Diagnóstico micológico por técnicas no convencionales en el siglo XXI / Mycological diagnosis by non-conventional techniques in the 21st century

Introducción: En la actualidad las infecciones fúngicas representan un problema para la salud humana. Las infecciones causadas por especies patógenas de hongos registran un incremento constante y se ubican entre el cuarto y décimo lugar como causa de muerte, particularmente en las unidades de cuidado intensivo. Un diagnóstico adecuado y precoz impacta directamente en la morbilidad y mortalidad asociadas a estas. Objetivo: Describir las principales técnicas de diagnóstico no convencional de las enfermedades fúngicas más frecuentes, en especial las relacionadas con el diagnóstico serológico y molecular. Métodos: Se realizó una revisión de la literatura científica sobre el tema, publicada entre 2000 y 2019. Se revisaron un total de 63 trabajos. Como motores de búsqueda se emplearon Google y Google Scholar. Se revisaron las bases de datos Medline, PubMed, Science Direct, BUCea y SciELO. Análisis y síntesis de la información: Las técnicas serológicas se emplean en el diagnóstico de las micosis invasivas o sistémicas por ser fáciles, rápidas y confiables. La detección de anticuerpos tiene utilidad limitada en el diagnóstico de las micosis invasivas debido a que la respuesta puede estar retrasada, reducida o no existir en pacientes inmunocomprometidos. La detección de componentes no antigénicos liberados por los hongos durante la infección y la secuenciación de ácidos nucleicos fúngicos son otras opciones para el diagnóstico de las micosis. Conclusiones: El desarrollo biotecnológico aporta nuevas herramientas que incrementan las oportunidades de identificación de las micosis. En la actualidad se disponen de métodos basados tanto en la detección de marcadores inmunológicos como de elementos moleculares específicos. La eficacia de las herramientas no convencionales para el diagnóstico depende de la correcta combinación de estas(AU)

Introduction: Fungal infections are a current human health problem. Infections caused by pathogenic fungal species constantly increase in number, and are ranked between the fourth and tenth leading causes of death, particularly in intensive care units. Early accurate diagnosis has a direct impact on the morbidity and mortality of fungal infections. Objective: Describe the main non-conventional diagnostic techniques for the most common fungal diseases, especially those related to serological and molecular diagnosis. Methods: A review was conducted of the scientific literature about the topic published between the years 2000 and 2019. A total 63 publications were reviewed. The search engines used were Google and Google Scholar. The databases Medline, PubMed, Science Direct, BUCea and SciELO were reviewed. Data analysis and synthesis: Serological techniques are used for the diagnosis of invasive or systemic mycoses because they are easy, fast and reliable. The detection of antibodies has a limited usefulness in invasive mycosis diagnosis, for the response may be delayed, reduced or inexistent in immunocompromised patients. Detection of non-antigenic components released by fungi during infection and sequencing of fungal nucleic acids are other mycosis diagnosis options. Conclusions: Biotechnological development contributes new tools increasing mycosis identification opportunities. Methods are currently available which are based on detection of immunological markers and specific molecular elements. The efficacy of non-conventional diagnostic tools depends on their appropriate combination(AU)

Aportes del Laboratorio de Micología del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí al desarrollo de la especialidad en Cuba / Contributions of the Mycology Laboratory at Pedro Kouri Tropical Medicine Institute to the development of the specialty in Cuba

En el marco del 80 aniversario del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, se exponen en apretada síntesis, las actividades más relevantes en el campo del diagnóstico, la investigación y la docencia desarrolladas hasta el momento por el Laboratorio de Micología de la referida institución. A 38 años de su creación, este sigue siendo uno de los pocos lugares en Cuba que se desempeña en este campo y que se reconoce por los logros científico-técnicos alcanzados. Sin lugar a duda, estos responden básicamente al cuadro de salud nacional, sin descuidar el entorno regional y mundial. Todos los resultados que se exponen, se encuentran sustentados por más de 100 publicaciones y otras obras científicas, lo que avala la calidad y rigor del trabajo desplegado. Sirva este artículo para homenajear al fundador del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí y a todos los científicos que en el transcurso de estos años contribuyeron a engrandecer su nombre(AU)

In the framework of the 80th anniversary of Pedro Kouri Tropical Medicine Institute, a succinct presentation is provided of the most relevant activities in the fields of diagnosis, research and teaching so far performed by the Mycology Laboratory at the Institute. Thirty-eight years after its founding, the Laboratory continues to be one of the few places in Cuba devoted to this field and recognized for its scientific and technical achievements, which no doubt essentially respond to the national health status, without neglecting the regional and global environment. All the results presented are endorsed by over 100 publications and scientific works, which is evidence of the quality and rigor of the work done. May this paper be a tribute to the founder of Pedro Kouri Tropical Medicine Institute and all the scientists who have brought prestige to its name throughout these years(AU)

Caracterización molecular de los aislamientos de Cryptococcus neoformans de pacientes con HIV, Guayaquil, Ecuador / Molecular characterization of Cryptococcus neoformans isolates from HIV patients, Guayaquil, Ecuador

