Expresión de calreticulina en placenta canina / Calreticulin expression in canine placenta

La placenta es un anexo embrionario de los mamíferos que tiene por función principal el intercambio de nutrientes y gases y proteger al concepto de un potencial daño inmune provocado por diferencias alogénicas en los Complejos Principales de Histocompatibilidad paternos. Se han descrito diversas proteínas asociadas a su función, siendo Calreticulina una de ellas. Si bien existen estudios de la presencia de Calreticulina en placenta humana, no existen reportes de esta proteína en la placenta canina. Se obtuvieron muestras de placenta canina de las que se extrajo el contenido proteico total y se determinó la presencia de Calreticulina por western blot e inmunohistoquímica. Los resultados mostraron presencia de Calreticulina en placenta canina con un peso molecular aparente de 60 kDa, concordante con lo descrito para la molécula por otros autores. El análisis inmunohistoquímico mostró que Calreticulina canina está presente principalmente en el trofoblasto de las vellosidades, no existiendo diferencias en cuanto a su localización al compararla con placenta humana, pese a sus diferencias morfológicas e histológicas. Esta información permitirá establecer un protocolo estandarizado de extracción de Calreticulina desde placenta, así como orientar acerca de los posibles roles de esta molécula en la placenta.

The placenta is an embryonic organ present in mammals, whose main functions are the exchange of nutrients and gases and to protect the fetus from potential immune damage mediated by paternal and maternal allogeneic differences in the Major Histocompatibility Complex. Several proteins associated with its function have been described, being Calreticulin one of them. Although there are studies on the presence of Calreticulin in human placenta, there are no reports of this protein in canine placenta. Samples from canine placenta were obtained, proteins extracted and Calreticulin was subsequently detected by western blot and immunohistochemistry. The results showed the presence of Calreticulin in canine placenta with an apparent molecular weight of 60 kDa, in agreement with the results from other authors. The immunohistochemical analysis showed that canine Calreticulin is present mainly in the trophoblast of the villi, and there is no difference in its localization when compared with a blood-filled placenta such as human one, despite its morphological and histological differences. We also propose a standardized protocol for the extraction of Calreticulin from placenta, given its abundant expression in this organ. Future studies are aimed at elucidating possible roles of this protein in placenta.

Efecto antiangiogénico de la triamcinolona asociada a lidocaína con epinefrina de uso odontológico en la membrana alantocoriónica de pollo / Antiangiogenic effect of triamcinolone associated with lidocaine with epinephrine for dental use in chicken chorioallantoic membrane

RESUMEN: El proceso angiogénico se define como el proceso en el que los vasos sanguíneos generan brotes dando como resultado neovascularidad. Un desbalance en el proceso angiogénico contribuye a numerosos desórdenes inflamatorios, infecciosos, isquémicos, inmunológicos y malignos. En el territorio maxilofacial se pueden encontrar patologías neoplásicas benignas de desarrollo local con un marcado componente angiogénico que determinan su crecimiento y agresividad. Sin embargo, existe escasa evidencia de cómo tratarlas en base al control de la angiogénesis. Terry & Jacoway (1994) desarrollaron un protocolo de tratamiento para lesiones neoplásicas benignas con un importante componente vascular que se utiliza actualmente. Este protocolo consiste en la infiltración intralesional de una suspensión de triamcinolona 10 mg/ml más una solución de anestésico local de uso odontológico como la lidocaína al 2 % asociada a epinefrina en una concentración de 1:200.000. Sin embargo, el uso de epinefrina podría disminuir la acción antiangiogénica de la triamcinolona al ser un vasoconstrictor. El objetivo de este estudio es comparar el efecto antiangiogénico, en la membrana alantocoriónica de pollo (MAC), de esta suspensión versus el efecto de la triamcinolona sin asociar a anestésicos locales. Los resultados del efecto antiangiogénico en la MAC de pollo, obtenidos en la investigación concluyeron que la suspensión de triamcinolona asociada a lidocaína con epinefrina es similar al de la suspensión de triamcinolona sin asociar a anestésicos locales. Además, se logró determinar que las suspensiones de triamcinolona sin asociar a anestésicos locales y las asociadas a anestésicos locales con o sin vasoconstrictor poseen un marcado efecto antiangiogénico, en la MAC de pollo, en comparación al grupo control.

