The influence of growth time on the identification of Bartonella henselae strains by MALDI-TOF mass spectrometry

ABSTRACT Bartonella spp. are bacteria responsible for neglected diseases worldwide. Bartonella henselae is the species most associated with human infections. It is associated with a large spectrum of clinical manifestations and is potentially fatal. The identification of Bartonella spp. is considered a challenge in clinical routine. These bacteria are fastidious, and the time required to isolate them varies from one to six weeks. MALDI-TOF mass spectrometry has emerged as an application for research on Bartonella spp. , and has still been little explored. We investigated whether three different B. henselae strains with different growth times—14 and 28 days—could be correctly identified by MALDI-TOF mass spectra fingerprint comparison and matching. We found that the spectra from strains with different growth times do not match each other, leading to misidentification. We suggest creating database entries with multiple spectra from strains with different growth times to increase the chances of accurate identification of Bartonella spp. by MALD-TOF MS.

Chloride and sodium ion concentrations in saliva and sweat as a method to diagnose cystic fibrosis / Dosagem da concentração dos íons cloreto e sódio na saliva e no suor para o reconhecimento de pacientes com fibrose cística

Abstract Objective: Cystic fibrosis diagnosis is dependent on the chloride ion concentration in the sweat test (≥ 60 mEq/mL - recognized as the gold standard indicator for cystic fibrosis diagnosis). Moreover, the salivary glands express the CFTR protein in the same manner as sweat glands. Given this context, the objective was to verify the correlation of saliva chloride concentration and sweat chloride concentration, and between saliva sodium concentration and sweat sodium concentration, in patients with cystic fibrosis and healthy control subjects, as a tool for cystic fibrosis diagnosis. Methods: There were 160 subjects enrolled: 57/160 (35.70%) patients with cystic fibrosis and two known CFTR mutations and 103/160 (64.40%) healthy controls subjects. Saliva ion concentration was analyzed by ABL 835 Radiometer® equipment and, sweat chloride concentration and sweat sodium concentration, respectively, by manual titration using the mercurimetric procedure of Schales & Schales and flame photometry. Statistical analysis was performed by the chi-squared test, the Mann -Whitney test, and Spearman's correlation. Alpha = 0.05. Results: Patients with cystic fibrosis showed higher values of sweat chloride concentration, sweat sodium concentration, saliva chloride concentration, and saliva sodium concentration than healthy controls subjects (p-value < 0.001). The correlation between saliva chloride concentration and sweat chloride concentration showed a positive Spearman's Rho (correlation coefficient) = 0.475 (95% CI = 0.346 to 0.587). Also, the correlation between saliva sodium concentration and sweat sodium concentration showed a positive Spearman's Rho = 0.306 (95% CI = 0.158 to 0.440). Conclusions: Saliva chloride concentration and saliva sodium concentration are candidates to be used in cystic fibrosis diagnosis, mainly in cases where it is difficult to achieve the correct sweat amount, and/or CFTR mutation screening is difficult, and/or reference methods for sweat test are unavailable to implement or are not easily accessible by the general population.

Resumo Objetivo: O diagnóstico da fibrose cística depende do valor da concentração de íons de cloreto no teste do suor (≥ 60 mEq/mL - reconhecido como o indicador-padrão para o diagnóstico da doença). Além disso, as glândulas salivares expressam a proteína RTFC igualmente às glândulas sudoríparas. Nesse contexto, nosso objetivo foi verificar a correlação da concentração de cloreto na saliva e a concentração de cloreto no suor e entre a concentração de sódio na saliva e a concentração de sódio no suor em pacientes com fibrose cística e indivíduos controles saudáveis, como uma ferramenta para diagnóstico de fibrose cística. Métodos: Contamos com a participação de 160 indivíduos [57/160 (35,70%) com fibrose cística e duas mutações no gene RTFC conhecidas e 103/160 (64,40%) indivíduos controles saudáveis]. A concentração de íons na saliva foi analisada pelo equipamento ABL 835 da Radiometer® e a concentração de cloreto no suor e sódio no suor, respectivamente, por titulação manual utilizando o método mercurimétrico de Schales & Schales e fotometria de chama. A análise estatística foi realizada pelo teste qui-quadrado, pelo teste de Mann-Whitney e pela correlação de Spearman. Alpha = 0,05. Resultados: Os pacientes com fibrose cística apresentaram maiores valores na concentração de cloreto no suor, concentração de sódio no suor, concentração de cloreto na saliva e concentração de sódio na saliva do que os indivíduos-controle saudáveis (valor de p < 0,001). A correlação entre as concentrações de cloreto na saliva e cloreto no suor mostrou Rho de Spearman (coeficiente de correlação) positivo = 0,475 (IC de 95% = 0,346 a 0,587). Além disso, a correlação entre concentração de sódio na saliva e concentração de sódio no suor mostrou Rho de Spearman positivo = 0,306 (IC de 95% = 0,158 a 0,440). Conclusões: A concentração de cloreto na saliva e a concentração de sódio na saliva são candidatas a ser usadas como diagnóstico de fibrose cística, principalmente em casos em que é difícil atingir a quantidade correta de suor, e/ou o exame da mutação RTFC é difícil e/ou o método de referência para o teste do suor não se encontra disponível ou não é de fácil acesso ao público em geral.