Resumen Introducción. La neurocriptococosis es una infección fúngica oportunista que representa un alto costo en vidas humanas y para la economía de los países. Sus agentes causales, las especies del complejo Cryptococcus neoformans/Cryptococcus gattii, tienen una fase sexuada y otra asexuada, cuatro serotipos principales y siete variedades moleculares con diferencias clínico-epidemiológicas, fenotípicas y de sensibilidad a los antifúngicos. Objetivo. Caracterizar molecularmente los aislamientos clínicos de C. neoformans de Guayaquil, Ecuador. Materiales y métodos. Se determinó el tipo de apareamiento, el serotipo y la variedad molecular mediante reacción en cadena de la polimerasa y análisis del polimorfismo de los fragmentos de restricción de 27 aislamientos levaduriformes previamente identificados como C. neoformans mediante métodos convencionales. Los aislamientos fueron recuperados del líquido cefalorraquídeo de pacientes con síndrome neurológico seropositivos para HIV, internados en el Hospital de Infectología "Dr. José Daniel Rodríguez Maridueña", entre diciembre de 2013 y enero de 2015. Resultados. Se demostró el amplio predominio de C. neoformans del serotipo A, MATα y el genotipo VNI entre los aislamientos estudiados. Conclusiones. Estos datos son similares a los obtenidos en otros países y son los primeros de su tipo en Guayaquil, Ecuador, por lo cual constituyen un aporte importante al conocimiento de la criptococosisen esta ciudad.

Abstract Introduction: Neurocryptococcosis is an opportunistic fungal infection that represents a high cost in human lives and for the economy of countries. Its causative agent, the Cryptococcus neoformans/Cryptococcus gattiispecies complex, has a sexual and an asexual phase, four major serotypes and seven molecular varieties with phenotypic, clinical-epidemiological and antifungal susceptibility differences. Objective: To characterize by molecular methods clinicalisolates of C. neoformans from Guayaquil, Ecuador. Materials and methods: We determined mating types, serotypes and molecular varieties by PCR and RFLP in 27 yeast isolates previously identified as C. neoformans by conventional methods. The isolates were recovered from cerebrospinal fluid of HIV seropositive patients with neurological syndrome admitted at "Dr. José Daniel Rodríguez Maridueña" Hospital from December, 2013, to January, 2015. Results: We established a wide prevalence of C. neoformans serotype A, MATαand genotype VNI among the studied isolates. Conclusions: These data are similar to those obtained in other countries and the first identified by molecular characterization in Guayaquil, Ecuador. Therefore, they constitute an important contribution to the knowledge on cryptococcosis in this country.

Susceptibilidad antifúngica de aislados vaginales de Candida spp / Antifungal susceptibility of Candida spp. vaginal isolates

Introducción: la vulvovaginitis constituye una de las principales afecciones ginecológicas, y su causa más frecuente es la candidiasis. Candida albicans se considera el agente etiológico más importante de esta entidad; sin embargo, estudios recientes revelan un incremento en la incidencia de otras especies del género. Algunas de estas tienen la particularidad de presentar resistencia a los tratamientos usuales con antimicóticos. Objetivo: evaluar la susceptibilidad antifúngica de aislados vaginales de pacientes cubanas con sospecha de candidiasis vulvovaginal que se obtuvieron en el 2015. Métodos: a 28 aislados pertenecientes al género Candida, se les realizó las pruebas de susceptibilidad in vitro con la galería ATBTM Fungus 3 frente a diferentes antifúngicos (5-fluorocitosina, anfotericina B, fluconazol, itraconazol y voriconazol). Resultados: todos los aislados fueron sensibles a la anfotericina B y uno de C. albicans se informó resistente a los azoles estudiados. Todas las especies diferentes de C. albicans fueron susceptibles al voriconazol (CMI≤ 1 mg/L). Conclusiones: el estudio de patrones de susceptibilidad en aislados de Candida provenientes de mujeres con vulvovaginitis permite profundizar en cómo abordar la terapéutica de esta afección; el fluconazol resultó el tratamiento de elección. Los resultados alertan sobre la emergencia de C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. inconspicua y C. lusitaniae como agentes causales de la candidiasis vulvovaginal(AU)

Introduction: vulvovaginitis is one of the main gynecological diseases frequently caused by candidiasis. Candida albicans is considered as the most important etiological agent for the disease; however, recent students have revealed an increased incidence of other species of the genus. Some of them may show particular resistence to usual antimycotic treatments. Objective: to evaluate the antifungal susceptibility of vaginal isolates from Cuban female patients suspected of vulvovaginal candidiasis in 2015. Methods: twenty eight Candida genus isolates underwent in vitro susceptibility tests with ATBTM Fungus 3 using several antifungal agents (5 fluorocytosine, anphotericin B, fluconazole, itraconazole and vorixonazole). Results: all isolates were susceptible to B anphotericin and one C. albicans isolate was reported as resistant to the studied azoles. All the species other thanC. albicans were susceptible to voriconazole (CMI≤ 1mg/L). Conclusions: the study of susceptibility patterns in Candida isolates from women with vulvovaginitis allow delving into the different ways of approaching the therapeutics of this disease; fluconazole was the treatment of choice. The results show emergence of C. glabrata,C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. inconspicua and C. lusitaniae as causative agents of vulvovaginal candidiasis(AU)

Presentación de siete casos de tiña negra en niños / Reports of seven cases of tinea nigra in children

Introducción: la tiña negra es una micosis superficial causada por el hongo Hortaea werneckii. Se considera una micosis benigna que por lo general es observada en países tropicales. Objetivo: reportar siete casos de tiña negra en niños de dos hospitales de La Habana, Cuba. Métodos: se realizó estudio micológico (examen directo y cultivo) a partir de escamas tomadas mediante raspado de las lesiones a siete niños con diagnóstico clínico presuntivo de tiña negra palmar. Se registraron las características de las lesiones, edad, sexo y factores predisponentes de los pacientes, así como la evolución del cuadro con el tratamiento antifúngico. Resultados: se confirmó la sospecha clínica de tiña negra a través del aislamiento e identificación de Hortae werneckii. Las edades de los pacientes oscilaron entre 3 y 6 años y el 57 por ciento era del sexo femenino. La hiperhidrosis se encontró en el 43 por ciento de los casos. El tratamiento específico con antifúngicos azólicos y terbinafina tópicos fue satisfactorio en 21 días como promedio. Conclusiones: todos los casos con sospecha de tiña negra fueron confirmados de manera oportuna en el laboratorio, lo que permitió descartar enfermedades malignas y aplicar tratamiento específico(AU)

