Human identification and analysis of DNA in bones

A introdução das técnicas de biologia molecular, ou seja a análise de DNA para identificação humana é um avanço recente na Medicina Legal. A identificação de cadáveres e restos humanos faz-se necessária após guerras, distúrbios sócio-políticos e desastres de massa. Além desses casos, devido à dinâmica social das grandes metrópoles, existem pessoas desaparecidas e por outro lado, cadáveres e restos humanos sem identificação são encontrados. Nos últimos anos, também tem ocorrido um aumento nas solicitações para coleta de material biológico de restos humanos exumados e destinados à determinação de vínculo genético em processos civis. Os autores realizam uma extensa revisão da literatura sobre a utilização dessas novas metodologias em ossos, antigos ou recentes, para a identificação humana.

Análise de DNA em osso humano: estudo qualitativo da microestrutura do osso compacto / Analysis of human DNA bone: qualitative study of compact bone microstructure

Para a execução da etapa inicial da identificação médico-legal de restos humanos (antropometria e exame dos arcos dentários), faz-se necessária uma limpeza prévia da ossada, para a remoção de tecidos moles putrefeitos. Os casos não identificados por esses métodos tradicionais, poderão ser submetidos ao exame de DNA. No entanto, apesar do grande avanço da biologia molecular, utilizando a amplificação de DNA pela PCR, algumas limitações que afetam a habilidade de se obter DNA em restos humanos, permanecem. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi fornecer subsídios morfológicos para os analistas forenses, com ênfase na prática médico-legal, visando uma utilização mais eficiente do DNA obtido de osso compacto de restos humanos em decomposição ou já esqueletizados, sem tecidos moles aderidos. Foi realizado o estudo da microestrutura do tecido ósseo compacto femoral, de restos humanos em decomposição, ainda com tecidos moles, que foram limpos pela fervura em água (n = 7) e ossadas já esqueletizadas pela decomposição natural, que não foram fervidas (n = 8). Destes, seis ossadas foram provenientes de cemitério público regular, após 3 anos de inumação, 1 ossada proveniente da região amazônica, e 1 ossada de origem desconhecida. Estas duas ultimas, apresentado-se porosas ou quebradiças. As análises morfológicas de cortes histológicos foram coradas com hematoxilina e eosina e o DNA amplificado pela PCR para os loci CSF1PO, TPOX, TH01, F13A0, FESFPS, vWA, D16S539, D7S820, D13S317 e amelogenina. Os resultados da análise desses dois grupos foram comparados com os de cadáveres frescos (n = 5) do Serviço de Verificação de Óbitos da Capital. A fervura dos ossos, do modo como é realizada no Instituto Médico Legal de São Paulo, pode aumentar a eosinofilia da matriz óssea e, em alguns casos, pode promover a desagregação dos ósteons. Tal procedimento pode remover células, mas pode também remover possíveis inibidores da PCR, favorecendo a análise do DNA obtido destas amostras...

To the first essential step to forensic identification of human remains (anthropological study of race, sex, age, etc) it is necessary a previous cleaning of the bones, to remove decomposing soft tissues. Medico-legal inconclusive or non identified cases, by using these traditional methods, could be subjected to DNA analysis. However, in spite of advances in human identification techniques, specially by PCR amplified DNA, some limitations that affect the ability to obtain DNA in human remains still persist. Therefore, the aim of this study was to provide additional support from morphological analysis, to help forensic analysts personnel to utilise more efficiently the DNA, extracted from compact bones of human remains in decomposition or already skeletonized corpse, it means without soft tissues, with special emphasis in the legal-medicine practice. Femoral compact bones were obtained from: 7 human remains found on the ground, in different degree of decomposition which were cleaned by boiling to remove soft tissues; also studied were collections of bones from 8 corpses having undergone natural decomposition: 6 human remains exhumed after 3 years from a common public cemetery in São Paulo City; 1 case from amazon region and 1 case with no information, both cases remained from long time (more than 3 years) in contact with soil. All eight cases, were not boiled as no soft tissue were adhered. As a control, five cadavers 12 to 16 hours post mortem were also used. The compact bones histological sections were stained by haematoxilin and eosin and the loci CSF1PO, TPOX, TH01, F13A01,FESFPS, vWA, D16S539, D7S820, D13S317 and amelogenin were amplified by PCR.The procedure for boiling the human remains utilised in the Legal Medicine Institute of São Paulo would have increased the eosinophily of bone matrix and, in some cases, promoted the desaggregation of the osteons. In addition these procedures would have removed the cells, but in some cases would have removed...

Post-mortem forensic identity testing: application of PCR to the identification of fire victim

CONTEXT: DNA analysis has been used with success in the identification of carbonized corpses and victims of large accidents. The analysis requires relatives of crash victims to donate blood for analysis. The relatives are generally willing contribute to the identification by giving a blood sample. OBJECTIVE: To describe the use of the polymerase chain reaction (PCR) for genetic characterization of one victim extensively burned by fire. DESIGN: Case report. CASE REPORT: DNA was extracted from blood of the cardiac chamber, and 15 different loci (D1S80, ApoB, D17S30, D3S1744, D18S849, D12S1090, FGA, D7S820, D1S533, D9S304, HUMCSF1PO, HUMTPOX, HUMTHO1, amelogenin and HLA-DQA1) were analyzed using the PCR technique. Results from all loci typing of the corpse were then compared to that of his alleged biological parents, revealing a genetic compatibility.