Cupremia y colesterolemia como factores de riesgo en pacientes con enfermedad de Alzheimer / Plasma levels of copper and cholesterol as risk factors in Alzheimer disease patients / Cupremia e colesterolemia como fatores de risco em pacientes com doença de Alzheimer

Se estudiaron 241 personas, 119 controles y 122 pacientes con enfermedad de Alzheimer (EA) subagrupados en tres categorías de acuerdo con el estadio clínico de la dolencia, con el objetivo de investigar la influencia de niveles elevados de cobre libre y colesterol plasmático como factores de riesgo para la EA. Las conclusiones obtenidas de los resultados indicaron que los pacientes expuestos a una combinación de alto colesterol y de cobre no unido a ceruloplasmina tuvieron mayor proporción de marcadores de estrés oxidativo (carbonilos proteicos, sustancias reactivas al tiobarbiturato, glutatión oxidado y descenso de antioxidantes totales en sangre), conjuntamente con un incremento de HDL-colesterol peroxidado y lipoproteína "a" que correlacionó con la gravedad de su cuadro. Lo mismo sucedió con la relación entre péptidos amiloides (1-40) y (1-42) en plasma y los valores del mini-test de estado cognitivo (MMSE). Se halló que una función de adición de efectos que cuantificó el daño por cobre libre y colesterol oxidado resultó directamente proporcional a la pérdida de desempeño cognitivo estimada por medio del MMSE. Esta función es de fácil determinación y puede considerarse un nuevo biomarcador para estudiar riesgo en poblaciones expuestas, apoyar el diagnóstico clínico, o evaluar la eficacia de estrategias terapéuticas en pacientes con EA.

Alzheimer disease (AD) patients (122) compared to control subjects (119) were studied to determine the role of chronic exposure of hypercholesterolemic plasma levels and free copper (not bound to ceruloplasmin) as biomarkers of progression for AD. Oxidative stress parameters, lipid profile, amyloid levels, and cognitive status were studied in all participants. Conclusions obtained indicated that patients exposed simultaneously to free copper and increased cholesterol levels present higher indicators of oxidative stress (protein carbonyls, thiobarbituric acid-reactive substances, decreased total antioxidant activity in plasma and elevated oxidized HDL-cholesterol). Lipoprotein "a" concentrations also correlated with the clinical progression of the disease. The ratio amyloid ß(1-40)/ß(1-42) in plasma inversely correlated with the cognitive performance estimated by the Mini-Mental State Examination Test (MMSE). A defined function that weighs the contribution of the deleterious effect produced by combined free copper and Ox-HDL-cholesterol exposure directly correlated with the loss of cognitive performance. Thus, this biomarker could be a new tool for the screening of large populations under risk, or may be a useful way to estimate the efficacy of therapeuti approaches in patients suffering AD.

Foram estudadas 241 pessoas, 119 controles e 122 pacientes com doença de Alzheimer (DA), agrupados em três categorias de acordo com o estágio clínico da doença, com o objetivo de investigar a influência de níveis elevados de cobre livre e colesterol plasmático como fatores de risco para a DA. As conclusões obtidas a partir dos resultados indicaram que os pacientes expostos a uma combinação de colesterol alto e de cobre não ligados à ceruloplasmina apresentaram maior proporção de marcadores de estresse oxidativo (carbonilos proteicos, substâncias reativas ao tiobarbiturato, glutationa oxidada e diminuição dos antioxidantes totais no sangue ), juntamente com um aumento da HDL-colesterol peroxidado e lipoproteína "a" que correlacionou com a gravidade de sua condição. O mesmo aconteceu com a relação entre os peptídeos amilóides (1-40) e (1-42) em plasma e os valores do mini-teste do estado cognitivo (MMSE). Verificou-se que uma função de adição de efeitos que quantificou o dano por cobre livre e colesterol oxidado resultou diretamente proporcional à perda de desempenho cognitivo estimada através do MMSE. Esta função é fácil de determinar e pode ser considerada um novo biomarcador para estudar o risco em populações expostas, apoiar o diagnóstico clínico ou avaliar a eficácia de estratégias terapêuticas em pacientes com DA.

