Aislamiento e identificación de las células fetales presentes al nacimiento en la circulación materna / Identification at delivery of fetal cells in the maternal circulation

Introducción. El objetivo es presentar un modelo experimental para el aislamiento de las células fetales presentes en la circulación materna.Material y métodos. Se estudiaron a mujeres Rh negativo al final del evento obstétrico, recolectándose sangre venosa materna y del cordón umbilical del recién nacido. Se aislaron las células fetales en circulación materna mediante centrifugación con gradiente de separación, seguido de separación selectiva con perlas magnéticas marcadas anti-CD14 y anti-CD45, para posteriormente retirar los eritroblastos fetales con anti-CD71. A las células obtenidas en este último paso se les extrajo el ADN para amplificar mediante PCR, las regiones de los exones 4 y 5 de los genes RhD y RhCE. El fenotipo del Rh materno y neonatal se estableció mediante inmunohemaglutinación.Resultados. Se estudiaron 7 mujeres Rh negativo y sus respectivos hijos con fenotipo Rh positivo. De las células fetales aisladas se amplificaron en PCR dos bandas en electroforesis, una de 1 200 pares de bases (pb) para el gen RhD y otra de 600 pb para el gen RhCE. Los recién nacidos mostraron ambas bandas, mientras que las madres sólo presentaron la banda de 600 bp (Gen RhCE). Se obtuvo concordancia entre el fenotipo y el genotipo del RhD en 6 de 7 casos. En un caso no se obtuvo suficiente material celular para obtener ADN. Conclusión. Se muestra una estrategia que puede permitir el aislar células fetales de la circulación materna, abriendo una posibilidad de que posteriormente sea validado para el estudio del ADN mediante procedimientos sin riesgo fetal alguno.

Evaluación de la enfermedad hemolítica por anti-D: resultados en el recién nacido / evaluationEvaluation of hemolytic disease by anti-D. Results in the newborn

Introducción. Objetivo: describir la condición al nacimiento y evolución intrahospitalaria del neonato con enfermedad hemolítica por anti-D.Material y métodos. Se estudiaron a embarazadas Rh negativo, con isoinmunización al antígeno RhD y sometidas a espectrofotometría de bilirrubina (Br) en líquido amniótico (EBLA). Se compararon los datos clínicos y demográficos de neonatos con enfermedad hemolítica (EH), comparándose el último estudio de EBLA con el esquema de Liley-Sentíes. Se formaron los grupos 1, 2 y 3, para estratificar la EH fetal como leve, moderada y grave.Resultados. Se incluyeron 67 casos, con 31, 17 y 19 neonatos, para cada grupo. Los casos del grupo 3 fueron de menor edad gestacional, 34.4 semanas (P< 0.001), peso 2 223 g (P <0.001) y hematócrito 36 por ciento (P <0.01). Los valores máximos de Br y días de estancia en fototerapia fueron similares. La transfusión eritrocitaria fue en proporción de 0.09, 0.23 y 0.52, para cada grupo (P <0.003). La exsanguinotransfusión fue de 0.16, 0.29 y 0.68 (P< 0.001). Los días de estancia fueron de 5, 9 y 23 días, respectivamente (P< 0.001).Conclusión. La estancia hospitalaria prolongada depende de la edad gestacional, la severidad de la EH y de la morbilidad hospitalaria asociada. El esquema de Liley-Sentíes, es un criterio vigente para la estratificación de la EH con utilidad pronóstica y terapéutica.