador genético útil na avaliação da resposta terapêutica em indivíduos hipercolesterolêmicos / Ava II polymorphism at the LDL receptor gene: an useful genetic marker for evaluation of the pharmacological response in hypercholestolemic individuals

A natureza polimórfica do gene do receptor da lipoprotéica de Baixa Densidade (RLDL) já foi previamente demosntrada pela identificação de vários polimorfismos nesse locus. Entretanto, o efeito dessas alterações genéticas sobre as concentrações séricas de liídios e a resposta ao tratametno farmacológico da hipercolesterolemia precisa de estudos mais específicos. Nesse trabalho foi avaliado o efeito do polimorfismo Ava II (exon 13) do gene RLDL sobre a resposta ao tratamento com fluvastatina (inibidor da enzima HMG-CoA redutase) em 55 individuos hipercolesterolêmicos (36 a 70 anos). O DNA genômico foi extraído dos leucócitos sanguineos pela técnica de precipitação salina. A região polimórfica Ava II do gene RÇDL foi amplificada pela técnica PCR e analisada por isotipagem enzimática. Nesses indivíduos, o genótipo homozigoto para a presença de sitios de restrição (A+A+) foi associado a concentrações séricas mais altas de colesterol total, LDL-C, VLDL-C e apoB-100 (p=0,0001) quando comparado aos outros genótipos. Adicionalmente, indivíduos portadores do genótipo A-A- apresentaram uma melhor resposta terapêutica à fluvastatina (P< 0,05). Os resultados indicam que o polimorfismo Ava II do RLDL contribui para a variabilidade dos lipídeos séricos no grupo estudado, constituindo-se um marcador genético útil na avaliação precoce de risco para as doenças cardiovasculares e para o seguimento da terapia hipocolesterolemiante.

Extração de DNA de coágulo sanguíneo humano como método alternativo para estudos de genotipagem / DNA extraction from clotted human blood as a alternative method for genotyping studies

Foi otimizado um método de extração de DNA de coágulo sangüíneo. Amostras de sangue total colhidas em EDTA e de coágulo foram obtidas de 10 indivíduos não aparentados. Os coágulos foram homogeneizados (sistema Potter-Elvelyn NSE-11R). O DNA foi extraído pelo método de precipitação salina modificado (Clin.Chem.42-S298,1996). A quantificação e a pureza do DNA foram realizadas por espectrofotometria em 260 e 280 nm, sendo a sua integridade verificada por eletroforese em gel de agarose. A qualidade do DNA foi avaliada por amplificação da região polimórfica Ava II do gene do receptor da LDL, por PCR. A quantidade de DNA de coágulo foi semelhante a de sangue total (61,5 ± 11,9 e 60,6 ± 12,6 mg/ml de sangue, respectivamente). A pureza do DNA de coágulo foi semelhante a de sangue total (A260/280=1,87 ± 0,19 e 1,96 ± 0,17, respectivamente). As amostras de DNA apresentaram-se intactas no gel de agarose e sem contaminação com RNA. O rendimento do DNA obtido por este método dói maior que o dos descritos em outros estudos e mostrou-se adequado para análise do polimorfismo genético do receptor da LDL. Portanto, o procedimento de extração de DNA, otimizado em nosso laboratório, é simples, rápido e aplicável para obtenção de DNA de alta qualidade de amostras de coágulo sangüíneo, sendo útil em estudos de genotipagem.

Avaliação das enzimas séricas em pacientes com tumores malignos / Enzime evalluation in serum of patients with malignancies

Foram determinadas as atividades da lactato desidrogenase (LD), creatina-quinase CK), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), gama-glutami transpeptidase (gama-GT) e fosfatase alcalina (ALP), bem como das isoenzimas da LD e da fração B da CK (CK-B), no soro de indivíduos portadores de tumores malignos primários em vários órgãos. Entre as enzimas estudadas, a relação CK-B/CK-Total (%CK-B), foi o parâmetro mais sensível na detecção desses processos neoplásticos, principalmente como indicador da presença de metástases. As isoenzimas LD4 e LD5 revelam-se mais específicas que a LD total na detecção do câncer. Gama-GT e ALP foram as enzimas mais indicativas de comprometimento hepático de origem metastática.