Diagnóstico molecular de histoplasmosis diseminada en pacientes cubanos con sida / Molecular diagnosis of disseminated histoplasmosis in Cuban aids patients

Introducción: Histoplasma capsulatum es el agente causal de la histoplasmosis. La forma diseminada de esta micosis de no ser tratada suele ser fatal. Objetivo: evaluar el empleo de sangre periférica para el diagnóstico molecular de histoplasmosis diseminada y comparar sus resultados con el cultivo y la detección de anticuerpos específicos. Métodos: se determinó la presencia de ADN de Histoplasma capsulatum a partir de 12 muestras de sangre de pacientes con sida y sospecha clínica de histoplasmosis diseminada, mediante dos sistemas de reacción en cadena de la polimerasa (una simple y otra anidada, que amplifican un fragmento de la región ITS y del gen Hcp100, respectivamente). Se compararon los resultados con el cultivo y la serología. Resultados: mediante la reacción en cadena de la polimerasa simple y anidada se diagnosticó con histoplasmosis diseminada a los 12 pacientes. Por cultivo resultaron positivos 6 casos (50 por ciento). Mientras que la presencia de anticuerpos anti-Histoplasma capsulatum se determinó en 3 casos (25 por ciento). Los sistemas de reacción en cadena de la polimerasa empleados mostraron elevada sensibilidad, especificidad analítica y diagnóstica en la detección de Histoplasma capsulatum en esta forma clínica. Conclusiones: los resultados del estudio sugieren que las técnicas de reacción en cadena de la polimerasa aumentan la fiabilidad del diagnóstico de la histoplasmosis cuando se utiliza en combinación con los métodos establecidos. Los sistemas de reacción en cadena de la polimerasa aplicados al diagnóstico de histoplasmosis diseminada en pacientes con sida probaron ser sistemas rápidos, específicos y sensibles(AU)

Introduction: Histoplasma capsulatum is the causal agent of histoplasmosis. If not treated, the disseminated form of this mycosis is often fatal. Objective: evaluate the use of peripheral blood for the molecular diagnosis of disseminated histoplasmosis and compare the results with those obtained by culture and detection of specific antibodies. Methods: the presence of Histoplasma capsulatum DNA was determined from 12 blood samples from patients with AIDS and clinical suspicion of disseminated histoplasmosis, using two polymerase chain reaction systems (one simple and one nested, amplifying a fragment of the ITS region and the Hcp100 gene, respectively). The results were compared with those obtained by culture and serology. Results: all 12 patients were diagnosed with disseminated histoplasmosis by simple and nested polymerase chain reaction. Culture results were positive in 6 cases (50 percent), whereas the presence of anti-Histoplasma capsulatum antibodies was determined in 3 cases (25 percent). The polymerase chain reaction systems used showed high sensitivity, and analytical and diagnostic specificity for detection of this clinical form of Histoplasma capsulatum. Conclusions: results suggest that polymerase chain reaction techniques increase the reliability of histoplasmosis diagnosis when used in combination with established methods. When used for the diagnosis of disseminated histoplasmosis in AIDS patients, polymerase chain reaction systems proved to be fast, specific and sensitive(AU)

Conservación de cultivos de hongos de importancia médica en agua destilada / Preservation of fungal cultures of medical importance in distilled water

Introducción: en la colección de cultivos de hongos patógenos del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, como centro de referencia nacional, se conservan los agentes causales de las principales micosis humanas, con fines de diagnóstico, investigaciones y enseñanza de la microbiología médica. La conservación de cultivos fúngicos en agua destilada estéril o método de Castellani ha sido avalada como un método que garantiza porcentajes elevados de viabilidad, pureza y estabilidad de las cepas; esto unido a su bajo costo y sencillez, la convierte en una alternativa ventajosa para el mantenimiento de los microorganismos en muchos laboratorios. Objetivo: mostrar los resultados en la preservación en agua destilada estéril de las principales especies fúngicas que integran esta colección. Métodos: se evaluó la viabilidad, pureza y estabilidad de las principales características morfológicas y fisiológicas de 240 cepas de diferentes especies fúngicas pertenecientes a la colección, conservadas en agua destilada estéril. Resultados: de los cultivos, 80 por ciento se conservó en estado viable y sin contaminaciones. Los mejores resultados se obtuvieron en la preservación de los hongos productores de abundantes conidios (97 por ciento de recuperación) y las levaduras (83 por ciento), mientras que con los dermatofitos y hongos dimórficos fue de 69 y 68 por ciento, respectivamente. En 17 géneros, la recuperación de cepas viables fue superior a 60 por ciento, mientras que en 8 resultó de 100 por ciento. El tiempo de conservación fue de 15 a 20 años. Se implementó una base de datos en formato digital de la colección sobre plataforma web. Conclusiones: el método de Castellani es un método de elección para la conservación de cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados

