Trypanosoma cruzi: analysis of two different strains after piplartine treatment

ABSTRACT The hemoflagellate protozoan, Trypanosoma cruzi, mainly transmitted by triatomine insects through blood transfusion or from mother-to-child, causes Chagas' disease. This is a serious parasitic disease that occurs in Latin America, with considerable social and economic impact. Nifurtimox and benznidazole, drugs indicated for treating infected persons, are effective in the acute phase, but poorly effective during the chronic phase. Therefore, it is extremely urgent to find innovative chemotherapeutic agents and/or effective vaccines. Since piplartine has several biological activities, including trypanocidal activity, the present study aimed to evaluate it on two T. cruzi strains proteome. Considerable changes in the expression of some important enzymes involved in parasite protection against oxidative stress, such as tryparedoxin peroxidase (TXNPx) and methionine sulfoxide reductase (MSR) was observed in both strains. These findings suggest that blocking the expression of the two enzymes could be potential targets for therapeutic studies.

Isolamento e cultivo de neurônios e neuroesferas de córtex cerebral aviar / Isolation and culture of neurons and neurospheres from chicken brain cortex

Métodos de cultivo celular são convenientes na realização de análises funcionais de alterações/interações protéicas das células neuronais, auxiliando a decifrar o interactoma de proteínas chaves na neurogênese de doenças do Sistema Nervoso Central. Por esse motivo, culturas de neurônios e neuroesferas isolados do córtex cerebral aviar representam um modelo acessível para o estudo de diversas doenças neurológicas, tal como a epilepsia. A espécie aviar apresenta peculiaridades em seu proteoma neuronal, visto a presença de uma expressão diferenciada de proteínas chaves no metabolismo energético cerebral, algumas destas (VDAC1 e VDAC2) desempenham papel importante na compreensão do mecanismo da epilepsia refratária. A metodologia estabelecida no presente estudo obteve cultivo de neuroeferas, onde as células cresceram tipicamente em aglomerados atingindo, dentro de 7 dias, o diâmetro ideal de 100-200 µm. A diferenciação celular das neuroesferas foi obtida após a aderência destas às placas tratadas com poli-D-lisina, evidenciada pela migração de fibras do interior da neuroesfera. Ao contrário das neuroesferas, os neurônios em cultivo extenderam seus neuritos após 11 dias de isolamento. Tal modelo in vitro pode ser utilizado com sucesso na identificação das variáveis neuroproteômicas, propiciando uma avaliação global das alterações dinâmicas e suas interações protéicas. Tal modelo pode ter aplicações em estudos dos efeitos de indutores da morte celular e bloqueadores de canais de membrana mitocondriais em proteínas chaves do metabolismo energético cerebral.

Cell culture methods are used for studies of protein interactions in neural cells, helping to detect the interactome of proteins linked to generation of central nervous system diseases. For this reason, neural cells and neurospheres isolated from cortical chicken brain are a current model for studies of neurological diseases, such as epilepsy. Chicken brain has key characteristics on its proteome, with a differential expression of proteins linked to energy metabolism, some of them (VDAC 1 and VDAC 2) play an important role in understanding mechanism of refractory epilepsy. Using the methods described, we found neurospheres, in which cells grow in structures with the ideal diameter of 100-200µm within seven days after isolation. Neurospheres differentiation was obtained after adhesion of these cells to surfaces coated with poly-D-Lysine, detected by migration of fibers inside them. Unlike neurospheres, neurons extended neurites after 11 days of isolation. Here we describe a method to isolate and culture neurons and neurospheres from chicken cerebral cortex. Such "in vitro" model can be utilized on studies of neuronal protein differential expression and interaction. Cultures of isolated neurons represent an accessible model on studies of apoptosis and channel blockers of key proteins linked to brain metabolism.

Production and diagnostic application of recombinant domain III of West Nile envelope protein in Brazil

INTRODUCTION: West Nile virus (WNV) is a flavivirus with a natural cycle involving mosquitoes and birds. Over the last 11 years, WNV has spread throughout the Americas with the imminent risk of its introduction in Brazil. METHODS: Envelope protein domain III of WNV (rDIII) was bacterially expressed and purified. An enzyme-linked immunosorbent assay with WNV rDIII antigen was standardized against mouse immune fluids (MIAFs) of different flavivirus. RESULTS: WNV rDIII reacted strongly with St. Louis encephalitis virus (SLEV) MIAF but not with other flaviviruses. CONCLUSIONS: This antigen may be a potentially useful tool for serologic diagnosis and may contribute in future epidemiological surveillance of WNV infections in Brazil.

Soro fetal bovino induz a migraçäo de neutrófilos na cavidade peritoneal de camundongos pré-tratados com dexametasona / Fetal bovine serum induces neutrophils migration into the peritoneal cavity of mice pretreated with dexamathasone

O presente trabalho demonstrou a existência da atividade de induzir a migraçao de neutrófilos (na presença de dexametasona) no SFB e através de 2 ou 3 processos de purificaçao tentou-se isolar e caracterizar este(s) componente(s). A fraçao SFB/Blue- (nao adsorvida à resina), obtida após cromatografia de SFB em resina Blue-Sepharose, apresentou a atividade de induzir a migraçao de neutrófilos na cavidade peritoneal de camundongos pré-tratados com dexametasona (atividade MNCF-símile). Os efluentes correspondentes aos picos 7, 8, 9 e 11, obtidos após cromatografia em RP-HPLC do SFB/Blue-, apresentaram a atividade biológica MNCF-símile. As proteínas majoritárias presentes nestes efluentes tiveram seus N-terminais determinados por seqüenciamento automático e corresponderam à albumina (pico 7), fetuína (picos 8 e 9) e alfa 1-antitripsina (pico 11). Outros quatro efluentes nao apresentaram a atividade MNCF-símile. As proteínas do soro, fetuína e albumina, disponíveis comercialmente, tiveram sua atividade testada e verificou-se que, embora elas induzam a migraçao de neutrófilos na cavidade peritoneal de camundongos, quando estes foram pré-tratados com dexametasona houve inibiçao da migraçao de neutrófilos. Portanto, as atividades observadas nos efluentes correspondentes aos picos 7, 8 e 9, que apresentaram estas proteínas como componente principal, podem conter outros componentes co-purificados ou apresentar uma forma diferente da proteína majoritária, capaz de induzir a migraçao de neutrófilos. A elucidaçao dos fatores como MNCF e MNCF-símile aqui descritos e seu mecanismo preciso de açao, bem como sua participaçao na fisiopatologia da reaçao inflamatória, sao fundamentais para a exploraçao de uma alternativa terapêutica aos glicocorticóides como agentes antiinflamatórios