Inmunosupresión en donantes renales: Expresión de citoquinas proinflamatorias / Immunosuppression in kidney donors with rapamycin and tacrolimus: Proinflammatory cytokine expression

La lesión por isquemia y reperfusión (IRI) es uno de los principales problemas en el trasplante. Nuestro objetivo fue evaluar el efecto del pre - acondicionamiento al donante con rapamicina y tacrolimus para prevenir la lesión por IRI. Las ratas Wistar donantes, 12 horas antes de la nefrectomía, recibieron fármacos inmunosupresores. La muestra se dividió en cuatro grupos experimentales: un grupo con intervención simulada (sham), un grupo control sin tratamiento, otro tratado con rapamicina (2 mg/kg) y el restante tratado con tacrolimus (0.3 mg/kg). Se retiró el riñón izquierdo y después de tres horas de isquemia fría, se lo trasplantó. Veinticuatro horas después, el órgano trasplantado se recuperó para el análisis histológico y la evaluación de la expresión de citoquinas. El tratamiento de pre-acondicionamiento con rapamicina o con tacrolimus redujo significativamente el nitrógeno ureico en sangre y los niveles de creatinina en comparación con el control (BUN: p < 0.001; creatinina: p < 0.001). La necrosis tubular aguda fue significativamente menor en las ratas donantes tratadas con inmunosupresores en comparación con el grupo control (p < 0.001). Finalmente, las citoquinas inflamatorias, como TNF-α, IL-6 y rIL-21, mostraron niveles más bajos en el injerto de los animales que recibieron tratamiento. Este estudio experimental exploratorio muestra que el pre-acondicionamiento en donantes con rapamicina y tacrolimus en dos grupos distintos mejora los resultados clínicos y anatomopatológicos en receptores, con una reducción in situ de citoquinas pro-inflamatorias relacionadas con la diferenciación Th17, y de este modo crea un ambiente favorable para la diferenciación de células T regulatorias (Tregs).

The ischemia-reperfusion injury (IRI) remains a major problem in transplantation. The objective of this study was to evaluate the effects of preconditioning a donor group with rapamycin and another donor group with tacrolimus to prevent IRI. Twelve hours before nephrectomy, donor Wistar rats received immunosuppressive drugs. The sample was divided into four experimental groups: a sham group, an untreated control group, a group treated with rapamycin (2 mg/kg) and a group treated with tacrolimus (0.3 mg/kg). Left kidneys were removed and, after three hours of cold ischemia, grafts were transplanted. Twenty-four hours later, the transplanted organs were recovered for histological analysis and evaluation of cytokine expression. The pre-conditioning treatment with rapamycin or tacrolimus significantly reduced donor blood urea nitrogen and creatinine levels compared with control group (BUN: p < 0.001 vs. control and creatinine: p < 0.001 vs. control). Acute tubular necrosis was significantly lower in donors treated with immunosuppressant drugs compared with the control group (p < 0.001). Finally, inflammatory cytokines such as TNF-α, IL-6 and rIL-21 showed lower levels in the graft of pre-treated animals. This exploratory experimental study shows that preconditioning donors with rapamycin and tacrolimus in different groups improves clinical outcome and pathology in recipients and reduces in situ pro-inflammatory cytokines associated with Th17 differentiation, creating a favorable environment for the differentiation of regulatory T cells (Tregs).