Introduction: causal agents of the main human myicoses have been preserved in the culture collection of pathogenic fungi at Pedro Kourí Tropical Medicine Institute, a national reference center, with the purpose of using them for medical microbiology diagnoses, research and teaching. Preservation of fungal cultures in sterile distilled water, or Castellani's method, has been endorsed as a method ensuring high rates of strain viability, purity and stability, low costs and great simplicity. It is therefore an advantageous alternative for the maintenance of microorganisms in many laboratories. Objective: present the results obtained from the preservation in sterile distilled water of the main fungal species included in the collection. Methods: an evaluation was conducted of the viability, purity and stability of the main morphological and physiological characteristics of 240 strains of different fungal species from the collection, which had been preserved in sterile distilled water. Results: 80 percent of the cultures had retained their viable status without any contamination. The best results corresponded to the preservation of fungi producing abundant conidia (97 percent recovery) and yeasts (83 percent), followed by dermatophytes (69 percent) and dimorphic fungi (68 percent). In 8 genera, recovery of viable strains was 100 percent, and in 17 it was above 60 percent. Preservation time was 15-20 years. A web-based digital database was created for the collection. Conclusions: Castellani's is the method of choice for the preservation of fungal cultures in resource-limited laboratories

Contribución al estudio de la criptococosis infantil en Cuba / Contribution to the study of infant cryptococosis in Cuba

Introducción: a partir de 1998 en el laboratorio de micología del Instituto Pedro Kourí se observó un incremento del número de aislamientos de Cryptococcus obtenidos de niños seronegativos al VIH con meningoencefalitis. Los reportes de criptococosis infantil a nivel mundial son infrecuentes y generalmente se encuentran asociados al sida. Objetivo: estudiar la criptococosis infantil en Cuba a través de la evaluación integral de 7 casos. Métodos: se realizó un estudio retrospectivo integral, se revisaron las historias clínicas de 7 pacientes pediátricos afectados por criptococosis menigoencefálica y se caracterizaron los aislamientos obtenidos (uno de cada paciente). A estos se les determinó la especie, variedad, serotipo, patogenicidad en un modelo murino y susceptibilidad a la anfotericina B. Resultados: la edad media de los niños fue de 5,8 años, con ligero predominio del sexo femenino (4:3). Los síntomas más frecuentes resultaron la cefalea, fotofobia, fiebre y los vómitos. En 6 pacientes el estudio citoquímico del líquido cefalorraquídeo y el examen imaginológico de cráneo evidenciaron anomalías. El diagnóstico microbiológico se realizó mediante examen directo y cultivo. Todos los aislamientos correspondieron con Cryptococcus neoformans serotipo A y la anfotericina B mostró una concentración mínima inhibitoria menor o igual que 0,125 mg/mL. El 85,7 porciento mostró actividad fenoloxidasa y elevada letalidad en los animales infectados (71,4-100 porciento). Conclusiones: el pronóstico de la meningoencefalitis por Cryptococcus está estrechamente ligado a un diagnóstico precoz. Esta realidad hace que deba tenerse siempre presente, por lo que los datos aportados bien pudieran servir de alerta a los médicos de asistencia

Introduction: since 1998, an increasing number of Cryptococcus isolates obtained from HIV-negative children with meningoencephalitis was observed in the mycology laboratory at Pedro Kourí Institute. The global reports of child cryptococcosis are rare and usually associated with AIDS. Objectives: to study child cryptococosis in Cuba through the comprehensive evaluation of 7 cases. Methods: the clinical histories of seven pediatric patients with cryptococcal meningoencephalitis were examined and the obtained isolates (one per patient) were characterized. The species, variety, serotype, pathogenicity in a mouse model and amphotericin B susceptibility of the isolates were determined. Results: average age of the children was 5.8 years, with a slight female predominance (4:3). The most common symptoms were headache, photophobia, fever and vomiting. The cytochemical study of cerebral spinal fluid and skull imaging test showed abnormalities in 6 patients. The microbiological diagnosis was made through direct examination and culture. All the isolates were from Cryptococcus neoformans serotype A and amphotericin B showed a minimum inhibitory concentration £ 0.125 mg/mL. In the group, 85.7 percent showed phenoloxidase activity and high lethality rate in infected animals (71.4 to 100 percent). Conclusions: the prognosis of cryptococcal meningoencephalitis is closely linked to early diagnosis, therefore, this should be always kept in mind and the provided data from this study may serve as warning to attending physicians

Conservación de cultivos fúngicos de alto riesgo de Histoplasma y Cryptococcus / Preservation of high risk fungal cultures of Histoplasma and Cryptococcus

Introducción: las colecciones de cultivos microbianos son las encargadas de garantizar el material biológico requerido para el desarrollo de las ciencias biológicas. Entre los métodos de conservación de cultivos fúngicos, la inmersión en agua destilada, por su bajo costo y sencillez, constituye una ventajosa alternativa. Objetivo: evaluar la utilidad de este método de conservación en los cultivos fúngicos de Histoplasma y Cryptococcus. Métodos: se realizó una evaluación del estado de conservación de las especies de mayor riesgo biológico, pertenecientes a los géneros Histoplasma y Cryptococcus de la colección de cultivos de hongos del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Se analizaron 102 cepas conservadas en agua destilada, de las cuales 92 por ciento estaba preservado por más de 10 años. Resultados: los porcentajes de recuperación para H. capsulatum, C. neoformans y C. gattii fueron 64,3; 79,1 y 100 por ciento, respectivamente. Se demostró que este método de conservación resulta satisfactorio para cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados. Se implementó sobre plataforma web una base de datos digital con la información de interés de la colección. Se hizo una valoración de la importancia del estricto cumplimiento de las medidas de bioseguridad para el trabajo de las colecciones, especialmente frente a patógenos de alto riesgo. Conclusiones: la conservación de cultivos de hongos en agua destilada es un método de gran utilidad en laboratorios de recursos limitados. El trabajo de las colecciones de cultivos debe considerarse una actividad imprescindible para enfrentar los nuevos retos del desarrollo de las ciencias biomédicas.

