1.
Rev. argent. microbiol
;
53(1): 1-10, Mar. 2021. ilus
Artigo
em Inglês
| LILACS
| ID: biblio-1376392
2.
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
;
(6): 443-450, 2021.
Artigo
em Chinês
| WPRIM
| ID: wpr-877369
RESUMO
@#目的:通过 CRISPR/Cas9 技术构建前列腺癌 PC3 细胞 TFDP3 基因敲除的稳转株,探讨抑制 TFDP3 表达对 PC3 细 胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法:通过生物信息学筛选 sgRNA,通过 CRISPR/Cas9 技术、构建抑制 TFDP3 基因表达 的 sgRNA-Cas9 共转染慢病毒,感染 PC3 细胞后筛选获取稳转细胞株。通过流式细胞术对 TFDP3 基因敲除的实验组与空白对照 组进行细胞周期和凋亡检测,并进一步通过划痕实验和 Transwell 实验进行细胞迁移和侵袭能力检测。结果:通过生物信息学 筛选获得 3 条 sgRNA,其中 sgRNA2 有明显的抑制前列腺癌细胞基因表达的功能;通过 CRISPR/Cas9 技术成功构建了基于 CRISPR/Cas9 介导的 TFDP3 低表达的 PC3 细胞稳转株。抑制 TFDP3 基因表达后,相比于对照组,KO 组中 G0/G1 期细胞 百分比增加、G2/M 期细胞百分比下降(P<0.05 或 P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),细胞迁移率明显下降 [24 h 迁移率: (44.00±1.60)% vs (65.00±4.40)%,P<0.01],穿过聚碳酸酯膜的侵袭细胞数明显下降 [(185.89±11.71)vs (248.33±11.95)个, P<0.01]。结论:通过 CRISPR/Cas9 技术抑制 TFDP3 基因表达后,PC3 细胞发生周期阻滞、凋亡率也有所增加、迁移和侵袭能力 显著减弱,提示 TFDP3 是一个前列腺癌促癌基因。