RESUMO
Mutations located in the 109-amino acid fragment of NS5B are typically associated with resistance to interferon (IFN) and ribavirin (RIB) and to new antiviral drugs. The prevalence of these mutations was examined in 69 drug-naïve individuals with hepatitis C virus (HCV) infections in Rio de Janeiro, Brazil. Mutations related to non-response to IFN/RIB were observed in all subtypes studied (1a, 1b, 2b, 3a and 4). The most common mutation was Q309R, present in all subtypes, except subtype 2b with frequency above 20 percent. D244N was detected only in subtype 3a and A333E was detected only in subtype 2b. We did not detect the S282T, S326G or T329I mutations in any of the samples analysed. Of note, the C316N mutation, previously related to a new non-nucleoside compound (HCV796 and AG-021541), was observed in only eight of 33 (24 percent) samples from subtype 1b. Site 316 was under positive selection in this HCV variant. Our data highlight the presence of previously described resistance mutations in HCV genotypes from drug-naïve patients.
Assuntos
Adulto , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Feminino , Humanos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Antivirais/farmacologia , Farmacorresistência Viral/genética , Hepacivirus/genética , Hepatite C/virologia , Interferons/farmacologia , Ribavirina/farmacologia , Proteínas não Estruturais Virais/genética , Antivirais/uso terapêutico , Genótipo , Hepacivirus/efeitos dos fármacos , Hepatite C/tratamento farmacológico , Interferons/uso terapêutico , Mutação/genética , Filogenia , Reação em Cadeia da Polimerase , Ribavirina/uso terapêutico , Alinhamento de SequênciaRESUMO
Neste trabalho é descrita uma nova abordagem para inserção e expressão de epítopos heterológicos na proteína E do envelope do vírus da febre amarela (FA) 17D. O sítio escolhido foi a alça EoFo do domínio I ou central da proteína E. Para permitir a expressão destes antígenos na superfície externa da partícula viral, a seleção desta região foi baseada no alinhamento das seqüências de aminoácidos da proteína E de diferentes Flavivírus e no modelo tri-dimensional criado para a proteína E do vírus FA. Três estratégias de clonagem envolvendo diferentes mutações, deleções ou duplicação de resíduos de aminoácidos da alça EoFo foram aplicadas para a inserção de um epítopo exógeno repetitivo - (NANP)3. Este determinante antigênico pertence ao domínio central da proteína CS de Plasmodium falciparum e induz resposta imune humoral. Foram então desenvolvidos três novos vírus FA vetores parentais e três vírus FA recombinantes expressando o epítopo malárico. Os diferentes vírus foram capazes de replicarem-se em células Vero, porém em uma taxa abaixo do controle vacinal vírus FA 17DD. Estas construções virais mostraram-se geneticamente estáveis durante 10 passagens seriadas em células Vero com m.o.i. conhecida (0,02), apesar de terem sido detectadas algumas mutações pontuais que levaram à troca de aminoácidos na proteína E. Além disso, os vírus FA recombinantes expressando (NANP)3 foram menos virulentos em relação à linhagem vacinal 17DD, quando inoculados por via intra cerebral em camundongos. Após a inoculação em camundongos, os vírus recombinantes foram capazes de induzir resposta imune dirigida ao vírus FA, assim como ao epítopo malárico. Todas as etapas de caracterização biológica das novas construções virais mostraram que as mudanças genéticas introduzidas no genoma do vírus FA não comprometeram a estrutura e função virais. Estes resultados realçam o potencial uso deste sítio para o desenvolvimento de novas vacinas atenuadas baseadas no vírus 17D.