Preservation of cytotoxic granule production in response to mycobacterial antigens by T-lymphocytes from vertically HIV-infected Brazilian youth on effective combined antiretroviral therapy

ABSTRACT Background: HIV infection harms adaptive cellular immunity mechanisms. Long-term virological control by combined antiretroviral therapy (cART) reduces the risk of mycobacterial infections. Thus, we aimed to study cellular responses to mycobacterial antigens in 20 HIV-infected adolescents with at least one year of virological control (HIV-RNA <40 copies/mL) and 20 healthy adolescents. Methods: We evaluated CD8 and γδ T-cell degranulation by measurement of CD107a membrane expression after stimulation with lysates from BCG (10 µg/mL) and H37RA Mycobacterium tuberculosis (Mtb, 10 µg/mL). Immune activation and antigen-presenting ability were also assessed by determination of HLA-DR, CD80, and CD86 markers. Results: TCR γδ T-cell CD107a expression was similar between groups in response to mycobacterial antigens, and lower in the HIV-infected group in response to mitogen. Higher baseline HLA-DR expression and lower mycobacterial-stimulated expression was found within the HIV-infected group. Conclusions: Similar degranulation in stimulated CD8+ and TCR γδ T-cells from HIV-infected adolescents, when compared to healthy controls suggests long-term immunological preservation with immune reconstitution under successful cART. However, differences in HLA-DR expression may represent ongoing inflammation and lower specific responses in HIV-infected youth. These features may be relevant in the context of the precocity and severity of vertically acquired HIV infection.

A practical molecular identification of nonfermenting Gram-negative bacteria from cystic fibrosis

Abstract Identification of nonfermenting Gram-negative bacteria (NFGNB) of cystic fibrosis patients is hard and misidentification could affect clinical outcome. This study aimed to propose a scheme using polymerase chain reaction to identify NFGNB. This scheme leads to reliable identification within 3 days in an economically viable manner when compared to other methods.

Oral health in patients with cystic fibrosis

The oral health in patients with cystic fibrosis (CF) is not well studied. Aim: In this context, we describe the frequency of dental problems and performed the description of plaque index and gingival index in patients with CF. Methods: We performed a descriptive study about oral health enrolling 94 patients with CF. Results: The CF diagnosis was done considering the sweat test with chloride values ≥ 60 mmol/L. The permanent dentition was predominant in 57/94 (60.64%) patients with CF ­ 28/57 (49.12%) caries, 57/57 (100%) filled teeth and 1/57 (1.75%) missing tooth. Deciduous teeth occurred in 37/94 (39.36%) patients with CF ­ 22/37 (59.46%) carious, 29/37 (78.38%) exfoliated teeth, 20/37 (54.05%) filled teeth. Also, the plaque index and gingival index had scored less than one in many cases (≥ 50% of the cases). Conclusions: Patients with CF showed oral health problems with prevalence comparable to that of the normal population and low values in the plaque index and gingival index

The influence of glycerol upon L. reuteri activity against enteropathogens / A influência do glicerol sobre a atividade de L. Reuteri contra enteropatógenos

BACKGROUND: Probiotics containing L. reuteri are popular for treating and preventing bacterial gastrointestinal infections. L. reuteri, produces reuterin, an antibiotic that inhibits gram-negative bacteria. Reuterin production is the result of glycerol fermentation by L reuteri. Although L. reuteri is normally present in the gastrointestinal system, only small amounts of glycerol are usually available; therefore, the production of reuterin may not occur and this could reduce the effectiveness of the probiotic supplement. Our objective is to identify the minimum concentrations of glycerol required for L. reuteri to exert an inhibitory effect on enteropathogenic enterobacteriaceae. METHOD: Samples containing 10(8) colony forming units (CFU) of L. reuteri DSM17938 (Colikids®, Ache, Brazil/BioGaia, Sweden) were grown with varying concentrations of glycerol (0.05-5%). 10(6) CFU of E.coli (CDC0126/INCQS/FIOCRUZ), Shigella flexneri (ATCC/120022), S. enterica (ATCC6539) and Y. enterocolitica (ATCC9610) were inoculated with L. reuteri in the different glycerol concentrations. Each enterobacteria and glycerol 5% without L. reuteri cultures were used as positive control groups. RESULTS: All bacteria were completely inhibited at higher ranges of glycerol concentrations (0.2-5%) and grew at lower concentrations (0.05-0.1%). CONCLUSION: L. reuteri requires at least 0.2% of glycerol to completely inhibit enterobacterial growth. These preliminary findings may influence the current method of use of probiotic supplements. The antibiotic activity of L. reuteri may have potential clinical use against important enteropathogens.

CONTEXTO: Os probióticos que contêm L. reuteri são populares para tratar e prevenir infecções bacterianas do trato gastrointestinal. L. reuteri produz reuterina, um antibiótico que inibe bactérias gram-negativas. A produção de reuterina depende da presença de quantidades adequadas de glicerol, cuja fermentação resulta na produção do antibiótico. Embora L. reuteri esteja normalmente presente no sistema GI, apenas pequenas quantidades de glicerol estão geralmente disponíveis; portanto, a produção de reuterina pode não ocorrer o que poderia reduzir a eficácia do suplemento probiótico. Nosso objetivo é identificar as concentrações mínimas de glicerol necessárias para que L. reuteri exerça um efeito inibitório nas enterobacteriaceas enteropatogênicas. MÉTODO: 108 CFU de L. reuteri DSM17938 (Colikids®, Ache, Brasil / BioGaia, Suécia) cresceu com concentrações variáveis de glicerol (0,05-5%). Foram inoculadas 106 UFC de E. coli (CDC0126 / INCQS / FIOCRUZ), Shigella flexneri (ATCC / 120022), S. enterica (ATCC6539) e Y. enterocolitica (ATCC9610) com L. reuteri nas diferentes concentrações de glicerol. Cada enterobacteria e glicerol 5% sem culturas de L. reuteri foram utilizadas como grupos de controle positivo. RESULTADOS: Todas as bactérias foram completamente inibidas em maiores concentrações de glicerol (0.2-5%) e cresceram em concentrações mais baixas (0.05-0.1%). CONCLUSÃO: L. reuteri requer pelo menos 0,2% de glicerol para inibir completamente o crescimento de enterobacteria. Essas descobertas preliminares podem influenciar o método atual de uso de suplementos de probióticos. A atividade antibiótica de L. reuteri pode ter potencial uso clínico contra importantes enteropatógenos.

