Segment­ specific expression of MMP/TIMP in the oviduct of llama (Lama glama) and gelatinolytic activity in the oviductal fluid / Expresión segmento específica de MMP/TIMP en el oviducto de llama (Lama glama) y actividad gelatinolítica en el fluido oviductal

Oviductal molecules have the potential to improve the reproductive biotechnologies. In camelids, knowledge and assessment of the oviductal environment are necessary to successfully develop species-specific reproductive technologies, especially because of the camelids reproductive particularities. Among the oviductal factors, the matrix metalloproteinases/tissue inhibitor of matrix metalloproteinases system (MMPs/TIMPs) should be investigated more thoroughly due to their participation in reproductive processes. Consequently, the current study assayed gene and protein expression of MMPs throughout the llama oviduct. MMPs zymogen and active forms in the oviductal fluid were also characterized. MMP2 and MMP9 transcripts were detected in ampulla, isthmus, utero-tubal junction and papilla, being MMP2 and MMP9 2.15 and 1.10 folds higher in papilla than in ampulla, respectively. In addition, differences in immunolocalization of MMP2 and MMP9 between the epithelial mucosa layers of the oviductal segments were observed. The presence of MMPs in the epithelium suggests their secretion into the oviductal lumen. Coincidently, bands of 62 and 94 kDa, corresponding to MMP2 and MMP9 were detected by zymography in the oviductal fluid. Treatment with an exogenous activator (APMA) suggests that they are present as proMMPs. TIMP2 and TIMP1, the specific inhibitors of MMP2 and MMP9, respectively, were expressed in each oviductal segment, indicating a well-regulated control of MMP proteolytic activity in the oviduct. These findings prove that the llama oviduct produces and secretes MMPs into the oviductal lumen, suggesting that these enzymes may have an unknown role in the preparation of the oviductal environment for gametes, fertilization and early embryo development in camelids.

Las moléculas oviductales tienen el potencial para mejorar las biotecnologías reproductivas. En los camélidos, debido a sus peculiares características reproductivas, el conocimiento del ambiente oviductal constituye una herramienta útil para el desarrollo de tecnologías reproductivas específicas para estas especies. Entre los factores oviductales de interés se encuentran las metaloproteasas de matriz (MMPs) y sus inhibidores específicos (TIMPs), los cuales han sido involucrados en diferentes procesos reproductivos. Por estas razones, en este trabajo se caracterizó la expresión génica y proteica de MMP2 y MMP9 en el oviducto de llama. Además, se analizó la presencia de las formas activas e inactivas (zimógenos) de estas enzimas en el fluido oviductal. Se observó que todos los segmentos oviductales, ámpula, istmo, unión útero-tubal y papila, expresan MMP2 y MMP9, siendo los niveles de expresión de MMP2 y MMP9 más elevados en papila respecto a ámpula; 2,15 y 1,10 veces respectivamente. Asimismo, se observaron diferencias en la distribución de las MMPs a nivel de la mucosa entre los segmentos oviductales. Consecuentemente, bandas con actividad gelatinolítica de 62 y 94 kDa, se detectaron en el fluido oviductal, las cuales corresponderían a las formas inactivas de la MMP2 y la MMP9, respectivamente. Los inhibidores específicos de MMP2 y MMP9; TIMP2 y TIMP1, también se detectaron en los segmentos oviductales, indicando su probable participación en la regulación de la actividad proteolítica de las MMPs en el oviducto de llama. En conjunto, los datos de este trabajo demuestran que el oviducto de la llama produce y secreta MMPs al lumen oviductal; sugiriendo que estas enzimas pueden participar en la preparación del ambiente oviductal para la recepción de los gametos, la fecundación y el desarrollo embrionario temprano en camélidos.

Observaciones sobre la Morfología del Oviducto del Coipo (Myocastor coypus) / Observations on Oviduct Morphology of the Coypu (Myocastor coypus)

Se efectuaron los análisis anatómico e histoarquitectónico del oviducto del coipo (Myocastor coypus) en la madurez sexual. Se trabajó con 34 oviductos que fueron segmentados en infundíbulo, ampolla, unión ámpulo-ístmica, istmo cefálico, medio y caudal y procesados con técnicas histológicas de rutina. Los oviductos se observaron como órganos tubulares y tortuosos, con amplia superficie infundibular, marcada flexura en la unión con los cuernos uterinos y el desarrollo de un colículo en la unión útero-tubárica. La mucosa presentó plegamientos que disminuyeron en número, grado de ramificación y altura desde la ampolla hasta los comienzos de la unión útero-tubárica. El epitelio de revestimiento estuvo compuesto por células ciliadas y células secretoras. En el infundíbulo y el istmo fue cilíndrico simple, en tanto que en la ampolla fue seudoestratificado cilíndrico. En las regiones caudales del istmo se observaron criptas revestidas por un epitelio cilíndrico de aspecto secretor. La lámina propia fue de tejido conectivo laxo y muy vascularizado. La túnica muscular incrementó su grosor y complejidad desde el infundíbulo a la unión útero-tubárica.

