RESUMO
Leptospirosis is a worldwide sanitary problem. Its clinical signs resemble that of other diseases like Dengue and Flu, and it is difficult to distinguish between them. Currently available diagnostic methods shown low sensitivity and specificity. Efforts have been made to develop simpler, faster and more efficient diagnostic methods. The aim of this work was to evaluate and optimize a Nested-PCR method for diagnosis of leptospirosis. Primers were designed to amplify a 264 bp region within the LipL32 gene. The sensitivity and specificity of the assay was evaluated using seven saprophytic serovars and 35 pathogenic serovars. This technique showed to be very specific for pathogenic serovars, however it lacked sensitivity. In order to enhance the sensitivity, another primer pair was designed which amplify a 183 bp region within the 264 bp region in lipL32 gene, and used in a Nested-PCR assay. This approach was much more sensitive than traditional PCR.
A leptospirose constitui um problema sanitário de importância mundial. Esta doença caracteriza-se por apresentar sintomas muito parecidos com os de outras doenças como a dengue e a gripe e, clinicamente é difícil de distingui-las. Técnicas de diagnóstico da leptospirose atualmente disponíveis apresentam baixa sensibilidade e ou especificidade. Por isso, tem havido um grande esforço no sentido de desenvolver testes rápidos e eficientes, baseados em técnicas de biologia molecular. Este trabalho objetivou a avaliação e otimização do Nested-PCR, para o diagnóstico de leptospirose. Para isso foi desenhado um par de primers que amplifica uma região de 264 pb do gene LipL32. A sensibilidade e especificidade do teste foram avaliadas utilizando 7 sorovares saprófitas e 35 sorovares patogênicos. Este PCR mostrou-se específico para leptospiras patogênicas, porém a sensibilidade não foi muito alta. Com o objetivo de melhorar a sensibilidade do teste , foi desenhado outro par de primers que amplifica uma região de 183 pb do gene LipL32, interna a de 264 pb para a realização do Nested-PCR. Nesta reação foi utilizado como DNA molde o produto da primeira amplificação. O Nested-PCR mostrou-se mais sensível que o PCR normal, pois foi capaz de detectar um baixo número de células bacterianas.
RESUMO
Ocimum basilicum L. (sweet basil), of the family Lamiaceae, is rich in aromatic essential oils and valuable for its pharmaceutical, aromatic and culinary properties. The present study describes the procedure for micropropagation of O. basilicum using cotiledonary leafs from in vitro geminated plants. Cotyledons from in vitro germinated seeds were used as initial explants, put in MS (Murashige and Skoog, 1962) medium with 0.2mg.L-1 NAA (1-Naphthalene acetic acid) in combination with 05mg.L-1 BAP(6-Benzyl aminopurine) and kept at 28 ± 1ºC, 16-h light photoperiod and 48µmol.m-2.s-1 luminous density flow, for 45 days. The highest efficiency of shoot formation after 45 days occurred in the medium containing 5mg.L-1 BAP and 0,2mg.L-1 NAA. The presence of NAA inhibited root formation, when combined with different concentrations of cytokinin (BAP, 1 to 5mg.L-1). Higher BAP concentrations induced an increase in the number of explants with shoots and a higher number of shoots/cotyledon
Ocimum basilicum L. (manjericão) pertencente à família das Lamiaceae é rico em óleos essenciais aromáticos e valorizado por suas propriedades farmacêuticas, aromáticas e culinárias. Neste trabalho descrevemos o procedimento para micropropagação de O. basilicum utilizando cotilédones de sementes germinadas in vitro. Estas foram utilizadas como explante inicial, colocadas em meio MS (Murashige e /skoog, 1962), com 0,2mg.L-1 de ANA em combinação com BAP nas variações de 05mg.L-1 e mantidas à 28 ± 1C, fotoperíodo de 16h de luz e densidade de fluxo luminoso de 48µmol.m-2.s-1 por 45 dias. Maior eficiência na formação de brotos foi obtida utilizando 5mg.L-1 BAP e 0,2mg.L-1 ANA. A presença de ANA inibiu a formação de raízes quando combinada com diferentes concentrações de citocinina (BAP, 1 a 5mg.L-1). Altas concentrações de BAP induziram aumento no número de explantes com brotos e no número de brotos/cotilédone