Follicle Viability after Vitrification of Bovine Ovarian Tissue / Viabilidade folicular após a vitrificação de tecido ovariano bovino

Abstract Purpose The present study aimed to evaluate the impact of vitrification on the viability of follicles using a three-dimensional (3D) in vitro culture. Methods Bovine ovarian tissue samples (n = 5) obtained from slaughterhouses were utilized. The cortex was cut into small fragments of 2 x 3 x 0.5 mm using a tissue slicer. From these fragments, secondary follicles were first isolated by mechanical and enzymatic methods, then encapsulated in alginate gel and individually cultured for 20 days. Additional fragments of the same ovarian tissue were vitrified in a solution containing 25% glycerol and 25% ethylene glycol. After warming, the follicles underwent the same follicular isolation process that was performed for the fresh follicles. Results A total of 61 follicles were isolated, 51 from fresh ovarian tissue, and 10 from vitrified tissue. After the culture, the vitrified and fresh follicles showed 20% and 43.1% survival rates respectively (p = 0.290),with no significant differences. At the end of the culture, therewere no significant differences in follicular diameter between the vitrified (422.93 ± 85.05 μm) and fresh (412.99 ± 102.55 μm) groups (p = 0.725). Fresh follicles showed higher mean rate of antrum formation when compared with vitrified follicles (47.1% and 20.0% respectively), but without significant difference (p = 0.167). Conclusions The follicles were able to develop, grow and form antrum in the 3D system after vitrification, despite the lower results obtained with the fresh tissue.

Resumo Objetivo O presente estudo teve como objetivo avaliar o impacto da vitrificação na viabilidade dos folículos utilizando a cultura in vitro tridimensional (3D). Métodos Foi utilizado tecido ovariano bovino (n = 5) obtido de abatedouros. O córtex foi cortado em pequenos fragmentos de 2 x 3 x 0,5 mm, utilizando o tissue slicer e a partir destes fragmentos foram isolados folículos secundários por meio de método enzimático e mecânico, encapsulados em gel de alginato e cultivados individualmente durante 20 dias. Outros fragmentos do mesmo tecido ovariano foram vitrificados em solução contendo 25% de glicerol e 25% de etilenoglicol. Após aquecimento, os folículos passaram pelo mesmo processo de isolamento folicular realizado a fresco. Resultados Foram isolados 61 folículos, sendo 51 originários de tecido ovariano a fresco, e 10 de tecido vitrificado. Após a cultura, os folículos vitrificados apresentaram taxa de sobrevida de 20%, e o grupo a fresco apresentou taxa de 43,1% (p = 0,290). O diâmetro folicular ao final da cultura também não apresentou diferença significativa entre o grupo vitrificado (422,93 ± 85,05 μm) e a fresco (412,99 ± 102,55 μm) (p = 0,725). Os folículos a fresco apresentarammaior taxa média de formação de antro do que os folículos vitrificados (47,1% e 20,0%, respectivamente), mas sem diferença significativa (p = 0,167). Conclusões Os folículos foram capazes de se desenvolver, crescer e formar antro em sistema 3D após a vitrificação.

Indução de ovulação em pacientes com tumor estrogênio­dependente: diretrizes clínicas da Sociedade Brasileira de Reprodução Humana / Ovulation induction in patients with estrogen­dependent tumors: a Brazilian Society of Human Reproduction clinical practice guideline

A oncofertilidade é um campo de interesse interdisciplinar de desenvolvimento recente que busca mesclar os conhecimentos em oncologia e medicina reprodutiva, com a contribuição das técnicas de reprodução assistida, para o desenvolvimento de estratégias de preservação da função gonadal e oferecer a possibilidade da procriação biológica aos sobreviventes de câncer. As estratégias de preservação da fertilidade feminina em pacientes oncológicas atualmente aceitas para a prática rotineira são a criopreservação de embriões e a criopreservação de oócitos maduros. Ocorre que, para execução de ambos, a indução de ovulação é obrigatória e, com ela, vêm os riscos teóricos de estimulação do crescimento de tumores estrogênio­dependentes e a postergação do início do tratamento antineoplásico. Os protocolos de estimulação ovariana de início aleatório contemplam a intenção de se minimizar o atraso no início da quimioterapia ou radioterapia e o bloqueio ao crescimento tumoral e oferecem resultados satisfatórios, semelhantes aos obtidos em protocolos de início habitual. Apresentamos neste artigo as diretrizes clínicas da Sociedade Brasileira de Reprodução Humana para indução de ovulação em pacientes com tumor estrogênio­dependente.(AU)