Introduction: culture collections are responsible for providing the microbial resources for development of biological sciences. Storage in distilled water is one of the easiest and least expensive method for long-term fungal preservation. Objective: to evaluate the usefulness of this preservation method in fungal culture of Histoplasma and Cryptococcus. Methods: the preservation condition of the highest biological risk species from Histoplasma y Cryptococcus genera, included in the fungal culture collection of "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine in Havana, was evaluated in this study. One hundred and two strains stored in distilled water, 92 percent of which had been preserved for more than 10 years, were analyzed. Results: the percentages of recovered strains from H. capsulatum, C. neoformans and C. gattii were 64.3 percent; 79.1 percent and 100 percent respectively. This method of preservation proved to be satisfactory for fungal culture in labs with limited financial resources. A web-based database with interesting information about the collection was made. The importance of strict compliance with the biosafety measures in these collections, particularly with high risk pathogens. Conclusions: preservation of fungal cultures in distilled water is a very useful method for laboratories with limited resources. Culture collections should be assumed as an essential activity in order to solve increasing challenges in the development of biomedical sciences.

Efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 en la infección experimental por Cryptococcus neoformans / Effect of 4B3 monoclonal antibody on the experimental Cryptococcus neoformans infection

Introducción: las frecuencias de recaídas y elevada letalidad de la criptococosis se mantienen altas, lo cual incentiva la búsqueda de nuevas estrategias terapéuticas. Objetivos: evaluar el efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 sobre la infección criptocócica en ratones BALB/c. Métodos: se determinó la cinética de la concentración sérica del anticuerpo monoclonal para su administración intraperitoneal (500 µg), que fue medida por ELISA cuantitativo de doble anticuerpo. La capacidad protectora se observó mediante el registro de supervivencia de ratones BALB/c administrados con 500 µg de anticuerpo monoclonal 4B3 e inoculados con 2 x 10(2,2) células/mL de Cryptococcus neoformans, así como por evaluación de la diseminación de la levadura a los principales órganos diana. Se identificó el efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 sobre la fagocitosis y lisis del microorganismo por células de la línea de macrófagos P338.D1. Resultados: la dosis empleada fue suficiente para mantener valores séricos elevados del 4B3 (38 µg/mL) durante al menos 46 d. Se determinó que el 4B3 no confiere protección, lo cual potencia la diseminación del microorganismo y disminuye el tiempo de vida de los animales. El ensayo de fagocitosis mostró que el anticuerpo evaluado incrementa la actividad fagocítica de los macrófagos sin lograr un efecto fungicida. Conclusiones: el anticuerpo monoclonal 4B3 estimula la fagocitosis de C. neoformans por macrófagos, pero sin efecto fungicida. Con ello favorece la diseminación de la levadura y disminuye el tiempo de vida de los ratones a la infección.

Introduction: frequent relapses and high lethality of criptococcosis has encouraged the search for new therapeutic strategies. Objectives: to evaluate the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the cryptococcal infection in Balb/c mice. Methods: the kinetics in serum concentration of the studied monoclonal antibody was determined for intraperitoneal administration (500 µg) by quantitative sandwich ELISA. In order to assess its protective capability, were administered 500 µg of 4B3 and innoculated 2 x 10(2.2) cells/mL of Cryptococcus neoformans. The survival of mice was recorded and the yeast dissemination to the main target organs was evaluated. Macrophages P338.D1 cell lines were used to measure the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the phagocytosis and lysis of the microorganism. Results: the used dose helped to keep high values (38 µg/m) of 4B3 in serum for at least 46 days. It was found that the monoclonal antibody does not give protection, which makes the microorganism dissemination possible, along with the reduction in the survival of mice. Finally, the phagocytosis test showed that 4B3 increased the phagocytic activity of macrophages without any fungicidal effect. Conclusions: the monoclonal antibody 4B3 stimulates C. neoformans phagocytosis by macrophages without fungicidal effect, thus favoring yeast dissemination and decreasing the survival of mice due to cryptococcal infection.

Susceptibilidad a la nistatina de aislamientos bucales de Candida y su correlación con la respuesta al tratamiento / Susceptibility to nystatin of oral Candida isolates and its correlation with the response to treatment

INTRODUCCIÓN: la candidiasis bucofaríngea es un marcador precoz de progresión a sida en los pacientes seropositivos al VIH sin tratamiento antirretroviral, así como un indicador de no adherencia al tratamiento antirretroviral o su posible fracaso. OBJETIVO: determinar la susceptibilidad frente a nistatina de las cepas de Candida aisladas de la cavidad bucal de pacientes seropositivos al VIH, y correlacionar los resultados con la respuesta al tratamiento. MÉTODOS: se realizó un estudio de susceptibilidad in vitro frente a nistatina para 104 cepas aisladas de lesiones de candidiasis bucofaríngea de 97 pacientes VIH/sida que habían participado, como voluntarios, en un ensayo clínico para evaluar la respuesta a cuatro drogas. De los 104 aislamientos, 58 fueron obtenidos antes de iniciar los esquemas de tratamientos y 46 una vez finalizado estos. Se procedió según el micrométodo el documento M27-A3 del Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTADOS: todas las cepas se comportaron como sensibles a la nistatina, con valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) menores que 16 µg/mL, independientemente del momento de su aislamiento y de la droga administrada a los pacientes. En el grupo de pacientes tratados con nistatina, los rangos de CMI80 (1-2 µg/mL), las medias geométricas y los valores acumulativos de la droga frente a los aislamientos de Candida albicans obtenidos antes de iniciar el tratamiento, resultaron similares a los obtenidos frente a las cepas recobradas al finalizar este. De todas las especies identificadas, C. lusitaniae fue la que alcanzó el valor absoluto de CMI más elevado, 4 µg/mL. CONCLUSIONES: la correlación entre la evolución clínica de los pacientes y los resultados de los estudios de susceptibilidad de sus aislamientos in vitro, fue buena para los pacientes con evolución favorable, pero no para predecir posibles fracasos terapéuticos.