Molecular Characterization of Group B Streptococcus Serotypes By Multiplex Polymerase Chain Reaction / Caracterização molecular dos sorotipos de estreptococos do grupo b por reação multiplex pcr

OBJECTIVE: Group B Streptococcus (GBS) serotypes (Ia, Ib and II to IX) are classified based on variations in their capsular polysaccharide; their prevalence differs between different geographic areas. We examined the prevalence of all GBS serotypes in rectal and vaginal swab samples obtained from 363 pregnant women followed at a Brazilian referral center (Hospital da Mulher Professor Doutor José Aristodemo Pinotti); bacterial susceptibility to antibiotics was further determined. METHOD: Prevalence of positive GBS was evaluated by latex agglutination and by multiplex PCR analysis; bacterial susceptibility to antibiotics, such as clindamycin, erythromycin, levofloxacin, linezolid, penicillin and tetracycline was determined by the disk diffusion method. RESULTS: (a) standard GBS culture and the multiplex PCR analysis tested positive for 83 swabs, collected from 72 women (prevalence of GBS colonization: 72/363; 20%); the most prevalent Serotype was Ia (n=43/83; 52%), followed by serotype V (n=14/83; 17%); according to anatomical origin, serotype Ia accounted for 27/59 (46%) and 16/24 (67%) of the vaginal and rectal samples, respectively; PCR also identified serotypes Ib, II, III and VI. Serotype VI is rarely described and had not been previously reported in Brazil or in Latin America. (b) The latex agglutination test only identified 44 positive samples, all of which were serotyped: 34 of these samples (77%) had serotypes matching those identified by multiplex PCR. (c) Only one sample (serotype Ia) showed resistance to erythromycin and clindamycin. CONCLUSION: Regional studies on GBS serotypes prevalence are essential to guide immunoprophylactic interventions (vaccines) and the implementation of adequate antibiotic prophylaxis or treatment. In this study, the incidence of the serotype VI, a new and rare serotype of GBS was described for the first time in a Brazilian population.

OBJETIVO: Os sorotipos (Ia, Ib e II ao IX) do estreptococo do grupo B (GBS) são classificados baseado nas variações em seus polissacarídeos capsulares; sua prevalência difere entre diferentes áreas geográficas. Nós examinamos a prevalência de todos os sorotipos do estreptococo do grupo B em amostras de swabs vaginal e retal obtidas de 363 mulheres seguidas em um centro de referência brasileiro, o Hospital da Mulher Professor Doutor José Aristodemo Pinotti; a susceptibilidade bacteriana a antibióticos foi também determinada. MÉTODO A prevalência de estreptococo do grupo B positivo foi avaliada por aglutinação em látex e através de análise por multiplex PCR; susceptibilidade bacteriana a antibióticos, tais como clindamicina, eritromicina, levofloxacin, linezolide, penicilina e tetraciclina foi determinada pelo método de disco difusão. RESULTADOS: (a) Tanto a cultura padrão para estreptococo do grupo B quanto a análise por multiplex PCR testaram positivos para 83 swabs. A prevalência para colonização por GBS foi 20%. O sorotipo Ia foi o mais prevalente (n= 43/83; 52%), seguido pelo sorotipo V (n= 14/83; 17%); De acordo com a origem anatômica, o sorotipo Ia positivou 27/59 (46%) e 16/24 (67%) das amostras vaginais e retais, respectivamente; o teste de PCR também identificou os sorotipos Ib, II, III, VI. O sorotipo VI é raramente descrito e não reportado no Brasil ou na América Latina até esta data. (b) O teste de aglutinação em látex somente identificou 44 amostras positivas, todas das quais foram sorotipadas: 34 destas amostras (77%) tiveram os sorotipos coincidindo com aqueles identificados pela multiplex PCR. (c) Somente uma amostra (sorotipo Ia) mostrou resistência a eritromicina e clindamicina. CONCLUSÃO: Estudos regionais sobre a prevalência dos sorotipos do estreptococo do grupo B são essenciais para guiar medidas imunoprofiláticas (vacinas) e a implementação de adequada antibiótico profilaxia. Neste estudo, a incidência do sorotipo VI foi descrita pela primeira vez na população Brasileira, um novo e raro sorotipo do estreptococo do grupo B.

Enterocytozoon bieneusi detected by molecular methods in raw sewage and treated effluent from a combined system in Brazil

BACKGROUND Enterocytozoon bieneusi are the most common microsporidia associated with different clinical manifestations such as diarrhoea, respiratory tract inflammation and acalculous cholecystitis, especially in immunocompromised patients. Infection usually occurs by ingestion of food and water contaminated with spores, but can also result from direct contact with spores through broken skin, eye lesions, and sexual transmission, depending on the microsporidian species. Although there are reports of E. bieneusi found in humans and animals in Brazil, there are no published studies of environmental samples examined by molecular methods. OBJECTIVES The purpose of this study was to verify the presence of E. bieneusi in raw sewage and treated effluent from a combined system by molecular methods. METHODS Raw sewage and treated effluent samples collected from a combined system were analysed for the presence of E. bieneusi using the internal transcriber spacer (ITS) region of E. bieneusi by nested polymerase chain reaction. FINDINGS The analysis revealed E. bieneusi presence and a novel genotype (EbRB) in one raw sewage sample and one treated effluent. MAIN CONCLUSIONS The presence of E. bieneusi in final effluent indicates that the combined system may not remove microsporidian spores. This study is the first report of E. bieneusi in environmental samples in Brazil.