SUMMARY: Angiogenesis is defined as the process through which new blood vessels form from previously existing vessels. Several inflammatory, infectious, ischemic, immunological and malignant disorders are caused by the lack of adequate angiogenesis balance. In the maxillofacial area, there are invasive benign neoplastic pathologies with a strong angiogenic component, which determines aggressive behavior and growth. Studies in the literature are scarce regarding treatment of these conditions based on angiogenesis control. Currently, the protocol used to treat these maxillofacial benign neoplastic lesions, was developed in 1994 by Terry & Jacoway and has a strong angiogenic component. Consequently lesions are treated via intra-lesion administration of triamcinolone 10 mg / mL, a solution used in dental local anesthetic, such as lidocaine 2 %, in conjunction with epinephrine at a concentration of 1:200,000. The objective of this study was to compare the antiangiogenic effect of this protocol in chicken chorioallantoic membrane (CAM) without the use of local anesthetic. The results of the antiangiogenic effect in the CAM obtained in this study concluded that the effect of the suspension of triamcinolone associated to lidocaine with epinephrine, is similar to the suspension of triamcinolone without associating local anesthetics. Furthermore, it was determined that suspensions of triamcinolone without local anesthetic, and those associated to local anesthetic with, and without vasoconstrictor have a strong antiangiogenic effect in CAM compared to the control group.

Efecto del aliskireno sobre la angiogénesis en modelo de membrana alantocoriónica (MAC) de pollo / Effect of aliskiren on angiogenesis in chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) assay

La acción antiangiogénica de los inhibidores del receptor de angiotensina II (ARA II), ha sido documentada previamente, sin embargo, no ha sido descrita la relación entre angiogénesis e inhibidores directos de la renina (DRIs), los cuales participan regulando el sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA). El objetivo fue demostrar el efecto antiangiogénico de aliskireno, un DRI, en membranas alantocoriónicas (MAC) de pollo, para lo cual fueron instilados aliskireno y enalapril sobre MAC en distintas concentraciones para realizar su comparación posterior. En secciones histológicas seriadas se registró el número de vasos sanguíneos presentes en 9000 µm2 bajo microscopio de luz a máximo aumento, y se realizó análisis estadístico utilizando ANOVA y el test de Tukey para demostrar posibles diferencias. Los receptores tratados con aliskireno, en ambas concentraciones utilizadas, presentaron menor densidad vascular, en comparación con los controles, siendo ésta estadísticamente significativa a mayor concentración. Aliskireno en concentraciones altas tiene un efecto antiangiogénico en un modelo experimental de MAC. Este hallazgo plantea la necesidad de estudios posteriores, dada la proyección que podría tener el uso inhibidores directos de la renina. A partir de estos resultados, se podría pensar en la factibilidad del uso de aliskireno para la modulación de la angiogénesis en diversas enfermedades crónicas no transmisibles.

Angiogenesis is the formation of new blood vessels from pre-existing ones. Antiangiogenic effect of angiotensin receptor blockers has been reported, however, the relationship between direct renin inhibitors and angiogenesis has not been well described. To assess the antiangiogenic effect of aliskiren, a direct renin inhibitor, on chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) assay. Aliskiren and enalapril were instilled in different concentrations and compared. In serial histological sections, the number of blood vessels per 9000 µm2 area under observation through optical microscope using maximum zoom, was registered. Statistical analysis using Anova and Tukey test in order to show possible differences, was performed. Receptors treated with aliskiren presented lower vascular density, which was statistically significant when a higher concentration was administered. High concentrations of aliskiren have an antiangiogenic effect on CAM assay. This finding means further studies are needed, because of the usefulness direct renin inhibitors could have. These results, also, might enhance the possibility of using aliskiren for regulating angiogenesis in the context of non-transmissible chronic diseases.