Oncofertility is an interdisciplinary interest field of recent development, which aims to merge the knowledge in oncology and reproductive medicine, with the help of assisted reproductive technologies, to develop strategies for gonadal function preservation and to offer the possibility of biological procreation to cancer survivors. Preservation strategies of female fertility in oncological patients currently accepted for routine practice are the cryopreservation of embryos and cryopreservation of mature oocytes. It happens that ovulation induction is mandatory for executing both strategies, and with it the theoretical risk of stimulation of estrogen­dependent tumors growth and the postponement of anti­neoplastic treatment. Random­start ovarian stimulation protocols include the intention of minimizing the delay in onset of chemo­radiotherapy and to block tumor growth, providing satisfactory results, similar to those obtained in the usual beginning protocols. This article presents the clinical guidelines of the Brazilian Society of Human Reproduction for ovulation induction in patients with estrogen­dependent tumors.(AU)

Comparison between Slow Freezing and Vitrification in Terms of Ovarian Tissue Viability in a Bovine Model / Comparação da viabilidade do tecido ovariano após congelamento lento e vitrificação em modelo bovino

Abstract Objective To assess the viability of bovine ovarian tissue after cryopreservation through either slow freezing or vitrification, and to compare it to that of control tissue by performing morphological analyses. Methods The study included 20 bovine ovarian cortex fragments that were divided into control, vitrification, and slow freezing groups. Each group consisted of four fragments of the same ovary, two fixed without cultivation, and two fixed with cultivation. Tissues were evaluated based on follicular morphology immediately after heating and after 7 days of culture, and compared with the control group. Results A total of 240 fragments were analyzed, generating a sample of 1,344 follicles without cultivation and 552 with cultivation. When the non-cultivated samples were classified as non-atretic follicles, 572 were found in the control group, 289 in the vitrification group, and 373 in the slow freezing group, showing no significant differences. When classified as atretic, 46 follicles were found in the control group, 23 in the vitrification group, and 41 in the slow freezing group, also showing no statistical difference. In the post-culture sample, an evolution of the follicular stages could be observed. This finding was important to support that the follicles considered non-atretic in the non-cultivated group were actually viable in the morphological evaluation. Conclusion With no differences between the protocols, vitrification was shown to be an advanced and alternative method for patients who will undergo treatments that.

Resumo Objetivo avaliar a viabilidade do tecido ovariano bovino após a criopreservação, utilizando congelamento lento e vitrificação, e comparando com o tecido controle por meio de análises morfológicas. Métodos o estudo incluiufragmentos de córtex de vinte ovários bovinos divididos em grupos controle, vitrificação e congelamento lento. Cada grupo foi composto por quatro fragmentos do mesmo ovário, sendo dois fragmentos fixados sem cultivo e dois fragmentos fixados pós-cultivo. Os tecidos foram avaliados pela morfologia folicular logo após o aquecimento e após sete dias de cultivo, e comparados com o grupo controle. Resultados um total de 240 fragmentos foi analisado, gerando uma amostra de 1.344 folículos sem cultivo e 552 pós-cultivo. Quando a amostra sem cultivo teve seus folículos agrupados em não atrésicos, obtivemos 572 no grupo controle, 289 no vitrificação, e 373 no congelamento lento, não apresentando diferença estatística. Quando agrupados em atrésicos, o grupo controle apresentou 46 folículos, o vitrificação, 23, e o congelamento lento, 41, não apresentando também diferença estatística. Na amostra pós-cultivo, podemos observar uma evolução dos estágios foliculares: esse achado foi importante para sustentar que os folículos considerados não atrésicos na avaliação morfológica sem cultivo estavam realmente viáveis. Conclusão não havendo diferenças entre os protocolos, a vitrificação se mostra um avanço e um método alternativo para pacientes que irão se submeter a tratamentos que podem levar a uma falência ovariana, uma vez que a metodologia é mais barata, mais rápida e mais bem adaptável a uma rotina de um laboratório.

