Cultivo de condrocitos sobre una matriz acelular derivada de membrana amniocoriónica / Culture of chondrocytes on an acellular matrix derived from amniochorionic membrane

Introducción: El tejido cartilaginoso articular presenta escasa capacidad regenerativa. Existe alta incidencia de lesiones condrales en la rodilla, especialmente de grado II/III (Outerbridge). El uso combinado de células autólogas cultivadas con membranas biológicas es una posibilidad terapéutica. El objetivo del presente trabajo es analizar las características del desarrollo in vitro de condrocitos humanos sobre una membrana amniocoriónica acelular (MAC) desecada. Materiales y métodos: Entre diciembre de 2010 y diciembre de 2011 se procesaron 16 muestras de cartílago de donante vivo, de las cuales se analizaron siete. Los condrocitos fueron cultivados y amplificados sobre plástico, a partir de lo cual se realizaron los siguientes análisis: interacción entre células y MAC, capacidad de la MAC como matriz para las células y comportamiento de las células cultivadas sobre la MAC. Resultados: Los condrocitos in vitro mostraron cambios fenotípicos en presencia de MAC. Las células fueron capaces de adherirse y permanecer en la región esponjosa de la membrana. La microscopia electrónica de las MAC cultivadas mostró la presencia de células, organelas celulares bien conservadas, retículo endoplásmico y uniones de tipo desmosoma. Conclusiones: Este trabajo muestra la factibilidad de cultivar condrocitos sobre MAC. Las células fueron capaces de adherirse, permanecer y diferenciarse sobre la membrana durante el tiempo del estudio

Análisis de la polaridad estructural y funcional de estructuras tridimensionales (esferoides) de células hepáticas porcinas cultivadas in vitro / Structural and functional polarity of porcine hepatocyte cultured spheroids

Los hepatocitos son células epiteliales polarizadas que, al ser aisladas y cultivadas, pierden la polaridad y las propiedades de célula diferenciada. El cultivo de células hepáticas como esferoides permite obtener estructuras con organización de tipo tisular. En este trabajo se analizó estructural y funcionalmente la polaridad de esferoides porcinos. Para ello, las células hepáticas porcinas fueron aisladas y cultivadas en agitación constante. La actividad metabólica de los esferoides fue probada mediante el metabolismo de diazepam y de amonio, así como con síntesis de albúmina. Sus características estructurales mostraron la polaridad de las células. Fueron observados paquetes de fibras de colágeno distribuidas irregularmente y fibras reticulares en formahomogénea en todo el volumen del esferoide. Se hallaron células Ck19+ formando estructuras tipo ducto biliar, así como también _ y _-cateninas y pan-cadherinas en diferentes zonas, especialmente en las laminas externas, con características de epitelio cuboidal. Por microscopía electrónica de barrido se observaron estructuras muy compactas con superficie lisa, y por microscopía electrónica de transmisión, canalículos biliares con microvellosidades, uniones tight, zonula adherens y desmosomas. Las organelas celulares como mitocondrias, núcleos, nucleolos, peroxisomas, retículo endoplásmico estaban bien conservadas. Una compleja red de canalículos biliares fue observada mediante la incorporación y excreción de un análogo de sal biliar fluorescente. El análisis de los ácidos biliares excretados mostró un patrón normal. La morfología y funcionalidad de los esferoides puede aportar un modelo apropiado para aplicaciones en las que es primordial mantener las funciones específicas del hígado, como un dispositivo de hígado bioartificial.

