Inmunogenicidad y capacidad protectora de variantes de la nueva vacuna antialérgica PROLINEM DS / mmunogeni city and protective efficacy of variants of a novel PROLINEM DS anti - allergic vaccine

Introducción: La vacuna antialérgica de segunda generación PROLINEM-DS está compuesta por alérgenos del ácaro Dermatophagoides siboney y la combinación de adyuvantes: proteoliposoma de N. meningitidis B y gel de hidróxido de aluminio. La adsorción del alérgeno es relevante para la seguridad y eficacia clínica de las vacunas adsorbidas en gel de hidróxido de aluminio en estudios previos se demostró la influencia negativa de los iones fosfato en la adsorción del alérgeno. Objetivo: Evaluar la inmunogenicidad y capacidad protectora de cuatro variantes de formulación obtenidas dentro del espacio de diseño de la vacuna PROLINEM DS. Métodos: Se emplearon 4 variantes de formulación con diferentes contenidos de tampón fosfato salino y gel de hidróxido de aluminio. Se administraron a ratones BALB/c 3 dosis subcutáneas una por semana. Luego, los ratones fueron sometidos a reto alergénico por aerosol. Resultados: Todas las variantes indujeron anticuerpos IgG1 e IgG2a alérgeno específico. Este efecto se correlacionó con el balance de citoquinas proinflamatorias Th1/Th2 en los pulmones y en los ganglios. La variante con reducción de tampón fosfato salino y gel de hidróxido de aluminio fue la de mayor índice IgG/IgE después de la vacunación. Esta relación muestra, en una variable, el equilibrio entre los componentes potencialmente bloqueadores y efectores. La tolerancia local en el lugar de la inyección mostró una reducción de los granulomas en los ratones vacunados con menos gel de hidróxido de aluminio. Conclusiones: La reducción del contenido de gel de hidróxido de aluminio y fosfatos se consideran mejoras farmacéuticas sin inconvenientes en cuanto a la inmunogenicidad de esta vacuna con un perfil de seguridad satisfactorio para futuros ensayos clínicos en humanos.

Introduction: The second generation anti allergic vaccine named PROLINEM DS is based on allergens from D. siboney house dust mite and a combination adjuvant containing PL and Alum. Allergen adsorption is relevant both safety and clinical efficacy in alum-adsorbed vaccines. Negative influence of phosphate ions on allergen adsorption was demonstrated in previous researches. Objective: To evaluate immunogenicity and protective efficacy of four variants obtained within design space of PROLINEM DS vaccine. Methods: Four variants were differentiated from each other by both phosphate and alum contents. Balb/c mice were administered with 3 doses by subcutaneous route. Further, mice were subjected to allergen aerosol challenge. Results: Specific IgG1 and IgG2a antibodies were induced by four vaccine variants. It was correlated with pro inflammatory cytokines balance Th1/Th2 both in lungs and lymphatic nodes. Formulation with lower PBS and Alum levels showed the highest IgG/IgE ratio at the end of vaccination schedule. This ratio shows in one variable the balance between potentially blocking and effector components. Mice injected with lower level of Alum showed a reduction of granuloma size in the site of vaccine administration. Conclusion: Decrease both alum and phosphate contents were a pharmaceutical improvement for antiallergic vaccines formulation. Safety and efficacy in this vaccine are crucial for future human clinical trials.

Inactivación del virus Zika con medio de transporte de ácidos nucleicos, potencialmente aplicable a muestras clínicas para el diagnóstico molecular de SARS-CoV-2 / Inactivation of Zika virus with nucleic acids transport media, potentially applicable to clinical samples for the molecular diagnosis of SARS-CoV-2

RESUMEN Introducción: Los medios de colecta de muestras clínicas con capacidad de desnaturalizar virus reducen los riesgos de contagio durante el transporte y procesamiento. Objetivo: Emplear el medio de transporte de ácidos nucleicos (TAN) en muestras de exudado nasofaríngeo colectadas para el diagnóstico de SARS-CoV-2. Métodos: Se realizó un estudio experimental para demostrar la capacidad del medio de inactivar la infectividad viral. Se tomó como modelo de virus envuelto el virus Zika (VZk), cuyo nivel de bioseguridad es 2. Se evaluó el desempeño clínico del medio TAN para el diagnóstico de SARS-CoV-2. Se empleó una cepa del VZk propagada en la línea celular Vero y, previo a la infección de las células, el VZk se puso en contacto a intervalos de tiempo diferentes (2; 15 y 30 min) con el medio TAN puro; y luego se realizaron diluciones seriadas (10-1-10-4). La inactivación viral se evaluó por RT-PCR, en el sobrenadante y células colectadas, al culminar el periodo de propagación. El desempeño clínico del medio TAN se estimó tomando como referencia el CITOSWAB® VTM, en 30 exudados nasofaríngeos colectados para diagnóstico de la infección por SARS-CoV-2. Resultados: El VZk preservó su infectividad a diluciones del inóculo ≥ 10-2, independientemente del tiempo de contacto. La sensibilidad y especificidad clínica del medio TAN para el diagnóstico de SARS-CoV-2 fueron del 100 %, respectivamente. Conclusiones: Los resultados sugieren que muestras clínicas positivas a VZk en diluciones ≤ 10-1 del medio TAN pueden ser manipuladas de forma segura, lo que pudiera aplicarse potencialmente al diagnóstico molecular del SARS-CoV-2.