Association of growth and nutritional parameters with pulmonary function in cystic fibrosis: a literature review / Associação dos parâmetros de crescimento e nutricionais com função pulmonar na fibrose cística: revisão da literatura

Abstract Objective: To review the literature addressing the relationship of growth and nutritional parameters with pulmonary function in pediatric patients with cystic fibrosis. Data source: A collection of articles published in the last 15 years in English, Portuguese and Spanish was made by research in electronic databases - PubMed, Cochrane, Medline, Lilacs and Scielo - using the keywords cystic fibrosis, growth, nutrition, pulmonary function in varied combinations. Articles that addressed the long term association of growth and nutritional parameters, with an emphasis on growth, with pulmonary disease in cystic fibrosis, were included, and we excluded those that addressing only the relationship between nutritional parameters and cystic fibrosis and those in which the aim was to describe the disease. Data synthesis: Seven studies were included, with a total of 12,455 patients. Six studies reported relationship between growth parameters and lung function, including one study addressing the association of growth parameters, solely, with lung function, and all the seven studies reported relationship between nutritional parameters and lung function. Conclusions: The review suggests that the severity of the lung disease, determined by spirometry, is associated with body growth and nutritional status in cystic fibrosis. Thus, the intervention in these parameters can lead to the better prognosis and life expectancy for cystic fibrosis patients.

Resumo Objetivo: Revisar a literatura que aborda a relação entre os parâmetros de crescimento e nutricionais com a função pulmonar em pacientes pediátricos com fibrose cística. Fontes de dados: Dados foram coletados de artigos publicados nos últimos 15 anos em Inglês,Português e Espanhol através de pesquisa nas bases de dados eletrônicas - PubMed, Cochrane, Medline, Lilacs e Scielo - usando as palavras-chave: fibrose cística, crescimento, nutrição, função pulmonar utilizando combinações variadas. Os artigos que analisaram a associação de longo prazo entre parâmetros de crescimento e nutricionais, com ênfase em crescimento, com doença pulmonar em fibrose cística, foram incluídos, sendo excluídos aqueles que analisaram apenas a relação entre os parâmetros nutricionais e fibrose cística e aqueles em que o objetivo era descrever a doença. Síntese dos dados: Sete estudos foram incluídos, com um total de 12.455 pacientes. Seis relataram relação entre parâmetros de crescimento e função pulmonar, incluindo um estudo que analisou apenas a associação de parâmetros de crescimento com a função pulmonar, e todos os sete relataram associação entre parâmetros nutricionais e função pulmonar. Conclusões: A revisão sugere que a gravidade da doença pulmonar, determinada por espirometria, está associada com crescimento corporal e o estado nutricional em fibrose cística. Assim, a intervenção nesses parâmetros pode contribuir para um melhor prognóstico e expectativa de vida em pacientes com fibrose cística.

Pseudomonas aeruginosa infection in patients with cystic fibrosis: scientific evidence regarding clinical impact, diagnosis, and treatment / Infecção por Pseudomonas aeruginosa em pacientes com fibrose cística: evidências científicas sobre o impacto clínico, diagnóstico e tratamento

Evidence-based techniques have been increasingly used in the creation of clinical guidelines and the development of recommendations for medical practice. The use of levels of evidence allows the reader to identify the quality of scientific information that supports the recommendations made by experts. The objective of this review was to address current concepts related to the clinical impact, diagnosis, and treatment of Pseudomonas aeruginosa infections in patients with cystic fibrosis. For the preparation of this review, the authors defined a group of questions that would be answered in accordance with the principles of PICO–an acronym based on questions regarding the Patients of interest, Intervention being studied, Comparison of the intervention, and Outcome of interest. For each question, a structured review of the literature was performed using the Medline database in order to identify the studies with the methodological design most appropriate to answering the question. The questions were designed so that each of the authors could write a response. A first draft was prepared and discussed by the group. Recommendations were then made on the basis of the level of scientific evidence, in accordance with the classification system devised by the Oxford Centre for Evidence-Based Medicine, as well as the level of agreement among the members of the group. .

As técnicas de medicina baseada em evidências são cada vez mais utilizadas para a construção de diretrizes clínicas e recomendações para a prática médica. O uso de níveis de evidências permite que o leitor identifique a qualidade da informação científica que sustenta as recomendações feitas pelos especialistas. Esta revisão teve por objetivo abordar conceitos atuais sobre o impacto clínico, diagnóstico e tratamento das infecções por Pseudomonas aeruginosa em pacientes com fibrose cística. Para a elaboração desta revisão, o grupo de autores definiu as perguntas que seriam respondidas, seguindo os preceitos de PICO, acrônimo baseado em perguntas referentes aos Pacientes de interesse, Intervenção a ser estudada, Comparação da intervenção e Outcome (desfecho) de interesse. Para cada pergunta, uma revisão estruturada da literatura foi realizada nas bases de dados do Medline, buscando identificar os estudos com desenho metodológico mais adequado para responder à questão. As perguntas foram designadas para que cada um dos autores redigisse uma resposta, e um primeiro rascunho foi elaborado e discutido pelo grupo em uma reunião presencial. Após essa discussão, recomendações foram emitidas com base na força das evidências e na concordância entre os membros do grupo segundo o sistema de classificação do Oxford Centre for Evidence Based Medicine. .