Hepatocytes are epithelial cells that show a complex polarity in vivo. However, hepatocytes isolated and cultured in vitro normally lose both their differentiated properties and polarity. Culturing hepatocyte spheroids seems to be the accurate approach to maintain tissue level of organization. The structural and functional polaritiesof pig liver spheroids were analyzed in this work. Swine liver cells were isolated and cultured as spheroids. Their metabolic activity was proved through the metabolism of diazepam, ammonium and synthesis of albumin. Several structural features show the presence of polarity in the cells inside the spheroids. Reticular and collagen fibers, as well as Ck19(+) cells forming duct-like structures were found. _eta and _-catenins and pancadherins were positive in different regions of the spheroids, mainly in the outer cell layers, which have cuboidal epithelia features. The scanning electron microscopy showed a tightly compacted architecture, with smooth surface. The transmission electron microscopy analysis showed bile canaliculi with microvilli, tight junctions, zonula adherens and desmosome-like junctions. Wellmaintained cellular organelles, as mitochondria, nucleus,nucleolus, peroxisomes, endoplasmic reticulum, were seen in the spheroids. A complex inner bile canaliculinetwork was shown by using a fluorescent bile acid analogue incorporated and excreted by the spheroids. Furthermore, excretion of a normal pattern of bile acids was demonstrated. The morphology and functionality of the spheroids may provide an appropriate model for applications where the maintenance of liver-specific functions is crucial, as a bioartificial liver device.

Células troncales (stem cells) y regeneración cardíaca / Stem cells and cardiac regeneration

Las células troncales carecen de marcadores de diferenciación, tienen gran capacidad proliferativa, pueden automantener la población, producen progenies de células progenitoras y participan en la regeneración de tejidos. Los tejidos de un individuo tienen capacidad de regeneración, que a veces está ligada a la presencia de células troncales. La medicina regenerativa plantea la terapia celular como una alternativa para el tratamiento de diversas enfermedades, incluyendo las cardíacas (cardiomioplastia celular). Las células a usar pueden provenir de distintas fuentes, entre ellas las células troncales de origen cardíaco o extracardíaco. La médula ósea es una de las fuentes más importantes de células troncales extracardíacas, que podrían contribuir a obtener células cardíacas por diversos mecanismos (transdiferenciación, fusión o transferencia a través de estructuras nanotubulares). En los últimos años, diversas publicaciones refieren la existencia de células troncales nativas cardíacas, caracterizadas por la presencia de distintos marcadores. Se plantea también la alternativa del uso de factores de crecimiento para producir la movilización de células troncales. El individuo adulto posee células con alta potencialidad, surgidas en estadios embrionarios antes o después de la determinación en las capas germinales, y mantenidas hasta la adultez que, bajo condiciones apropiadas de manipulación, permita su utlización en la medicina regenerativa

Stem cells are defined by virtue of their functional attributes: absence of tissue specific differentitated markers, capable of proliferation, able to self-maintain the population, able to produce a large number of differentiated, functional progeny, able to regenerate the tissue after injury. Cell therapy is an alternative for the treatment of several diseases, like cardiac diseases (cell cardiomyoplasty). A variety of stem cells could be used for cardiac repair: from cardiac and extracardiac sources. Each cell type has its own profile of advantages, limitations, and practicability issues in specific clinical settings. Differentiation of bone marrow stem cells to cardiomyocyte-like cells have been observed under different culture conditions. The presence of resident cardiac stem cell population capable of differentiation into cardiomyocyte or vascular lineage suggests that these cells could be used for cardiac tissue repair, and represent a great promise for clinical application. Stem cells mobilization by cytokines may also offer a strategy for cardiac regeneration. The use of stem cells (embryonic and adult) may hold the key to replacing cells lost in many devastating diseases. This potential benefit is a major focus for stem cell research

Transplante de hepatocitos en ratas con cirrosis biliar secundaria / Transplanted hepatocites in biliary cirrhotic rats

Antecedentes: Nuevas líneas de investigación para suplir la falta de donantes hepáticos se encuentran en desarrollo. El transplante de hepatocitos se presenta como una alternativa terapéutica de futuro para el tratamiento de diversas afecciones crónicas del hígado en fase terminal. Objetivo: Evaluar viabilidad y cambios bioquímicos de hepatocitos transplantados en ratas cirróticas. Lugar de aplicación: Unidad de Medicina Experimental. Diseño: Experiemntal prospectivo controlado. Material: Ratas Wistar, sexo indistinto, 250 gramos (n=15). Hepatocitos: aislamiento con técnicas de colagenasa. Transplante: retroperitoneal. Histología: convencional, inmunohistoquímica. Método: Grupo donante (n=5), aislamiento de hepatocitos (viabilidad X = 65 por ciento, cantidad = 1x10). Grupo receptor (n=5)...