ABSTRACT Introduction: Collection media of clinical samples with the capacity to denature viruses reduce the risk of contagion during transportation and processing. Objective: To use the nucleic acids transport media (NATM) in nasopharyngeal swab samples collected for the diagnosis of SARS-CoV-2. Methods: An experimental study was conducted to demonstrate the medium capacity to inactivate viral infectivity. Zika virus (ZIKV), of biosafety level 2, was used as an enveloped virus model. The clinical performance of the NATM for the diagnosis of SARS-CoV-2 was evaluated. A ZIKV strain propagated in the Vero cell line was used and, prior to cells infection, ZIKV was in contact at different intervals (2; 15, and 30 min) with pure NATM; subsequently, serial dilutions (10-1-10-4) were performed. Viral inactivation was evaluated by RT-PCR in the supernatant and the collected cells when the propagation period was completed. CITOSWAB® VTM was used as reference to estimate the clinical performance of the NATM in 30 nasopharyngeal swabs collected for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection. Results: ZIKV remained infectious at inoculum dilutions of ≥ 10-2, regardless of contact time. Clinical specificity and sensitivity of the NATM for the diagnosis of SARS-CoV-2 were 100%, respectively. Conclusions: Results suggest that ZIKV positive clinical samples at dilutions ≤ 10-1 of the NATM can be safely handled, which could potentially be applied to the molecular diagnosis of SARS-CoV-2.

Sensibilización a dermatophagoides pteronyssinus, dermatophagoides siboney y blomia tropicalis en niños de tres consultorios / Sensitization to dermatophagoides pteronyssinus, dermatophagoides siboney and blomia tropicalis in children from three family physician’s offices

La morbilidad de las enfermedades alérgicas mediadas por el anticuerpo IgE, se ha incrementado en los últimos 40 años y además, se han identificado a los ácaros domésticos como sus principales agentes causales. En Cuba, los ácaros más frecuentemente son: Dermatophagoides pteronyssinus (D. pteronyssinus), Dermatophagoides siboney (D. siboney) y Blomia tropicalis (B. tropicalis). En este estudio investigamos si la sensibilización a estos ácaros constituye un problema de salud en nuestra población infantil y su relación con la exposición al polvo doméstico. Se seleccionaron 103 niños alérgicos del pueblo de Guatao, que se clasificaron según su grado de exposición al polvo doméstico. A todos se les realizó la prueba por punción cutánea por duplicado en ambos antebrazos y se utilizaron los extractos alergénicos estandarizados VALERGEN-BT Ò (Blomia tropicalis), VALERGEN-DS Ò (Dermatophagoides siboney) y VALERGEN-DP Ò (Dermatophagoides pteronyssinus), todos de producción nacional en el Centro Nacional de Biopreparados. La sensibilización fue mayor de forma significativa (p<0,01) para todos los ácaros en los pacientes con mayor exposición al polvo doméstico con respecto a los de menor exposición. Además, registramos una sensibilización mayor a los ácaros del género Dermatophagoides, especialmente para el D. pteronyssinus. El extracto D. pteronyssinus provocó un tamaño medio del habón mayor que los otros productos en los pacientes positivos de ambos grupos (p<0,04), por lo que concluimos que la mayor exposición de los pacientes al polvo doméstico está relacionada con una mayor sensibilización a los ácaros

Prevalencia de la sensibilización a tres ácaros domésticos en la población infantil alérgica de un consultorio médico / Prevalence of sensitization to three house dust mites in the allergic infantile population of a family physician's office

Se realizó un estudio con el objetivo de investigar si la sensibilización a estos ácaros ( Dermatophagoides pteronyssinus [ Dp ], Dermatophagoides siboney [ Ds ] y Blomia tropicalis [ Bt ] ) constituye un problema de salud en nuestra población infantil, pues el estudio de los problemas alérgicos ha identificado a los ácaros domésticos como los principales agentes causales de asma y otras afecciones. Se seleccionaron 32 niños alérgicos de nuestro consultorio que se clasificaron según su grado de exposición al polvo doméstico. A todos se les realizó la prueba por punción cutánea en el brazo derecho, y se utilizaron 3 extractos alergénicos estandarizados Valergen Ò ( Blomia tropicalis, Dermatophagoides siboney y Dermatophagoides pteronyssinus ) de producción nacional (BIOCEN). La prevalencia de la sensibilización fue mayor de forma significativa (p<0,05) para todos los ácaros en los pacientes con mayor exposición al polvo doméstico con respecto a los de menor exposición. Para los ácaros del género Dermatophagoides se obtuvo una sensibilización mayor. El extracto de Dp provocó un tamaño medio del habón mayor que los otros productos.

A study was conducted aimed at investigating if the sensitization to these dust mites (Dermatophagoides pteronyssinus [Dp], Dermatophagoides siboney [Ds] and Blomia tropicalis [Bt] ) is a health problem in our infantile population, since the study of the allergic problems has identified the house dust mites as the main agents causing asthma and other affections. 32 allergic children of our office were selected and classified according to their degree of exposure to house dust. All of them underwent the skin test in the right arm. 3 standardized allergenic extracts ValergenÒ (Blomia tropicalis, Dermatophagoides siboney y Dermatophagoides pteronyssinus) of national production (BIOCEN) were used. The prevalence of sensitization was significantly higher (p<0.05) for all the dust mites in patients with a greater exposure to house dust compared with those with lower exposure to it. A higher sensitization was attained for the dust mites of the genus Dermatophagoides. The extract of Dp produced a wheal with a mean size greater than the one caused by other products.