National prevalence survey in Brazil to evaluate the quality of microbiology laboratories: the importance of defining priorities to allocate limited resources / Encuesta de prevalencia nacional para evaluar la calidad de los laboratorios de microbiología en el Brasil: importancia de la definición de prioridades para asignar recursos limitados

This report describes a survey of microbiology laboratories (n = 467) serving Brazilian hospitals with >10 intensive care beds and/or involved in the government health care adverse event reporting system. Coordinators were interviewed and laboratories classified as follows: Level 0 (no minimal functioning conditions-85.4% of laboratories); Level 1 (minimal functioning conditions but inadequate execution of basic routine-6.7%); Level 2 (minimal functioning conditions and adequate execution of basic routine but no adequate procedures for quality control-5.8%); Level 3 (minimal functioning conditions, adequate execution of basic routine, and adequate procedures for quality control, but no direct communication with the infection control department-0.9%); Level 4 (minimal functioning conditions, adequate execution of basic routine, adequate procedures for quality control, and direct communication with infection control, but no available advanced resources-none); and Level 5 (minimal functioning conditions, adequate execution of basic routine, adequate procedures for quality control, direct communication with infection control, and available advanced resources-0.9%). Twelve laboratories did not perform Ziehl-Neelsen staining; 271 did not have safety cabinets; and >30% without safety cabinets had automated systems. Low quality was associated with serving hospitals not participating in government adverse-event program; private hospitals; nonteaching hospitals; and those outside state capitals. Results may reflect what occurs in many other countries where defining priorities is important due to limited resources.

Este artículo describe una encuesta realizada en Brasil en laboratorios de microbiología (n = 467) que prestaban servicio a hospitales que contaban al menos con 10 camas de cuidados intensivos. Se entrevistó a los coordinadores y los laboratorios se clasificaron de la siguiente manera: nivel 0 (sin condiciones de funcionamiento mínimas: 85,4% de los laboratorios), nivel 1 (condiciones de funcionamiento mínimas pero ejecución inadecuada del trabajo habitual básico: 6,7%), nivel 2 (condiciones de funcionamiento mínimas y ejecución adecuada del trabajo habitual básico, pero sin procedimientos de control de calidad apropiados: 5,8%), nivel 3 (condiciones de funcionamiento mínimas, ejecución adecuada del trabajo habitual básico y procedimientos de control de calidad apropiados, pero sin comunicación directa con el departamento de control de infecciones: 0,9%), nivel 4 (condiciones de funcionamiento mínimas, ejecución adecuada del trabajo habitual básico, procedimientos de control de calidad apropiados y comunicación directa con el departamento de control de infecciones, pero sin recursos avanzados disponibles: ningún laboratorio) y nivel 5 (condiciones de funcionamiento mínimas, ejecución adecuada del trabajo habitual básico, procedimientos de control de calidad apropiados, comunicación directa con el departamento de control de infecciones y recursos avanzados disponibles: 0,9%). Doce laboratorios no realizaban la tinción de Ziehl-Neelsen, 271 no contaban con cámaras de seguridad biológica, y más de 30% de los laboratorios que carecían de cámaras de seguridad biológica tenían sistemas automatizados. La escasa calidad se asoció a la falta de participación en el programa gubernamental de notificación de acontecimientos adversos, a los hospitales privados, a los hospitales no docentes y a la ubicación de los hospitales fuera de las capitales de los estados. Los resultados pueden reflejar lo que ocurre en muchos otros países con recursos limitados, donde es importante definir las prioridades.

Taxa de infecção e sorotipos de Streptococcus agalactiae em amostras de recém-nascidos infectados na cidade de Campinas (SP), Brasil / Infection rate and Streptococcus agalactiae serotypes in samples of infected neonates in the city of Campinas (São Paulo), Brazil

OBJETIVO: Descrever os casos e o perfil microbiológico dos sorotipos de Streptococcus agalactiae provenientes de recém-nascidos em um Centro de Referência da Saúde da Mulher na cidade de Campinas, São Paulo, Brasil. MÉTODOS: Estudo transversal clínico-laboratorial realizado de janeiro de 2007 a dezembro de 2011. As cepas suspeitas, isoladas em amostras de sangue e líquor, foram identificadas a partir da hemólise em ágar sangue, coloração de Gram, provas de catalase, teste de CAMP, hidrólise do hipurato ou por automação microbiológica Vitek 2 BioMerieux®. A seguir, estas cepas foram tipadas por PCR utilizando sucessivamente primers específicos para espécie e para nove sorotipos de S. agalactiae. RESULTADOS: Foram isoladas sete amostras de sangue, uma de líquor e uma de secreção ocular provenientes de nove recém-nascidos com infecções causadas pelo S. agalactiae, sendo sete casos de infecção de início precoce e duas de início tardio. Apenas um destes casos foi positivo para amostras pareadas mãe-filho. Para um total de 13.749 partos no período, os 7 casos correspondem a 0,5 caso de infecção precoce por Streptococcus do Grupo B a cada 1 mil nascidos vivos (ou 0,6 casos por 1 mil, incluindo os 2 de infecção tardia), tendo ocorrido 1, 3, 2, nenhum e 3 casos (um precoce e dois tardios), respectivamente, nos anos de 2007 a 2011. Foi possível realizar o PCR para sete amostras, sendo duas de cada um dos sorotipos Ia e V e o sorotipo III em três amostras, uma delas em um recém-nascido e outras duas em amostra pareada mãe-filho. CONCLUSÕES: Embora com casuística limitada, os sorotipos encontrados coincidem com os mais prevalentes na literatura mundial, mas diferem dos estudos brasileiros, exceto para o sorotipo Ia.