Efectos de la eliminación de la tensión mediante puntos epineurales: estudio comparativo empleando diferentes técnicas de sutura en un modelo animal / Effects of tension elimination by using epineural anchoring stitches: a comparative study employing different techniques of suture in an experimental model

Objetivo. Documentar la utilidad de una técnica de sutura epineural bajo tensión, en comparación con la sutura mediante injerto interpuesto y la neurorrafia termino-terminal, en un estudio realizado en un modelo experimental animal (rata Wistar). Material y Método. Un lote de 20 animales, considerados como 40 unidades fisiológicas independientes a nivel del miembro inferior, fueron separados en 4 grupos de 10: en el primero se realizó una sutura bajo tensión con puntos epineurales a nivel del nervio ciático luego de resecar 4 mm de nervio. En el segundo se realizó una sutura término-terminal sin tensión, en el tercero se colocó un puente de injerto autólogo de 4 mm de extensión y el cuarto fue utilizado como control. A los 90 días de efectuados los procedimientos, se reexpusieron las zonas operadas y se documentaron las respuestas fisiológicas a los diferentes tipos de sutura mediante potenciales de acción de músculo (PAM) y nervio (PAN). Resultados. El promedio de la velocidad de conducción para la sutura simple fue el mejor de los tres grupos operados (14,60 mm/ ms), aunque peor que el control (19,31 mm/ms). La sutura a tensión mediante puntos epineurales (12,02 mm/ms) demostró resultados neurofisiológicos superiores que cuando se utilizó injerto autólogo (11,09 mm/ms). Conclusión. El presente estudio demuestra que si se logra coaptar un nervio ciático de rata mediante sutura epineural con puntos distales a la línea de neurorrafia, sus resultados son mejores que al emplear injerto. Sin embargo, estos resultados, obtenidos en un modelo de animal pequeño, deben ser cuidadosamente extrapolados a la práctica quirúrgica habitual.

Objective. To measure the utility of this technique, in comparison with interposed grafts and termino-terminal neuroraphy, all applied in an experimental model (Wistar rat).Materials and method. 20 rats were used in both sides (40 legs, each one considered as independent physiological units, were grouped in four groups: in the first one, a section of thesciatic nerve was performed, a segment 4mm long was discarded and an epineural suture with distal anchoring stitches was done under slight tension. In the second group a tensionlesstermino-terminal neuroraphy was performed after sciatic nerve section. In the third group a 4 mm long graft was employed and the fourth was used as control. 90 days after this procedure, the animals were reoperated and muscle and nerve action potentialswere recorded in both sides. Results. The mean conduction velocity for the simple suture was higher than the other two groups, but lower than the control(19,31 mm/ms). Neuroraphy with epineural stitches (12,02 mm/ms) was better than when an autologous nerve graft was employed (11,09 mm/ms).Conclusion. This study demonstrates that a good result can be obtained if a nerve is sutured under slight tension, employing epineural anchoring stitches. Nevertheless, more studies shouldbe performed before applying these results to human nerve suture.

Erythrocyte membrane, plasma and atherosclerotic plaque lipid pattern in coronary heart disease / Perfil lipídico de membrana de eritrocito, plasma y placa ateromatosa en la enfermedad coronaria

The objective was to analyze the lipid composition of the atherosclerotic plaque (AP), plasma and erythrocyte membrane (EM) in patients with advanced coronary heart disease (CHD). AP were obtained through endarterectomy in 18 patients. Ten normolipemic healthy subjects were selected to obtain the normal lipid pattern profile. Total lipids of AP and EM were determined by HPTLC, and the fatty acid profile from AP, EM and plasma using TLC-FID. The relative amount of the lipid species analyzed in AP was in line with the data in the literature [phospholipids: 23.5 mol% more or less 3.5; total cholesterol 68.9 mol% more or less 7.9; triglyceride 7.6 mol% more or less 3.4]. Plasma and EM from CHD patients compared to controls, showed a decrease in polyunsaturated fatty acids and an increase in saturated fatty acids leading to a decrease in the unsaturation index (plasma: 1.67 more or less 0.06 vs. 1.28 more or less 0.03, P less than 0.05; EM: 2.28 more or less 0.04 vs. 1.25 more or less 0.010, P less than 0.05) and an enhancement in the saturated/unsaturated ratio (plasma: 0.35 more or less 0.02 vs. 0.52 more or less 0.02, P less than 0.05; EM: 0.45 more or less 0.01 vs. 0.83 more or less 0.04, P less than 0.05). These data are consistent with an essential fatty acid deficiency. Total cholesterol was increased in the CHD's EM (32.3 more or less 0.8 vs. 40.6 more or less 2.5, P less than 0.05) with a decrease in phospholipid percentage (67.7 more or less 0.7 vs. 59.4 more or less 2.6, P less than 0.05) indicating an alteration in membrane fluidity. These findings suggest changes in EM lipids in CHD patients in spite of different pathological conditions such as age, smoking status and diabetes. The analysis of the lipid composition of EM could provide a useful tool to monitor the evolution of the CHD.

