Perfil imunoistoquímico das proteínas p53 e Ki67 em pacientes com retocolite ulcerativa inespecífica / Imunohistochemical profile of p53 and Ki67 from patients with unspecific ulcerative colitis

Objetivos: O presente estudo avaliou, através da imunohistoquímica e estudo histopatológico, as principais alterações na mucosa intestinal de pacientes acometidos pela retocolite ulcerativa crônica idiopática (RCUI) apenas tratada clinicamente (n=30) ou subseqüentemente tratada com Proctocolectomia total e construção de bolsa ileal (n=30). Métodos: Desta forma, foram selecionados fragmentos de tecido intestinal submetidos à imunomarcação para as proteínas p53 e Ki67 e coloração por hematoxilina-eosina para análise histopatológica comparativa. Resultados: Os resultados obtidos indicam importantes diferenças no perfil inflamatório e presença de áreas de erosão/desgate da mucosa colônica de ambos os grupos estudados. Quanto a imunoexpressão, observou-se uma maior reatividade de padrão nuclear principalmente nos tecidos inflamados dos pacientes com RCUI tratados clinicamente. Conclusões: Estes resultados sugerem que, de acordo com o perfil histopatológico e imunohistoquímico, a mucosa colônica de pacientes submetidos ao tratamento cirúrgico apresenta menos alterações que os pacientes tratados clinicamente. Assim, os dados sugerem que estes métodos podem auxiliar no diagnóstico e monitoramento de pacientes sob diferentes rotinas terapêuticas.

Objectives: The present study evaluated, trough immunohistochemistry and histopatologic analysis, the main alterations in intestinal mucous from patients with unspecific ulcerative colitis (IUC) clinically (n=30) or surgically treated (n=30) with ileal J-pouch and permanent ileostomy. Methods: Thus, tissue slices from intestinal mucous were submitted to imunostains for p53 and Ki67 proteins, and Haematoxilin-eosin staining for comparative histopathological evaluation. Results: The results indicated important differences in inflammatory profile and erosion/necrosis sites on the both investigated groups. Related to imunoexpression was observed a higher reactivity with nuclear pattern, mainly in inflammatory tissues from IUC patients clinically treated. Conclusions: Those results showed that, according to histopathological and imunohistochemical parameters, the colonic mucous from IUC patients submitted to surgical treatment exhibited less alterations than IUC patients clinically treated. The data suggest that those methods could be helpful to diagnosis and assist the accompaniment of patients under different therapeutic routines.

Avaliação digital comparativa da expressão tecidual da proteína cerbB-2 em mulheres portadoras de doenças tumorais da mama / Comparative digital evaluation of tissue expression of the cerbB-2 protein in women with breast tumoral diseases

A imuno-histoquímica (IHC) para expressão da proteína Her-2/neu tornou-se um dos mais atrativos testes de rotina, devido a custo, conveniência e relevância biológica. Contudo, têm sido relatados problemas quanto à variabilidade das marcações em IHC, além da subjetividade na interpretação dos métodos de IHC convencionais. Assim, o presente estudo objetiva quantificar morfometricamente a imunomarcação da proteína cerbB-2 expressa em tumores de mama. Fragmentos de tecido mamário normal (n = 10) e com doença tumoral (carcinoma ductal invasivo [CDI], n = 51 e fibroadenoma, [FA], n = 21) foram fixados em formalina, submetidos à rotina histológica para inclusão em parafina. Cortes histológicos (4 µm), corados em hematoxilina e eosina foram examinados para confirmar o diagnóstico. Os cortes foram incubados em solução de anticorpo anti-cerbB-2 por 60 minutos em temperatura ambiente. A marcação foi visualizada após reação da peroxidase do cromógeno diaminobenzidina associado ao peróxido de hidrogênio. A análise morfométrica foi realizada utilizando uma estação de análise digital de imagens por meio do software de análise Optimas®. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que a superexpressão do cerbB-2 em casos de CDI é um fenômeno condizente com o estágio de proliferação das células neoplásicas e, quando analisados os casos de FA, esse marcador não exibiu qualquer correlação ou padrão específico; ao contrário, apresentaram resultados semelhantes ao tecido mamário normal. Não houve diferenças significativas entre os diferentes score qualitativos (1+, 2+ e 3+) e a análise morfométrica digital (áreas médias marcadas). Esses achados demonstram a necessidade de estudos mais acurados a fim de resolver essa dificuldade de interpretação.