INTRODUCTION: oropharyngeal candidiasis is an early marker of progression to AIDS in HIV-positive patients and an indicator of non-adherence of treatment or possible failure in patients undergoing anti-retroviral therapy. OBJECTIVE: to determine the in vitro susceptibility to nystatin in Candida strains isolated from the oral cavity of HIV-positive patients, and to correlate the results with the response to treatment. METHODS: a study of in vitro susceptibility to nystatin was conducted in 104 oral isolates from 97 HIV/AIDS patients, who participated as volunteers in a clinical trial to evaluate the response to four antifungal drugs. Fifty-eight of the 104 isolates were obtained before starting treatment and the remaining 46 at the end of therapy. Broth microdilution method was performed according to the document M27-A3 of the Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTS: one hundred percent of the strains were susceptible to nystatin, with minimum inhibitory concentration (MIC) values of <16 µg/mL, regardless of the time of isolation and of the drug administered to patients. In the group of patients treated with nystatin, the MIC80 ranges (1-2 µg/mL), geometric mean and cumulative values of the drug against Candida albicans isolates before starting treatment were similar to those obtained against strains recovered at the end. Among the identified species, C. lusitaniae reached the highest absolute MIC value (4 µg/mL). CONCLUSIONS: the correlation between the clinical evolution and the results of in vitro susceptibility tests was good in patients with a favorable outcome; however, it did not allow predicting possible treatment failure.

Cryptococcus gattii aislado de un guepardo (Acinonyx jubatus) del Parque Zoológico Nacional de Cuba / Cyptococcus gattii isolated from a cheetah (Acinonyx jubatus) in the National Zoo of Cuba

INTRODUCCIÓN: la criptococosis, micosis sistémica causada por especies del género Cryptococcus, ha elevado considerablemente su incidencia en los últimos años, asociada sobre todo a la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana. También ha sido descrita en animales, aunque con baja frecuencia. MÉTODOS: se presentó el caso de una hembra de guepardo (Acinonyx jubatus) mantenida en cautiverio en el Parque Zoológico Nacional, en La Habana. El animal, procedente de Sudáfrica, comenzó con súbita pérdida de peso, astenia, anorexia y dificultad respiratoria con abundante secreción nasal. RESULTADOS: mediante exámenes micológicos de esas secreciones se demostró la presencia de Cryptococcus gattii serotipo B. Por el origen del animal y su permanencia en cautiverio, se estima que la infección se mantuvo latente por un período no menor de 16 meses. CONCLUSIONES: en Cuba, hasta el momento, todos los aislamientos clínicos de Cryptococcus corresponden a C. neoformans var. grubii, por lo que se estima que la infección fue adquirida en el país de origen del animal. Este representa el primer aislamiento de C. gattii en Cuba a partir de un animal importado de Sudáfrica, donde este hongo es endémico.

INTRODUCTION: Cryptoccosis systemic mycosis caused by Cryptococcus species- has considerably raised its incidence in the last years, mainly associated with the human immunodeficiency virus infection. It has also been described in animals, but rare cases. METHODS: a case of a female cheetah (Acinonyx jubatus) kept in the Nacional Zoo of Havana was presented. The animal came from South Africa. She began losing weight, and suffering asthenia, anorexia and breathing problems with abundant nasal secretion. RESULTS: mycological testing of these secretions disclosed the presence of serotype B Cryptococcus gattii. Because of the origin and captive condition of the animal, it was believed that the infection had been latent for 16 months at least. CONCLUSIONS: up to the present, in Cuba, all clinical Cryptococcus isolates were C. neoformans var. grubii, so it is considered that the infection was caught in the country of origin of the female cheetah. This is the first C. gattii isolate in Cuba from an animal coming from South Africa where this fungus is endemic.

Brotes de histoplasmosis ocupacional en la provincia La Habana / Outbreaks of occupational acquired histoplasmosis in La Habana province

INTRODUCCIÓN: la histoplasmosis, infección causada por el hongo Histoplasma capsulatum, está considerada una de las principales micosis endémicas del continente americano, donde se presenta frecuentemente en forma de brotes epidémicos. En Cuba, la mayoría de ellos han estado relacionados con la realización de actividades de riesgo en lugares que han servido de refugio a los murciélagos. En el presente trabajo se presentan 2 brotes ocupacionales de histoplasmosis ocurridos en la provincia La Habana. MÉTODOS: se estudiaron 116 trabajadores que realizaron actividades generadoras de aerosoles en cuevas. Se efectuaron exámenes micológicos y serológicos a partir de muestras de los pacientes. Se recogieron muestras del suelo de las cuevas para determinar la presencia del agente causal. Se recolectaron datos clínico-epidemiológicos para la caracterización de los brotes. RESULTADOS: las tasas de ataque en ambos brotes fueron de 60 y 78 por ciento. La edad de los pacientes osciló entre 16 y 64 años; las principales manifestaciones clínicas (fiebre, malestar general, tos seca, cefalea, pérdida de peso y dolor torácico) comenzaron a aparecer entre los 10 y 20 d. Se realizó el diagnóstico microbiológico y serológico de histoplasmosis y se confirmó la fuente de infección mediante el aislamiento de H. capsulatum en los sitios donde se habían llevado a cabo intensos trabajos de excavación, con formación de abundantes aerosoles por períodos de hasta 21 d. Los 2 brotes estudiados tuvieron en común la realización de actividades generadoras de aerosoles en lugares de riesgo, sin la utilización de medios de protección. CONCLUSIONES: se hace necesaria la divulgación de las medidas preventivas entre el personal de salud y los grupos de riesgo, así como en la población en general para evitar y controlar futuros brotes de histoplasmosis.