El objetivo fue analizar la composición lipídica de las membranas de eritrocitos (ME), plasma y placas ateromatosas (PA) en pacientes con enfermedad coronaria avanzada (ECV). Las PA fueron obtenidas de endarterectomías coronarias de 18 pacientes. Fueron seleccionados 10 sujetos sanos, normolipémicos, como grupo control. Los lípidos totales de PA y ME se determinaron utilizando HPTLC, y el perfil de ácidos grasos de las PA, ME y plasma mediante TLC-FID. La cantidad relativa de las especies lipídicas obtenidas de las PA coinciden con la literatura [fosfolípidos 23.5 mol% más o menos 3.5; colesterol total 68.9 mol% más o menos 7.9; triglicéridos 7.6 mol% más o menos 3.4]. En el plasma y en las ME de los pacientes con ECV se observó, comparando con los pacientes controles, una disminución de los ácidos grasos poli-no saturados acompañado de un aumento de los ácidos grasos saturados que provocó el descenso del índice de instauración (plasma: 1.67 más o menos 0.06 vs. 1.28 más o menos 0.03, P menor que 0.05; ME: 2.28 más o menos 0.04 vs. 1.25 más o menos 0.010, P menor que 0.05) y el incremento del cociente AG saturados/insaturados (plasma: 0.35 más o menso 0.02 vs. 0.52 más o menos 0.02, P menor que 0.05; ME: 0.45 más o menos 0.01 vs. 0.83 más o menos 0.04, P menor que 0.05). Estos datos indicarían una deficiencia de ácidos grasos esenciales. Se observó una elevación en los valores de colesterol total (32.3 más o menos 0.8 vs. 40.6 más o menos 2.5, P menor que 0.05) y una disminución de los valores de fosfolípidos (67.7 más o menos 0.7 vs. 59.4 más o menos 2.6, P menor que 0.05) en las ME de los pacientes con ECV. Estos hallazgos sugieren cambios en los lípidos de las ME en los pacientes con ECV a pesar de presentar diferencias con respecto a edad, tabaquismo y diabetes. El conocimiento del perfil lipídico de las ME podría constituirse en una herramienta útil para monitorear la evolución de la enfermedad.

Trasplante hepático ortotápico en ratas. Técnica quirúrgica, complicaciones y sus tratamientos / Orthotopic liver transplantation in rats

The orthotopic rat liver transplant model is a widely used technique in transplantation research. It has many advantages over other animal transplant models because of its availability and low cost. However, it must be emphasized that success with the rat model requires thorough training. The aim of this paper is to describe the microsurgical technique involved in 60 rat liver transplants and to discuss the complications and their treatments. Forty-nine liver transplants were performed at the Experimental Laboratory of the University Hospital, Ontario, Canada (ELUH) and 11 were performed at the Laboratorio de Trasplante de Organos de la Facultad de Ciencias Medicas de La Plata, Buenos Aires. Argentina (LTO). Among the transplants performed at the ELUH, the observed complications were haemorrhage (n = 4), pneumothorax (n = 1), anastomotic failure (n = 15), bile leak (n = 3), and bile duct necrosis (n = 9). The remaining 17 rats at the ELUH were healthy at day 7 after surgery. Animal survival immediately postop, at 24 hours postop and at 7 days postop was achieved with the 9th, 20th and 21st transplants respectively. At the LTO, 3 rats died as a result of anaesthetic complications. Seven-day animal survival was achieved with the 11th transplant. We beleive that the description of the orthotopic rat liver transplantation technique, as well as the discussion regarding complications and their management, can be useful for researchers interested in performing liver transplantation in rats