Células stem hepáticas / Hepatic stem cells

Las células stem son células indiferenciadas con capacidad proliferativa, capaces de dar origen a todos los múltiples tipos de células especializadas del cuerpo, así como también participar en la regeneración del órgano de origen después de una injuria. Se conoce la existencia de células stem en prácticamente todos los órganos del cuerpo humano adulto. Diversos estudios sobre patogénesis de enfermedades hepáticas han demostrado la existencia de células progenitoras hepáticas. Las características morfológicas, bioquímicas y funcionales, así como la capacidad proliferativa y ploidía de los hepatocitos varían según su ubicación dentro del parénquima hepático. Embriológicamente los hepatocitos y las células ductales biliares derivan de células endodérmicas multipotenciales que originan el divertículo hepático. La reparación hepática se produce normalmente a través de la activación de células maduras, salvo cuando el daño hepático es demasiado extenso, en cuyo caso se produce la activación de células progenitoras ubicadas en el canal de Hering, que originan las células ovales, descriptas en roedores y en el hombre. Hay marcadores antigénicos específicos que identifican estas células, algunos compartidos con células hematopoyéticas. Una tercera posibilidad de regeneración hepática es la obtención de células hepáticas a partir de progenitoras de médula ósea. Fueron realizados diversos trabajos con modelos animales y en el hombre, que indicarían que las células hematopoyéticas podrían ser células itinerantes, capaces de sufrir una diferenciación específica del tejido, fenómeno conocido como plasticidad. El proceso de activación de células progenitoras para generar nuevos hepatocitos y células ductulares biliares, tiene fundamental importancia en temas relacionados con la patofisiología del hígado, como el cáncer y la reparación del parénquima hepático masivamente destruído

Células progenitoras hepáticas / Hepatic stem cells

La existencia de células progenitoras hepáticas ha sido discutida durante mucho tiempo, hasta que diversos estudios sobre la patogénesis de las enfermedades hepáticas, revelaron su existencia. Los hepatocitos que forman parte del parénquima muestran diferencias morfológicas, bioquímicas y funcionales, así como también en su capacidad de proliferación y en los patrones de expresión de genes. Los hepatocitos y las células ductales biliares tienen un origen embriológico común: las células endodérmicas multipotenciales, que migran y se diferencian por señales recibidas del mesénquima portal. La regeneración hepática se produce normalmente a través de la activación de células maduras. Cuando el daño hepático es demasiado extenso, se produce la activación de células progenitoras ubicadas en el canal de Hering, que dan origen a las células ovales. Hay marcadores antigénicos específicos de estas células, y otros compartidos con células fetales. Existen en el hombre células con características similares a las ovales descriptas en roedores. Una nueva dimensión en este tema, es el hallazgo de la obtención de células hepáticas a partir de células progenitoras de médula ósea. En este sentido, fueron realizados diversos trabajos con modelos animales y también en el hombre. Estos trabajos, así como otros referidos a obtención de otros tipos celulares a partir de médula ósea, indicarían que las células hematopoyéticas podrían ser células itinerantes, capaces de sufrir una diferenciación específica de tejido. El proceso de activación de células progenitoras para generar nuevos hepatocitos y células ductulares biliares, tiene fundamental importancia en temas relacionados con la patofisiología del hígado, como el cáncer y la reparación del parénquima hepático masivamente destruído.