INTRODUCTION: histoplasmosis, an infection caused by Histoplasma capsulatum fungus, is considered as one of the main endemic infections in the American continent where there are frequent epidemic outbreaks. Most of the outbreaks have been associated to risky activities in bat-inhabited places. This paper presented two outbreaks of occupational acquired histoplasmosis occurred in La Habana province. METHODS: one hundred and sixteen workers, who performed aerosol-generating tasks in caves, were studied. Samples from the cave soils were taken to assess the existence of the causal agent. Clinical and epidemiological data were gathered for the outbreak characterization. RESULTS: the rates of infection for both outbreaks were 60 percent and 78 percent respectively. The patients aged 16 to 64 years; additionally, the onset of main clinical manifestations (fever, general malaise, cough, headache, loss of weight, and chest pain) ranged from 10 to 20 days. Histoplasmosis was microbiologically and serologically diagnosed whereas its source of infection was confirmed through H. capsulatum isolation in those places where extensive excavation work had been carried out, resulting in abundant aerosols for up to 21d periods. The similarity between the two outbreaks was the performance of aerosol-generating tasks in risky places without using appropriate safety devices. CONCLUSIONS: It is necessary to disseminate the existing preventive measures among the health care staff and the risky groups as well as the general population in order to prevent and take control of possible histoplasmosis outbreaks in the future.

Susceptibilidad in vitro frente a fluconazol y voriconazol de cepas de Cryptococcus aisladas en Cuba / In vitro susceptibility of isolated Cryptococcus strains to fluconazole and voriconazole

Las infecciones fúngicas invasoras se han incrementado como consecuencia de los avances de la medicina en el ßrea de la transplantología, el tratamiento del cßncer, las enfermedades autoinmunes y el sida, fundamentalmente. La criptococosis, antes infrecuente, ocupa ahora el tercer lugar en la incidencia de micosis graves en este último grupo de pacientes y constituye además la de mayor letalidad. Hasta el momento existen pocos reportes sobre el desarrollo de resistencia de Cryptococcus a los antifúngicos, pero se prevé que el amplio uso de fluconazol pudiera favorecer la emergencia de cepas menos sensibles. Dada la importancia de mantener la vigilancia de la susceptibilidad a los antifúngicos y de poder evaluar nuevas opciones terapéuticas, se determinó la actividad in vitro del fluconazol y el voriconazol frente a un amplio número de cepas de Cryptococcus aisladas a partir de muestras clínicas y ambientales mediante el método de Etest. Se determinó la susceptibilidad in vitro mediante Etest frente a fluconazol y voriconazol de 159 cepas de Cryptococcus (117 obtenidas a partir de muestras clínicas y 42 de fuentes ambientales de la región centro-occidental de Cuba). Los aislamientos estudiados mostraron valores bajos de concentraciones mínimas inhibitorias, sobre todo frente a voriconazol. Los rangos, las medias geométricas y las modas fueron de 0,031-128, 4,631 y 3 mg/mL para fluconazol y 0,003-8, 0,02 y 0,016 mg/mL para voriconazol, respectivamente. Aunque de forma general los valores de concentraciones mínimas inhibitorias fueron mßs elevados en los aislamientos ambientales, no se encontraron diferencias estadísticamente significativas (p= 0,05) entre las cepas de acuerdo con el origen (clínica/ambiental) o la procedencia geográfica. Se señala la importancia de continuar este tipo de estudio para la detección de la aparición de resistencia a las drogas más empleadas en la terapéutica anticriptocósica, así como en la búsqueda de nuevas estrategias para...

Invasive fungal infections have increased as a result of medical advances in the sphere of transplantation, cancer treatment, autoimmune diseases and AIDS fundamentally. Cryptococcus disease, infrequent before, holds the third place in the incidence of severe mycosis in AIDS patients and it is also the most lethal. Up to the present, there exist few reports on the development of Cryptococcus resistance to antifungal products, however, it is foreseen that wide use of fluconazole might encourage the emergence of less susceptible strains. Given the importance of surveillance of antifungal susceptibility and of the evaluation of new therapeutical options, in vitro action of fluconazole and voriconazole on a high number of isolated Cryptococcus strains was determined through Etest method on clinical and environmental samples. In vitro susceptibility to fluconazole and voriconazole of 159 Cryptococcus strains (117 from clinical samples and 42 from environmental sources of Central and Western regions in Cuba) was determined through Etest method. The studied isolates showed low MIC values, mainly susceptibility to voriconazole. Ranges, geometric means and modes were 0.031-128, 4.631 y 3 mg/mL for fluconazole and 0.003-8, 0.02 y 0.016 mg/mL for voriconazole, respectively. Although MIC values were generally higher than those of environmental isolates, there were no statistically significant differences (p= 0.05) among strains according to their origin (clinical/environmental) or to their geographical location. This paper points out the importance of continuing this type of study for the detection of resistance to the most used drugs in anticryptococcus disease therapy as well as in the search of new strategies to treat this infection.