Immunohistochemistry for HER-2/neu protein expression has become the most attractive routine test due to its cost, convenience and biological relevance. However, problems as to IHC staining variability and subjectivity in the interpretation of IHC conventional methods have been reported. Thus, this study aims to quantify morphometrically cerbB-2 protein immunostaining expressed in breast tumors. Mammary fragments of normal breast tissue (n = 10) and with tumoral disease (invasive ductal carcinoma, IDC, n = 51 and fibroadenoma, FA, n = 21) were fixed in formalin, processed histologically and embedded in paraffin. Hematoxylin and eosin stained sections (4 mm) were examined to confirm the diagnosis. Afterwards, they were incubated with anti-cerbB-2 antibody solution for 60 minutes at room temperature. The staining was visualized after the peroxidase reaction with diaminobenzidine chromogen associated with hydrogen peroxide. Morphometric analysis was carried out using a digital image analysis workstation based on OPTIMAS® software. From these results it may be concluded that cerbB-2 over expression in IDC cases is a phenomenon closely related to the stage of neoplastic cell proliferation. When FA cases were analyzed , this marker did not show any correlation with the staining pattern. On the contrary, FA and normal mammary tissue analysis yielded similar results. There were no significant differences between the different qualitative scores (1+, 2+ and 3+) and digital morphometric analysis (marked mean areas). These findings suggest the necessity for more accurate studies in order to clarify this interpretation issue.

Galectina-3 em tumores de próstata: imuno-histoquímica e análise digital de imagens / Galectin-3 in prostatic tumours: immunohistochemistry and digital image analysis

A imuno-histoquímica é uma técnica de grande ajuda no diagnóstico de doenças da próstata, incluindo os tumores. De igual importância, a análise digital de imagens vem sendo cada vez mais utilizada em estudos de alterações na próstata. O presente estudo teve como objetivo quantificar morfometricamente a expressão da galectina-3 através da imuno-histoquímica em tecidos de próstata normal (PN) e hiperplasia benigna da próstata (HPB) e adenocarcinoma prostático (AP). Fragmentos cirúrgicos de tecido prostático com AP (n = 10), HPB (n = 12) e PN (n = 10) foram fixados em formalina, submetidos à rotina histológica e embebidos em parafina. Foram feitos cortes histológicos (4µm) montados em lâminas e corados com hematoxilina e eosina (HE) para confirmar o diagnóstico. As amostras teciduais selecionadas foram incubadas com anticorpo monoclonal antigalectina-3 por uma hora em temperatura ambiente (37ºC) e então incubadas com um anticorpo secundário. A revelação foi realizada após incubação com diaminobenzidina (DAB) e peróxido de hidrogênio. A análise morfométrica foi realizada mediante uma estação de análise digital de imagens, que consiste num microscópio óptico acoplado a uma câmera digital ligada a um computador equipado com o software de análise OPTIMAS®. Nas células de adenocarcinoma foi observada diminuição significativa na marcação (p < 0,001) da imuno-histoquímica para galectina-3. A partir da análise digital de imagens das áreas médias marcadas obtivemos os seguintes resultados: HPB (875,9 ± 52,1 µm²), AP (120,2 ± 23,3 µm²) e PN (238,4 ± 27,6 µm²). Os diferentes perfis de expressão da galectina-3 diferenciaram as células neoplásicas da próstata de células normais e demonstraram significativas alterações na expressão da galectina-3 nas lesões tumorais investigadas.

Immunohistochemistry helps pathologists in the diagnosis of prostatic diseases, mainly carcinomas. Equally important, digital image analysis is being increasingly used to study alterations in the prostate. The present work aims to morphometrically quantify the immunostain of galectin-3 expressed in normal prostate (NP), benign hyperplasia (BH) and prostatic adenocarcinoma (PA) in humans. Immunohistochemistry was developed using monoclonal anti-galectin-3 antibody. Surgical specimens from different patients with BH (n = 12), PA (n = 10) and NP (n = 10) were fixed in formalin, processed and embedded in paraffin. Hematoxylin and eosin staining was used to confirm the diagnosis. Tissue slices (4µm) were incubated with anti-galectin-3 antibody solution for one hour at room temperature and then incubated with a secondary anti-body conjugated to peroxidase (30 minutes). The stain pattern was visualized with diaminobenzidine (DAB) and hydrogen peroxide. Image analysis was carried out using a workstation consisting of a standard light microscope equipped with a digitalizing camera connected to a desktop personal computer. Image storage and retrieval was managed using the OPTIMAS® software system. For prostatic adenocarcinoma cells a significant decreased (p < 0.001) staining pattern for galectin-3 was observed. Computer image analysis detected stained areas of atypic prostatic cells: BH (875.9 ± 52.1µm²), PA (120.2 ± 23.3 µm²) and NP (238.4 ±27.6 µm²). The different patterns of galectin-3 expression distinguished the neoplasic cells from normal prostatic ones and significant alterations in the galectin-3 expression into the studied tumor lesions.