Anatomical and histoachitectonic analyses of coypu (Myocastor coypus) oviduct were performed at sexual maturity. Thirty-four oviducts were segmented into: infundibulum, ampulla, cephalic istmus, middle and caudal. Routine histological techniques were used. Oviducts were observed as tubular and tortuous organs with a wide infundibular surface, a pronounce flexure at junction of the uterine horns and with a colliculus at the utero-tubaric junction. The oviductal wall was composed of the mucosal, muscular and serosal tunics. The mucosal tunic showed foldings that diminished in number, ramification and height from the ampulla to the beginning of the utero-tubaric junction. The lining epithelium was composed of ciliated cells as well as secretory cells. In the infundibulum and isthmus, it was simple and cylindrical, while in the ampoule it was cylindrical pseudo-stratified. In the caudal regions of the isthmus, crypts covered by a cylindrical epithelium with secretroy aspect were observed. The lamina propria was composed of highly vascularized lax connective tissue. The muscular tunic increased its thickness and complexity from the infundibulum to the utero-tubaric junction.

Histological seasonal changes in ovaries of Spotted tinamous (Nothura maculosa Tinamidae, Temminck, 1815) related to gonadotrope population / Cambios histológicos estacionales en ovarios de perdiz común (Nothura maculosa Tinamidae, Temminck, 1815)) y su relación con la población de gonadotropas

Nothura maculosa is a South American Tinamidae with a marked seasonal reproductive pattern. This work describes ovarian seasonal changes in this species related to gonadotrope (GTHs) population. Ovary and pituitary samples were collected monthly from adult birds during four annual periods. They were fixed in Bouin's solution and processed for light microscopy. The data of post-fixation gonadal weight were analysed using STATISTIX 4.0. Histological sections of the ovaries were stained with H/E, PAS and Goldner-Masson trichrome. Single and double immunostaining were applied on pituitary sections with anti-chicken-FSH and anti-chicken-LH antibodies. The samples were analysed in quarterly periods of the year, Pl: March-May (resting stage); P2: June-August (developing stage); P3: September-November (reproductive stage); P4: December-February (involutive stage). Ovary weight (ow) significantly varied among periods (p<0.001). During Pl, only primordial and previtellogenic follicles were observed, ow 0.09±0.01 g (n=25); during P2, developing follicles with signs of vitellogenesis were detected, ow 0.13+0.01 g (n=14); during P3, maximum follicular development was found, ow 0.9 +/- 0.15 g (n=39); P4 exhibited great variability in follicular stages, ow 0.18+0.18 g (n=19). Involutive atresia was observed in all the periods, while bursting atresia and post-ovulatory follicles were only characterized at P3 and P4. The GTHs containing few LH and FSH immunoreactive (ir) granules were predominant during P1-P2. The GTHs with LH ir granules were abundant in intermediate zone and caudal lobe in P3 and P4 while few cells contained both types of granules. The number of FSH cells was increased during P3 and P4. The histological ovarían changes were narrowly correlated with the variations in the gonadotrope population.

Nothura maculosa es un tinámido sudamericano que presenta marcada estacionalidad reproductiva. Este trabajo describe los cambios estacionales del ovario de esta especie, en relación con la población de gonadotropas (GTHs). Muestras de ovarios y pituitarias de ejemplares adultos fueron colectadas mensualmente durante cuatro años; se fijaron en solución de Bouin y procesadas para M.O. Los datos del peso gonadal posfijación fueron analizados usando STATISTIX 4.0. Los cortes de ovarios fueron coloreados con H/E, P.A.S. y Tricrómico de Goldner-Masson. En cortes de adenohipófisis se aplicó inmunocitoquímica simple y doble (sistema ABC, Vector Lab.), empleando anticuerpos anti-pollo FSH y anti-pollo LH. Las muestras se analizaron en períodos trimestrales de cada año (P): Pl: Marzo-Abril-Mayo (etapa de reposo), P2: Junio-Julio-Agosto (etapa de desarrollo), P3: Septiembre-Octubre-Noviembre (etapa reproductiva), P4: Diciembre-Enero-Febrero (etapa involutiva). El peso de los ovarios (PO) varió significativamente entre los periodos (p< 0.001). Durante Pl, sólo se observaron folículos primordiales y pre-vitelogénicos, PO 0.09 +/- 0.01 g (n=25); durante P2, se detectaron folículos en desarrollo con signos de vitelogénesis, PO 0.13+0.01 g (n=14); durante P3, se encontró máximo desarrollo folicular, PO 0.90+0.15 g (n=39); P4 exhibió gran variabilidad folicular, PO 0.18+0.18 g (n=19). La atresia involutiva se observó en todos los períodos, mientras que la atresia explosiva y los folículos postovulatorios caracterizaron a P3 y P4. Las GTHs conteniendo escasos granulos LH y FSH inmunoreactivos (ir) predominaron durante Pl y P2. Las GTHs con granulos LH¡> eran abundantes en la zona intermedia y en el lóbulo caudal en P3 y P4 mientras que escasas células contenían ambos tipos de granulos. El número de células FSH¡> se incrementó durante P3 y P4. Los cambios histológicos del ovario se correlacionaron estrechamente con las variaciones en la población de gonadotropas.