PURPOSE: To describe the epidemiological cases and microbiological profile of Streptococcus agalactiae serotypes isolated from infected newborns of a Women's Health Reference Centre of Campinas, São Paulo, Brazil. METHODS: Cross-sectional laboratory survey conducted from January 2007 to December 2011. The newborns' strains, isolated from blood and cerebrospinal fluid samples, were screened by hemolysis on blood ágar plates, Gram stain, catalase test, CAMP test, hippurate hydrolysis or by microbiological automation: Vitek 2 BioMerieux®. They were typed by PCR, successively using specific primers for species and nine serotypes of S. agalactiae. RESULTS: Seven blood samples, one cerebrospinal fluid sample and an ocular sample, were isolated from nine newborns with infections caused by S. agalactiae, including seven cases of early onset and two of late onset. Only one of these cases was positive for paired mother-child samples. Considering that 13,749 deliveries were performed during the study period, the incidence was 0.5 cases of GBS infections of early onset per 1 thousand live births (or 0.6 per 1 thousand, including two cases of late onset) with 1, 3, 2, zero and 3 cases (one early and two late onset cases), respectively, for the years from 2007 to 2011. It was possible to apply PCR to seven of nine samples, two each of serotypes Ia and V and three of serotype III, one from a newborn and the other two from a paired mother-child sample. CONCLUSIONS: Although the sample was limited, the serotypes found are the most prevalent in the literature, but different from the other few Brazilian studies available, except for type Ia.

Successful prevention of the transmission of vancomycin-resistant enterococci in a Brazilian public teaching hospital / Sucesso no controle da transmissão hospitalar de Enterococos resistentes a vancomicina em um hospital universitário público brasileiro

INTRODUCTION: Vancomycin-resistant enterococci (VRE) can colonize or cause infections in high-risk patients and contaminate the environment. Our objective was to describe theepidemiological investigation of an outbreak of VRE, the interventions made, and their impact on its control. METHODS: We conducted a retrospective, descriptive, non-comparative study by reviewing the charts of patients with a VRE-positive culture in the University Hospital of Campinas State University, comprising 380 beds, 40 of which were in intensive care units (ICUs), who were admitted from February 2008-January 2009. Interventions were divided into educational activity, reviewing the workflow processes, engineering measures, and administrative procedures. RESULTS: There were 150 patients, 139 (92.7%) colonized and 11 (7.3%) infected. Seventy-three percent were cared for in non-ICUs (p = 0.028). Infection was more frequent in patients with a central-line (p = 0.043), mechanical ventilation (p = 0.013), urinary catheter (p = 0.049), or surgical drain (p = 0.049). Vancomycin, metronidazole, ciprofloxacin, and third-generation cephalosporin were previously used by 47 (31.3%), 31 (20.7%), 24 (16%), and 24 (16%) patients, respectively. Death was more frequent in infected (73%) than in colonized (17%) patients (p < 0.001). After the interventions, the attack rate fell from 1.49 to 0.33 (p < 0.001). CONCLUSIONS: Classical risk factors for VRE colonization or infection, e.g., being cared for in an ICU and previous use of vancomycin, were not found in this study. The conjunction of an educational program, strict adhesion to contact precautions, and reinforcement of environmental cleaning were able to prevent the dissemination of VRE.

INTRODUÇÃO: Enterococos resistentes a vancomicina (ERV) podem colonizar e causar infecção em pacientes de alto risco, bem como contaminar o ambiente. Nosso objetivo foi descrever a investigação epidemiológica de um surto de ERV, as intervenções realizadas e o impacto no controle do surto. MÉTODOS: Estudo retrospectivo, descritivo, por revisão de prontuários de pacientes com cultura positiva para ERV em um hospital geral, público, universitário, admitidos entre fevereiro de 2008 e janeiro de 2009. As intervenções foram divididas em ações educacionais, revisão de processos de trabalho, medidas administrativas e de engenharia. RESULTADOS: Foram avaliados 150 pacientes, 139 (92,7%) colonizados e 11 (7,3%) infectados por ERV. Setenta e três por cento estavam internados em unidades de cuidados não intensivos (p=0,028). Infecção por ERV foi mais frequente em pacientes usando cateter venoso central (p=0,043), ventilação mecânica (p=0,013), cateter urinário (p=0,049) ou drenos cirúrgicos (p=0,049). Vancomicina, metronidazol, ciprofloxacina ou cefalosporina de terceira geração foram utilizados previamente por 47 (31,3%), 31 (20,7%), 24 (16%) e 24 (16%) pacientes, respectivamente. Óbito foi mais frequente em pacientes infectados por ERV (73%) em relação aos colonizados (17%) (p<0,001). Após as intervenções, a taxa de ataque diminuiu de 1,49 para 0,33 (p<0,001). CONCLUSÕES: Fatores de risco clássicos para colonização ou infecção por ERV, como internação em unidade de terapia intensiva e uso prévio de vancomicina, não foram identificados neste estudo. Um conjunto de intervenções, tais como programa educacional, maior adesão às precauções de contato e reforço da limpeza ambiental apresentou impacto no controle da disseminação hospitalar do ERV.