Efecto de celecoxib en una variante multirresistente del tumor TA3: una descripción histológica / Celecoxib effect in a multiresistant variant of the TA3 tumor: a histologic

En el estudio del cáncer, se utilizan diversas líneas celulares, cada una de ellas con características propias. Una de esas líneas tumorales es la variante multirresistente a drogas del tumor TA3. Si bien, existen diversos estudios con esta línea tumoral, no existe una descripción morfológica detallada de esta, ni tampoco que se observe el efecto del Celecoxib, un inhibidor de COX-2 sobre este tejido. Se usaron 18 ratones divididos en 3 grupos, los cuales recibieron: Inoculación de PBS; inoculación de células tumorales TA3; inoculación de células tumorales + tratamiento con Celecoxib (1000 ppm), respectivamente. Los ratones fueron sacrificados y procesados histológicamente para ser teñidos con H&E, PAS y Arteta. El estudio reveló que tumor muestra una marcada heterogeneidad, algunas áreas de necrosis y una neovascularización central y periférica. Además, Celecoxib redujo significativamente la invasión tumoral en el hígado (p < 0,05). Otros órganos no sufrieron diferencias significativas cuando eran comparados con el grupo tratado. Los resultados son similares a descripciones parciales realizadas previamente y son comparables a otras líneas tumorales. Se cree que la vía de administración del fármaco es crítica para la interpretación de los resultados. Estos resultados son importantes para la discusión de otras investigaciones en donde Celecoxib es usado como un fármaco antiangiogénico y sirve como base para futuras investigaciones con esta línea tumoral.

In the study of cancer diverse cellular lines are in use, each with its own characteristics. One of these tumor lines is the TA3 tumor variant, multi resistant to drugs. Although diverse studies exist in reference to this tumor line, there are no detailed morphological descriptions of this one, nor those that observe the effect of Celecoxib, a COX-2 tissue inhibitor. We used 18 mice divided in 3 groups that received PBS inoculation; TA3 tumor cell inoculation; cell tumor inoculation + treatment with Celecoxib (1000ppm) respectively. The mice were sacrificed and histologically processed with H & E, PAS and Arteta stain. The study revealed that tumor showed a marked heterogeneity, some areas of necrosis and central and peripheral neovascularization. Furthermore, Celecoxib significantly reduced tumor invasion in the liver (p< 0.05). Other organs did not show significant differences when compared with the treated group. The results are similar to partial descriptions realized in the past and are comparable to other tumor lines. It is estimated that the route of medication administration is critical for result interpretation. These results are important in the discussion of other research where Celecoxib is used as an antiangiogenic drug and serves as base for future research within this tumor line.

Rosácea: puesta al día / Rosacea: update

Rosacea is a chronic inflammatory disease. Its frequency is higher in pale-skinned people and women over 30 years. Disease mechanisms include: abnormalities in innate immunity, inflammatory reactions to microorganisms, ultraviolet radiation damage, and vascular dysfunction. There are four clinical subtypes: erythematotelangiectatic, pustular papules, phymatous and ocular rosacea. Patients may present one or more characteristics of each subtypes. Injuries are classically located in midface area. Extreme temperatures, UV radiation, hot beberages, spicy foods, alcohol, exercise, topical irritants, psychological symptoms and drugs are associated to exacerbations. Clinical evaluation of the patient is usually enough for diagnosis. Nonpharmacologic interventions are essential for treatment. These include avoiding use of cosmetic, and triggers, skin care, and broad-spectrum sun protection. Patients with no response to general measures can respond to pharmacological agents. Topical metronidazole and azelaic acid are considered first-line treatments in mild to moderate disease. Oral tetracycline, have been used for many years for the treatment of papulopustular rosacea. Isotretinoin is useful in refractory disease. Treatment must be continous to maintain the response. (AU)

