Análise morfométrica da resposta tecidual ao osso bovino misto medular implantado em defeito ósseo na calvária de rato / Morphometric analysis of tissue response to mixed bovine bone marrow implanted in bone defects in rat calvaria

O propósito deste trabalho foi avaliar o reparo ósseo de defeito de tamanho crítico em crânio de ratos tratados com disco de osso bovino misto (OBM) medular poroso. Foram utilizados 30 ratos Wistar machos adultos submetidos à cirurgia para confecção de um defeito circular de 8 mm de diâmetro removendo toda a díploe da calvaria. Os defeitos foram preenchidos com um disco de OBM de 8 mm de diâmetro por 3 mm de espessura, enquanto no grupo controle o defeito ósseo foi preenchido com coágulo sanguíneo do próprio animal. Os animais foram mortos após 30, 60 e 120 dias. As peças foram removidas, fixadas em formol 10% tamponado, desmineralizadas e processadas pela técnica histotécnica padrão para coloração em hematoxilina e eosina. Os cortes foram submetidos à análise histológica descritiva e morfometria (densidade de volume). Os resultados demonstraram uma pequena diminuição do material implantado com o decorrer dos períodos experimentais, sugerindo uma reabsorção lenta e gradual do OBM. Em contrapartida foi observado uma pequena neoformação óssea nos dois grupos (teste e controle) e formação de tecido conjuntivo denso nas áreas do defeito ósseo aos 120 dias também nos dois grupos. O tecido conjuntivo, no grupo teste, foi capaz de penetrar nos poros do material e ocupar esses espaços com o passar dos períodos. Dentro dos limites desse estudo, pode-se afirmar que o OBM é biocompativel, no entanto, não apresenta capacidade osteocondutora ou osteoindutora em defeitos críticos na calvária de ratos Wistar.

The purpose of this study was to evaluate bone repair of critical size defects in the calvarias of rats treated with bovine bone mixed disk (OBM) porous medullary. We used 30 adult male Wistar rats that underwent surgery to confection a bone defect of 8 mm diameter circular removing diploe calvaria completely. The defects were filled with a disc of OBM 8 mm diameter and 3 mm thick, while the control group the bone defect was filled with blood clot. The animals were killed after 30, 60 and 120 days. The pieces were removed, fixed in 10% buffered formalin, demineralized and processed by standard technique to staining with hematoxylin and eosin. The sections were submitted to descriptive histology and morphometry (volume density). The results showed a small decrease of the implanted material in the course of the experimental periods, suggesting a slow and gradual resorption of the OBM. On the other hand, there was a small new bone formation observed in both groups (test and control) and formation of dense connective tissue areas of the bone defect at 120 days also in the two groups. The connective tissue in the test group was able to penetrate the pores of the material and occupy these spaces over the periods. Within the limits of this study, it can be said that the OBM is biocompatible, however, does not have osteoinductive or osteoconductive capacity in critical defects in the calvaria of rats.

Avaliação da resposta tecidual ao implante de osso bovino misto medular em subcutâneo de ratos / Evaluation of tissue repair, in case of bovine bone implantation mixed with bone marrow graft, in subcutaneous region of rats

O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta tecidual ao implante do osso bovino misto (OBM) acelular em subcutâneo de ratos. Blocos de OBM (10x10x5mm) foram implantados no tecido subcutâneo de 25 ratos machos Wistar, os quais foram mortos após 3, 7, 14, 30 e 60 dias (n = 5/período) da cirurgia. O tecido reacional foi coletado, fixado em formol 10% tamponado, lavado, desidratado, diafanizado em xilol e incluído em parafina. Cortes com 6µm de espessura foram corados com Hematoxilina e Eosina. A análise microscópica subjetiva indicou que o OBM foi circundado por tecido de granulação (composto de células mononucleares semelhantes a fibroblastos e polimorfonucleares) aos 3 dias. Entre 7 e 30 dias observou-se a invasão gradual dos poros do material implantado pelo tecido de granulação apresentando um discreto infiltrado inflamatório mononuclear com poucas células gigantes multinucleadas (CGM). Concomitantemente à angiogênese observa-se aparecimento de adipócitos no interior do material confirmando porosidade interconectada dos poros. Após 60 dias os espaços medulares estavam completamente ocupados por tecido de granulação composto por células semelhantes a fibroblastos e raras células inflamatórias mononucleares e CGM. Não se observou indícios de degradação ou absorção do material até o período de 60 dias. Considerando a ausência de necrose ou outros sinais de destruição tecidual, a presença de proliferação celular e angiogênese para o interior do material e que não se observou absorção do material, concluiu-se que o OBM é biocompatível e não absorvível, tendo potencial aplicação na engenharia de tecidos.

The aim of this study was to evaluate the tissue response to acellular mixed bovine bone graft (MBG) implanted in the subcutaneous tissue of rats. MBG in block (10x10x5mm) was implanted in 25 adult male Wistar rats, killed 3, 7, 14, 30 e 60 days after surgery (n=5/period). The granulation tissue was fixed in 10% buffered formalin, washed, dehydrated in ethanol, diafanized in xylene, and included in paraffin according to standard technique. Histological sections measuring 6µm in thickness were stained with haematoxylin and eosin. Histological analysis 3 days after surgery showed a granulation tissue around the MGB block presenting mononuclear cells like fibroblasts and neutrophils. From 7 to 30 days, chronic inflammatory infiltrate consisting mainly of macrophages and few infl ammatory multinucleated giant cells (MGC) were observed invading the porous of MGB. Parallel to angiogenesis, adipocytes were present in the interior of material, corroborating the presence of interconnected porous. After 60 days, medullar spaces were fulfilled with granulation tissue presenting fibroblast-like cells and rare mononuclear inflammatory cells and MGC. No signs of material degradation or absorption were noted throughout the experimental periods. Considering the absence of necrosis or other signs of tissue destruction, cell growth and angiogenesis inside the material and the absence of material absorption, it was concluded that MGB was biocompatible and non absorbable being potentially adequate for tissue engineering.