Pseudomonas aeruginosa multirresistente: um problema endêmico no Brasil / Multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa: an endemic problem in Brazil

Relatos mundiais têm documentado a problemática da endemicidade de isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa multirresistente (MDR) aliada a elevados índices de morbidade/mortalidade. No Brasil, surtos de infecção ocasionados por P. aeruginosa têm sido relacionados com uma disseminação clonal da espécie. Atualmente, as opções terapêuticas para o tratamento das infecções causadas por esse microrganismo são limitadas, muitas vezes restringindo-se ao uso de carbapenêmicos (p. ex., imipenem [IPM]). Assim, a resistência ao IPM é uma questão de saúde pública, uma vez que esse antibiótico é empregado como último recurso no tratamento de infecções de origem hospitalar, causadas por bactérias Gram-negativas multirresistentes. No Brasil, os principais mecanismos relacionados com fenótipos multirresistentes de P. aeruginosa são produção de metalobetalactamase (MBL) do tipo SPM-1, presença de metilase 16S rRNA RmtD, perda de porina OprD e superexpressão de bombas de efluxo, o que pode explicar os altos índices de resistência a carbapenêmicos e aminoglicosídeos. A emergência de cepas com essas características é preocupante, tendo em vista a escassez de terapias efetivas no tratamento de infecções por esse patógeno. Finalmente, com base em relatos nacionais, publicados por diferentes grupos de pesquisa, podemos deduzir que a convergência de múltiplos mecanismos de resistência em P. aeruginosa tem sido um evento favorável para a seleção de diferentes clones endêmicos multirresistentes disseminados no Brasil.

Global reports have documented the endemicity of multidrug-resistant (MDR) Pseudomonas aeruginosa associated with high levels of morbidity/mortality. In Brazil, outbreaks of MDR P. aeruginosa have been related to clonal dissemination. Currently, therapeutic options for the treatment of these infections are restricted to carbapenemic antibiotics (i.e., imipenem [IPM]). Thus, carbapenem resistance is a public health issue, since carbapenems are considered the last resort to nosocomial infections caused by MDR Gram-negative bacteria. In Brazil, the main mechanisms associated with MDR P. aeruginosa phenotypes are metallo-betalactamase (MBL) production (SPM-1 enzyme), presence of 16S rRNA methylase RmtD, loss of OprD porin, and overexpression of efflux pumps, which may explain the high level of carbapenem and aminoglycoside resistance. Accordingly, the emergence and dissemination of MDR strains is worrisome. Finally, based on national reports published by different groups of investigators, it is deduced that the convergence of multiple mechanisms of P. aeruginosa resistance has played a major role in the selection of endemic MDR clones widespread in Brazil.

Susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to first-line antimycobacterial agents in a Brazilian hospital: assessing the utility of the tetrazolium (MTT) microplate assay

We conducted a cross-sectional, hospital-based study between January 2006-March 2008 to estimate the resistance of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs in patients with tuberculosis at a Brazilian hospital. We evaluated the performance of the [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide] (MTT) microplate assay compared with the Bactec-MGIT 960™ system for mycobacteria testing. The prevalence of resistance in M. tuberculosis was 6.7 percent. Multidrug-resistance [resistance to rifampicin (RMP) and isoniazid (INH)], INH-resistance and streptomycin (SM)-resistance accounted for 1 percent, 3.8 percent and 3.8 percent of all resistance, respectively, and all isolates were susceptible to ethambutol (EM). The resistance was primary in four cases and acquired in three cases and previous treatment was associated with resistance (p = 0.0129). Among the 119 M. tuberculosis isolates, complete concordance of the results for INH and EM was observed between the MTT microplate and Bactec-MGIT 960TM methods. The observed agreement for RMP was 99 percent (sensitivity: 90 percent) and 95.8 percent for SM (sensitivity 90.9 percent), lower than those for other drugs. The MTT colourimetric method is an accurate, simple and low-cost alternative in settings with limited resources.

Carga microbiana de trocartes reprocessáveis após laparoscopias ginecológicas / Microbial load of reprocessable trocars after gynecological videolaparoscopy

OBJETIVO: identificar a carga microbiana presente em trocartes reprocessáveis usados nas laparoscopias ginecológicas. MÉTODOS: estudo exploratório descritivo. Um total de 57 trocartes, sendo 30 com 10 mm de diâmetro e 27 com 5 mm, foram recolhidos na sala de operação, imediatamente após o ato cirúrgico, e colocados em recipiente esterilizado onde foram adicionados 250 mL de água destilada estéril. Foi feita agitação dos trocartes para desprendimento de partículas e obtenção do lavado a ser analisado. Realizou-se filtração por meio de membrana de celulose 0,22 µm, colocadas, com pinça esterilizada, em placas ágar sangue. Após incubação, foi feita a análise microbiológica para contagem de unidades formadoras de colônias e posterior identificação do micro-organismo, usando-se técnicas laboratoriais padronizadas. RESULTADOS: a carga microbiana foi recuperada em 47,4 por cento dos trocartes analisados. Destes, 45,6 por cento apresentou crescimento de 1 a 100 unidades formadoras de colônias. Foram identificados 14 tipos de micro-organismos, dentre os quais, Staphylococcus coagulase negativo (28 por cento) e Bacillus sp (21 por cento) foram isolados com maior frequência. Identificou-se também Aeromonas hydrophila, Alcaligenes sp, Candida parapsilosis e enterobactérias. CONCLUSÕES: o estudo demonstrou que o desafio microbiano enfrentado pelos operadores responsáveis pela limpeza e esterilização dos trocartes é baixo quando comparado com o desafio imposto pelos indicadores biológicos; no entanto, não se pode inferir que os riscos de complicações infecciosas sejam mínimos para pacientes.

PURPOSE: to identify the microbial charge present in reusable trocars used in gynecological laparoscopies. METHODS: a descriptive exploratory study. An amount of 57 trocars, 30 with 10 mm of diameter and 27 with 5 mm, have been collected from the surgical unit, immediately after the surgery and placed in a sterilized recipient, in which 250 mL of sterile distilled water was added. Then, the trocars were agitated for the drainage of particles and to obtain a wash-out fluid to be analyzed. After being filtered through 0.22 µm cellulose membrane, the residue was placed on blood agar plates with a sterilized forceps. Following incubation, microbiological analysis has been done to count the number of colonies and further identify the microorganisms, using standard laboratorial techniques. RESULTS: microbial charge was recovered from 47.4 percent of the trocars analyzed. Among those, 45.6 percent presented 1 to 100 growing colonies. Fourteen types of microorganisms have been identified, among which the more frequently isolated were coagulase-negative Staphylococcus (28 percent) and Bacillus sp (21 percent), Aeromonas hydrophila, Alcaligenes sp, Candida parapsilosis, and enterobacteries were also identified. CONCLUSIONS: the study has demonstrated that the microbial challenge faced by the technician responsible for the cleaning and sterilization of trocars is low, as compared to the challenge imposed by biological markers. Nevertheless, it may be not inferred that the risks for infectious complications for patients are minimal.

