Produção in vitro de embriões bovinos em meio SOF e com SVE ou BSA / Bovine in vitro embryo production in modified SOF medium with ECS or BSA

O objetivo deste trabalho foi determinar as taxas de desenvolvimento de embriões bovinos produzidos in vitro em meio SOF suplementado com soro de vaca em estro (SVE) ou albumina sérica bovina (BSA). Os oócitos foram obtidos a partir de ovários de vacas de abatedouro e maturados in vitro (MIV) durante 24 horas em TCM199 acrescidos de 10% de SVE, estradiol (1 mg/mL), FSH (0,5 mg/mL) e hCG (0,03 UI/mL). A fecundação in vitro (FIV) foi realizada durante 18 a 20 horas em meio Fert-TALP acrescido de heparina (5,56 mg/mL), hipotaurina (1,1 mg/mL) e epinefrina (0,18 mg/mL). Tanto a MIV quanto a FIV foram realizadas em estufa de cultivo a 39ºC, 100% de umidade relativa e 5% de CO2 em ar. Para o cultivo embrionário, os zigotos foram cultivados em SOF modificado, suplementado com 10% de SVE ou 0,4% de BSA, em atmosfera com 5% de CO2, 7% de O2 e 88% de N2. Os embriões foram mantidos durante 9 dias em estufa a 39ºC com 100% de umidade relativa do ar. O emprego de BSA ou SVE como fonte protéica não promoveram diferença significativa sobre as taxas de clivagem (59,0% ou 55,6%, respectivamente) e de formação de blastocisto (40,3% ou 49,0% respectivamente). Entretanto, o SVE proporcionou maior velocidade na formação dos blastocistos (p<0,01).

Análise da contaminaçäo por Salmonella em ovos do tipo colonial através da reaçäo em cadeia da polimerase / Analysis of Salmonella in free-range eggs through polymerase chain reaction

A identificaçäo de poedeiras comerciais infectadas por salmonelas tem sido um dos pontos fortes da profilaxia e conseqüente reduçäo de surtos de salmonelose em humanos associados ao consumo de ovos, sendo que a análise dos ovos pode ser mais um dos pontos de detecçäo da infecçäo, que, muitas vezes, cursa sem sinais clínicos. A Reaçäo em Cadeia da Polimerase (PCR) parece ser uma estratégia útil para detecçäo de Salmonella, pois vários autores têm utilizado a PCR para verificar a presença da bactéria em carnes, fezes, tecidos, sangue, leite e ovos, com diferentes metodologias de manipulaçäo das amostras. Foram analisados 360 ovos, procedentes de dez propriedades rurais, produtoras de ovos tipo colonial, no distrito de Camobi, em Santa Maria - RS. Os ovos foram divididos em grupos de seis, totalizando sessenta amostras. O exame bacteriológico foi realizado conforme metodologia preconizada pelas normas técnicas e a metodologia de extraçäo de DNA pelo fenol-clorofórmio. A PCR foi realizada para a amplificaçäo de um fragmento de DNA de 284 pb. A análise dos resultados näo demonstrou diferença significativa entre a PCR, sendo que essa última detectou duas amostras a mais, devido a sua alta sensibilidade e especificidade, especialmente quando é sabido que os ovos apresentam uma populaçäo microbiana mista que, muitas vezes, impede o isolamento adequado das salmonelas no bacteriológico pela competiçäo com a flora bacteriana normalmente presente.

Avaliação da reação em cadeia da polimerase na análise de ovos, saladas de batata e maioneses, envolvidos em surtos de toxinfecção alimentar / Evaluation of the chain reaction of the polimerase in eggs, mayonnaise and potato salads involved in food toxinfection booms

O consumo médio de ovos no Brasil foi de apenas 94 unidades/habitante/ ano, em 2000, enquanto em outros países esse valor é três vezes maior. Acredita-se que o pouco consumo de ovos em nosso país esteja associado a restrições relacionadas a fatores culturais, estéticos e de saúde como colesterol elevado e presença de contaminantes. A incidência de surtos de intoxicações alimentares por salmonelas em diversos países chamou a atenção para fontes comuns de infecção. As investigações epidemiológicas identificaram o consumo de ovos ou alimentos com eles, como responsáveis pela maioria dos surtos. A metodologia oficial de diagnóstico das salmonelas nos alimentos, envolve cinco fases que demandam muita manipulação, com cerca de 96 horas para que se conclua pela bactéria com ainda a necessidade da tipificação sorológica. A reação em cadeia pela polimerase (PCR) é rápida e eficaz, dependendo apenas de métodos de extração do material genético e para a retirada de substâncias que possam interferir na técnica. Avaliou-se a técnica da PCR em ovos, maionese e saladas de batatas envolvidas em surtos de toxinfecção alimentar em comparação com a metodologia bacteriológica convencional. Os resultados obtidos demonstraram a recuperação de 12/30 pelo bacteriológico, 14/30 pela PCR com extração pelo Tratamento Térmico e 17/30 com a extração pelo Fenol-Clorofórmio. O aumento da recuperação, aliado ao menor tempo de execução, variando de 30 horas até 54 horas, conforme a metodologia de pré-enriquecimento da amostra e a metodologia de extração utilizadas, são pontos favoráveis à indicação do uso da PCR no diagnóstico de rotina das salmonelas presentes em ovos e derivados.