Candidiasis oral en pacientes seropositivos al VIH y casos SIDA: aspectos clínicos, micológicos y terapéuticos / Oral candidiasis in HIV-seropositive patients and AIDS cases. Clinical, mycological and therapeutical aspects

Se realizó un estudio prospectivo para conocer aspectos clínicos y micológicos de la candidiasis oral, incluido un ensayo terapéutico para 4 drogas, 2 tópicas (clotrimazol y nistatina ) y 2 sistémicas (itraconazol y ketoconazol), entre marzo de 2003 y junio de 2004, a un total de 97 pacientes adultos infectados por el VIH. La edad promedio fue de 34,97 años con franco predominio del sexo masculino y de una conducta heterosexual como tendencia. Prevaleció la forma de presentación clínica pseudomembranosa, 93,8 por ciento de los casos, con síntomas acompañantes (dolor, sensación de quemazón y dificultad para deglutir) y lesiones extensas. Candida albicans fue la especie más frecuente aislada tanto en los exudados iniciales (92 por ciento) como en los realizados al finalizar los esquemas de tratamiento, en los pacientes que no alcanzaron la cura micológica (89,4 por ciento). Los tratamientos fueron exitosos desde el punto de vista clínico, en 91,8 por ciento de los casos con mejoría o remisión total de síntomas y signos, y 51,6 por ciento de curas micológicas. No existieron diferencias estadísticamente significativas en las respuestas clínica y micológica obtenidas frente a los tratamientos tópicos al compararlos con los sistémicos. Lo anterior permitió recomendar una mayor utilización de los tratamientos locales, en la población estudiada, por los beneficios que estos tienen para los pacientes.

Pigmentación de cepas de Cryptococcus neoformans sobre agar semilla de girasol / Pigmentation of strains from Cryptococcus neoformans on sunflower seed agar

Se determinó la producción de melanina sobre el medio agar extracto de semilla de girasol de 86 cepas de Cryptococcus neoformans, pertenecientes al Laboratorio de Micología del Instituto de Medicina Tropical ôPedro Kouríö; de estas, 54,7 por ciento produjo colonias con pigmento carmelita intenso, 5,8 por ciento un pigmento claro y 37,2 por ciento una tonalidad intermedia. Se creó un cuarto grupo para aquellas cepas que presentaron un pigmento verdínico (2,3 por ciento). Con este trabajo se contribuyó de forma importante a una mejor caracterización de las cepas pertenecientes a la colección de la institución y sirve de base a estudios posteriores de patogenicidad y susceptibilidad

Identificación de Cryptococcus neoformans var. neoformans en aislamientos clínicos cubanos

Mediante la utilización del medio de canavanina-glicina-azul de bromotimol (CGB), se estudiaron 50 cepas de Cryptococcus neoformans de origen clínico. El 56 % de las cepas se aisló de pacientes con sida y el 16 % pertenecía a pacientes sometidos a transplante renal. El 90 % de las cepas se obtuvo a partir de muestras de líquido cefalorraquídeo, lo que se corresponde con la forma clásica de presentación de la criptococosis. Todas las cepas se identificaron como C. neoformans var. neoformans, lo que coincide con reportes anteriores realizados en Cuba. Con el conocimiento de las variedades de C. neoformans se pueden hacer inferencias sobre la epidemiología, la clínica y la respuesta al tratamiento de la criptococosis.

50 strains of Cryptococcus neoformans of clinical origin were studied by using the canavanine-glycine-bromothymol blue (CGB) medium. 56 % of the strains were isolated from AIDS patients, and 16 % belonmged to patients with kidney transplantation. 90 % of the samples were obtained from the samples of cerebrospinal fluid, which corresponded to the classical form of presentation of cryptococcosis. All the strains were identified as C. neoformans var. neoformans, coincidings with previous reports made in Cuba. Knowing the varieties of C. neoformans, inferences can be drawn on the epidemiology, clinics and response to the treatment of criptococcosis.

Obtención de inmunoglobulina G anti-Cryptococcus / Obtention of anti-Crypstococcus neoformans immunoglobulin G

Con el objetivo de obtener una IgG anti-Cryptococcus neoformans, se llevaron a cabo simultáneamente 2 esquemas de inmunización en conejos con una cepa autóctona. Para ambos se emplearon células enteras formalinizadas que se diferenciaban entre sí en cuanto a dosis y vías de inmunización. Los sueros obtenidos fueron titulados y se seleccionó el de mayor título (1:1 024 por el método de aglutinación en lámina) el cual fue purificado mediante precipitación salina y cromatografía de intercambio iónico, con la obtención de una IgG de pureza y actividad biológica altas

Determinación de la concentración mínima inhibitoria de anfotericina B en levaduras de interés médico / Determinatiosn of the minimum inhibitory concentration of amphotericin B in yeasts of medical interest

Con el objetivo de conocer la sensibilidad frente a la anforericina B, principal farmaco para el tratamiento de las micosis sistémicas, se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) en 90 aislamientos clínicos de Candida y Cryptococcus mediante un mmicrométodo de dilución en caldo casitona. Los resultados permiten concluir que Cryptococcus neoformans fue más sensible que Candida albicans (medias geométricas 0,24 y 0,41 respectivamente). Sólo fue encontrada una cepa resistente (CMI= 16 mug/mL), perteneciente a la especie Candida krusei. La implantación de esta técnica en el Laboratorio de Micología del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" permitirá establecer los patrones de sensibilidad y detectar la posible aparición de resistencia en las principales especies de hongos patógenos para el hombre en nuestro medio