Actividad angiogénica comparada de líquido cefalorraquídeo de pacientes con tumores primarios del sistema nervioso central / Compared angiogenic activity of cerebrospinal fluid of patients with primary central nervous system tumors

Introducción: Los tumores cerebrales continúan siendo una patología de mal pronóstico, lo que se refleja en la baja expectativa de vida de quienes los padecen. La angiogénesis es un proceso cardinal en el crecimiento tumoral y en la producción de metástasis. No obstante el conocimiento de los mecanismos subyacentes a la oncogénesis, las terapias continúan obteniendo resultados modestos. Está demostrado que el parénquima tumoral secreta factores que estimulan la cascada angiogénica. Sin embargo, no existen trabajos que evalúen el efecto angiogénico del líquido cefalorraquídeo (LCR). La hipótesis propuesta en este trabajo es que el LCR de los pacientes con tumores primarios del sistema nervioso central (SNC), posee en sí mismo propiedades angiogénicas. Material y Método: Estudio experimental preclínico. Se utilizó, en ciento ochenta huevos de gallina White Leghorn, el modelo de membrana alantocoriónica (MAC) de pollo. Estos huevos fueron incubados y sobre la membrana se implantaron filtros de metilcelulosa con líquidos cefalorraquídeos de pacientes con diferentes tumores cerebrales. Al grupo control se le adicionó suero fisiológico. Tras diez días de incubación se realizaron cortes histológicos de las muestras y se procedió al conteo de vasos sanguíneos en un microscopio con rejilla graduada. Resultados: Se demostró con significancia estadística (p<0,05) que existe efecto angiogénico en el LCR de pacientes con tumores primarios del SNC. Discusión: A partir de los resultados obtenidos, podemos proyectar futuros trabajos hacia nuevas terapias enfocadas en la angiogénesis diferencial. Los factores angiogénicos presentes en el LCR podrían constituir un nuevo blanco terapéutico contra los tumores cerebrales.

Introduction: Nowadays, brain tumors remains being a poor-prognosis pathology, which is reflected in the low life expectancy of the patients. The angiogenesis, is a fundamental process in the tumoral growing and the metastatic feasibility. In spite of knowing of the underlying mechanism of the oncogenesis, therapies still get poor results. It is demonstrated that tumoralparenchyma secretes factors that enhance the angiogenic cascade. However, any work has ever evaluated the angiogenic effect in the cerebrospinal fluid (CSF) itself. We hypothesize that CSF belonging of patients with primary central nervous system (CNS) brain tumors, presents angiogenic properties on their own. Material and Method: Preclinical experimental trial. In 180 eggs of White Legorn chicken it was used the chorioallantoic membrane (CAMA) assay. This eggs were incubated for tendays and over the membrane were implanted methylcellulose filters containing cerebrospinal fluid coming from patients affected by different brain tumors. The control group was instilledwith saline solution. It was performed different histological sections of the samples and then proceeded to the counting of the vessels in a microscope with a squared grille inside it. Results:We demonstrated with statistical significance (p<0.05) that CSF from primary brain tumor’s affected patients presents angiogenic effect. Discussion: Owing the presented results, we can plan future investigations targeting new therapies focused on the differential angiogenesis. The angiogenic factors in the CSF could represent a new therapeutic target against brain tumors.

Estado actual de la terapia antiangiogénica en el manejo de gliomas de alto grado / Present state of the antiangiogenic therapy in the management of gliomas of high degree

High grade gliomas are lethal cancers. Despite recent advances in surgery, radiotherapy and chemotherapy, the overall survival is 15 months for glioblastoma. They are among the most vascular of human tumors, making them especially attractive targets for angiogenesis inhibitors. Most clinical trials of these agents as monotherapy have failed to demonstrate survival benefit in unselected high grade glioma patient populations. Several mechanisms of treatment failure have been postulated. In response, there are new intervention strategies on course: the combination of target therapy with classic chemotherapy, multitargeted kinase inhibitors and combinations of single-targeted kinase inhibitors and the identification of correlative biomarkers. These advances provide real opportunities for the development of effective therapies for high grade gliomas.