A Contribuiçäo do gene halotano sobre as características de qualidade da carne suína / The contribution of the halothane gene to the quality characteristics of pork

O objetivo deste trabalho foi o de avaliar o efeito do gene halotano sobre as características de qualidade da carne suína. Foram utilizadas 151 carcaças de suínos híbridos comerciais, sendo 93 carcaças com genótipo halotano normal (Hal(NN)), 51 heterozigotos (Hal(Nn)) e 7 recessivas (Hal(nn)). As medidas efetuadas foram: espessura de toucinho e de músculo, percentagem de carne, peso da carcaça, pH aos 45 minutos e 24 horas após o abate, no músculo Longissimus dorsi, cor, perda de líquido por gotejamento e identificaçäo do genótipo halotano em amostras de gordura através de PCR-RFLP. Suínos Hal(Nn) apresentaram maior espessura de músculo e percentagem de carne do que os suínos Hal(NN). Houve diferença significativa entre suínos Hal(Nn) e Hal(NN) quanto ao pH inicial e à cor. Em relaçäo à espessura de toucinho, pH final e perda de líquido, näo houve diferença significativa entre os genótipos. A qualidade da carne de suínos Hal(Nn) foi inferior à de suínos Hal(NN), em termos de pH e cor. A qualidade da carcaça de suínos Hal(Nn) näo se mostrou melhor do que a dos suínos Hal(nn), em relaçäo à espessura de toucinho e músculo e à percentagem de carne. A relaçäo entre quantidade e qualidade da carne parece depender da presença do gene halotano.

Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of Salmonella in artificially inoculated chicken meat

The aim of this study was to develop a polymerase chain reaction (PCR) protocol for the detection of Salmonella in artificially contaminated chicken meat. Tests were performed with different dilutions of Salmonella Typhimurium or Salmonella Enteritidis cells (10-7, 10-8 or 10-9 CFU/mL) inoculated in chicken meat samples, in order to establish the limits of detection, incubation times (0, 6, 8 and 24 hours of pre-enrichment in PBW 1 percent) and three DNA extraction protocols (phenol-chloroform, thermal treatment and thermal treatment and Sephaglass). The assay was able to detect until 10-9 CFU/mL of initial dilution of Salmonella cells inoculated in chicken meat, which allows detection of Salmonella within 48 hours, including 24 hours of pre-enrichment and using the phenol-chloroform DNA extraction protocol. As the results are obtained in a shorter time period than that of microbiological culture, this procedure will be useful in the methodology for detection of Salmonella in chicken

Métodos de extraçäo de DNA para a detecçäo de Salmonella em ovos de galinhas, com e sem casca, através da reaçäo em cadeia pela polimerase / DNA extraction methods for Salmonella detection in chicken eggs, inshel and outshel, by polimerase chain reaction

O diagnóstico microbiológico de Salmonella sp em amostras de alimentos é demorado, com cinco diferentes etapas, levando cerca de 120 horas até o resultado final. A utilizaçäo da técnica da Reaçäo em Cadeia pela Polimerase (PCR) pode diminuir esse período, porém sofre influência de substâncias presentes na amostra que afetam a reaçäo. O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos de extraçäo de DNA, a extraçäo por tratamento térmico e a pelo fenol-clorofórmio, em amostras de 100 ovos de galinhas domésticas artificialmente contaminados com uma cepa de Salmonella enterica sorovar typhimurium em fase estacionária. O material obtido com as extraçöes foi submetido à PCR, utilizando-se um par de iniciadores que amplificam um fragmento de 284pb do gene InvA de Salmonella sp. Comparando os métodos de extraçäo, observou-se uma diferença na capacidade de detecçäo de 12 por cento a favor do método do fenol-clorofórnio, quando a extraçäo foi realizada a partir do ovo com casca. No momento em que a mesma metodologia foi usada apenas com a parte interna dos ovos, essa diferença subiu para 26 por cento o que foi significativo (P<0,003), demonstrando que a metologia de extraçäo foi determinante para melhorar a sensibilidade da técnica. No entanto, ao comparar-se a percentagem de positivos independente da técnica de extraçäo do DNA, observou-se diferença significativa (P<0,047) a favor das amostras de ovos sem casca. Isso sugere que para a detecçäo de Salmonella por PCR deve-se utilizar apenas a parte interna dos ovos, pois a casca pode determinar interferência na técnica.

Detecçäo de Salmonella sp em ovos de galinhas através da reaçäo em cadeia pela polimerase-PCR / Detection of Salmonella in chicken eggs through the techinique of PCR

Estimativas brasileiras citam 34.000 pessoas anualmente envolvidas em surtos de toxinfecçöes alimentares causadas por Salmonella sp. Com freqüência säo indicados como fonte de infecçäo ovos ou produtos derivados como cremes, maionese e clara batida fresca. Tendo em vista dificuldades de confirmaçäo da presença destes microrganismos nestes alimentos, buscam-se alternativas de diagnóstico, entre elas a utilizaçäo da Biologia Molecular. Através da reaçäo em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se um par de oligonucleotídios que amplifica um fragmento de 284 pares de bases do gene invA (gene relacionado com a capacidade de invasäo das salmonelas), foi possível detectar a presença destas em ovos SPF contaminados experimentalmente com uma amostra de Salmonella Typhimurium que foi coletada a partir de um cultivo em meio BHI, na fase estacionária, diluída até 0,00000001 e inoculada em ovos de galinha inteiros e apenas na parte interna. Vinte e cinco gramas de ovos contaminados foram incubados a 42§C com 225 ml de água peptonada a 1 por cento. Para a extraçäo de DNA e a realizaçäo da PCR coletou-se 1ml de cada amostra, em diferentes tempos de incubaçäo em água peptonada a 1 por cento e em caldo Rappaport-Vassiliadis. As metodologias de extraçäo obedecereram protocolo do fenol-clorofórmio e pelo tratamento térmico. Obteve-se 100 por cento de recuperaçäo nas amostras com 24 horas de incubaçäo em água peptonada a 1 por cento, o mesmo acontencendo com 24 horas de caldo RV, independentemente do inóculo inicial.