Characterization of the Brazilian endemic clone of methicillin-resistant staphylococcus aureus (MRSA) from hospitals throughout Brazil

The objective of this study was to characterize patterns of the Brazilian endemic clone of methicillin-resistant staphylococcus aureus (MRSA) from hospitals throughout Brazil. We studied 83 MRSA strains isolated from patients hospitalized in 27 public and private hospitals in 19 cities located in 14 brazilian states from september, 1995, to june, 1997. The MRSA strains were typed using antibiograms, bacteriophage typing and pulsed field gel electrophoresis (PFGE). The analysis of genomic DNA by PFGE showed that 65 isolates presented the same SFGE pattern. This pattern was presente in all of the hospitals studied indicating the presence of an endemic MRSA clone widely disseminated throughout brazilian hospitals (BEC). All isolates belonging to the BEC proved to be resistant to ciprofloxacin, erythromycin, lincomycin, trimethoprim-sulphamethoxazole, and tetracycline. Variable susceptibility to these drugs was found only in isolates belonging to clones other than the BEC. The results show that, among MRSA, the BEC is common in Brazil. The best method for mapping changes in the frequency of this clone among MRSA is pulsed field gel electrophoresis. Use of molecular mapping is an important tool for monitoring the spread of potentially dangerous microbes.

Atividade in vitro de gatifloxacina e outros antimicrtobianos frente a 1885 isolados clínicos em 11 centros no Brasil / In vitro evaluation of gatifloxacin and other antimicrobials against 1885 clinical isolates from eleven Brazilian Centers

O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade in vitro de uma nova fluoroquinolona, a gatifloxacina em comparaçäo com ciprofloxacina, levofloxacina, trovafloxacina, azitromicina, claritromicina, cefuroxima, amoxicilina-ácido clavulânico, amicacina e gentamicina, frente a isolados bacterianos de diferentes processos patológicos de pacientes em 11 centros diferentes de sete Estados do Brasil. As amostras foram testadas pelo método de Etest e a interpretaçäo dod resultados de acordo ao descrito pelo National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). As porcentagens de bactérias sensíveis à gatifloxacina foram: Haemophilus influenzae (107 cepas) 98,9 porcento; Moraxella catarrhalis (101 cepas) 100 porcento Streptococcus pneumoniae (126 cepas) 100 porcento; Streptococcus pyogenes (135 cepas) 100 porcento; Enterobacteriaceae (797 cepas) 81,2 porcento e Pseudomonas aeruginosa(216 cepas) 57,4 porcento. Gatifloxacina foi de duas a seis vezes mais ativa frente a Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes que levofloxacina e ciprofloxacina. Frente a Moraxella catarrhalis a atividade das quatro quinolonas estudadas foi similar. Frente a Enterobacteriacea a ciprofloxacina foi de uma a duas vezes mais ativa que gatifloxacina e levofloxacina. O amplo espectro de atividade da gatifloxacina indica que esta droga pode ser especialmente útil para o tratamento das infecçöes bacterianas comuns, como säo as respiratórias, urinárias e de parte moles.(au)

Estudo do perfil de resistência de 626 cepas de Staphylococcus aureus isolados de 25 hospitais brasileiros entre setembro de 1995 e junho de 1997 / Study of the resistance profile of 626 strains of staphylococcus aureus isolated in 25 Brazilian Hospitals from September/95 do June/97

O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de resistência de cepas de Staphylococcus aureus isoladas de várias regiöes do Brasil. Foram estudadas 626 cepas provenientes de 25 hospitais, como mais de 250 leitos, localizados em 14 estados. O antibiograma foi realizado do método de difusäo de discos (kirby-Bauer), utilizando 12 antibióticos. As cepas oxacilino-resistentes (Orsa) foram também testadas empregando a técnica de microdiluiçäo em caldo por meio do Sistema MicroScan-Baxter Inc. Das 626 cepas enviadas, 388 foram oxacilino-sensíveis (Ossa) e 238 Orsa. Dentre as cepas Ossa, os percentuais de resistência encontrados foram: penicilina (87,1 por cento), eritromicina (16,2), tetraciclina (15,7), lincomicina (7,5), cloranfenicol (3,1), rifampicina (1,6), sulfametoxazol (SUT) (0,8 por cento), netilmicina (0,5) e ciprofloxacina (0,03). Dentre as cepas Orsa, 99,6 foram resistentes à eritromicina, lincomicina e tetraciclina, 96,2 ao SUT, 2 por cento à ciprofloxacina, 73,1 ao cloranfenicol, 71 à netilmicina e 22,7 à rifampicina. Todas as amostras foram sensíveis à vancomicina. As cepas de S. aureus isoladas no Brasil apresentam níveis mais elevados de resistência que os relatos em outros países. Ciprofloxacina, eritromicina, tetraciclina, lincomicina e SUT foram os antibióticos que apresentaram os mais elevados níveis de resistência. As elevadas taxas de resistência poderiam ser conseqüencia do uso em larga escala de antibióticos, que teria contribuído para a seleçäo de clones mutirresistentes