Antifungal activity of propolis against Candidaspecies isolated from cases of chronic periodontitis

This research evaluated the fungistatic and fungicidal activities of red propolis alcoholic extract (RPAE) against different Candida species isolated from chronic periodontitis cases, and compared with chlorhexidine (CHX). Nineteen samples of Candida species (C. albicans [n = 12], C. tropicalis [n = 5] andC. glabrata[n = 2]) isolated from chronic periodontitis cases were analyzed. The fungistatic and fungicidal activity of both RPAE and CHX were evaluated using fluconazole and C. parapsilosis (ATCC 6258) as a control. Fungistatic activity was analyzed based on the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) reference procedure to determine the minimum inhibitory concentrations. Fungicidal activity was established according to the absence of fungal growth on Sabouraud Dextrose Agar medium. The fungistatic and fungicidal activities of RPAE were observed, respectively, at 32-64 μg/mL and 64-512 μg/mL for C.albicans, 64 μg/mL and 64-256 μg/mL for C. glabrata, and 32-64 μg/mL and 64 µg/mL for C. tropicalis. CHX fungistatic activity was observed at concentrations of 0.003-1.92 µg/mL for C. albicans, 1.92 µg/mL for C. glabrata, and 0.03-1.92 µg/mL for C. tropicalis. Fluconazole fungistatic activity ranged between 1-64 μg/mL, and fungicidal activity occurred at 8-64 μg/mL, for the threeCandida species analyzed. All the Candidaspecies were susceptible to RPAE antifungal activity, but five samples ofC.albicans, one ofC.tropicalis and one ofC.glabrata were resistant to fluconazole antifungal activity. CHX showed fungistatic activity against all the Candida species analyzed. The antifungal potential of these substances suggests that they can be applied as an alternative treatment for diseases affected by these species.

Preservação da fertilidade em mulheres com câncer: atualização e perspectivas / Fertility preservation in women with cancer: update and perspectives

Com o aumento do diagnóstico de câncer em mulheres jovens e os avanços no seu tratamento, muitas pacientes que poderão ter sua fertilidade comprometida com a quimioterapia têm manifestado desejo de engravidar futuramente. O congelamento de embriões, após fertilização in vitro, para preservar a fertilidade está bem estabelecido. A criopreservação de oócitos por vitrificação evoluiu bastante nos últimos anos, deixando de ser experimental. Até 2009 nasceram mais de 900 crianças a partir de oócitos criopreservados, sem aumento do risco de anomalias congênitas. O uso de análogos do GnRH para a supressão ovariana durante a quimioterapia na tentativa de prevenir a falência ovariana prematura apresenta resultados incertos. Outras técnicas ainda são consideradas experimentais, como a criopreservação e posterior autotransplante de tecido ovariano. Já foram relatados 24 nascimentos com o seu uso, persistindo, entretanto, dúvidas que motivam o seu estudo. A maturação de folículos ovarianos in vitro é alternativa promissora para preservação da fertilidade nessas pacientes e tem apresentado resultados positivos em roedores, macacos e humanos. Muita cautela deve ser tomada com o uso de técnicas experimentais, especialmente quando oferecidas para pacientes diante de fragilidade emocional. Por isso, é importante transmitir corretamente informações sobre chances de gravidez com tratamentos existentes e as limitações das técnicas experimentais...

With the increased number of cancer diagnoses among young women and the advances in treatment, many patients who may have had their fertility compromised by chemotherapy express desire to become pregnant in the future. Freezing embryos for later IVF so as to preserve fertility is a well established process. Oocyte cryopreservation by vitrification has evolved greatly in recent years and is no longer considered experimental. By 2009 more than 900 children were born from cryopreserved oocytes, without increased risk of congenital anomalies. The preventive use of GnRH analogues for ovarian suppression during chemotherapy to avoid premature ovarian failure has uncertain outcomes. Other techniques such as cryopreservation of ovarian tissue for later autograft are still considered experimental. Although use has already been reported in 24 births, doubts still persist and motivate further study. In vitro maturation of ovarian follicles is a promising alternative for preserving patient fertility and has shown positive results in rodents, monkeys, andhumans. Caution should be used with experimental techniques, especially when offered to emotionally fragile patients. Therefore it is important to thoroughly convey information on the chances of pregnancy with existing treatments and the limitations of experimental techniques...

Comparação entre três esquemas de indução da ovulação para inseminação intra-uterina com relação à espessura endometrial e taxa de gravidez / Comparison between three protocols for ovulation Induction in cycles of intrauterine insemination and related endometrial thickness and pregnancy rate achieved in each protocol

OBJETIVO: comparar as taxas de gravidez e as espessuras endometriais médias obtidas com a utilização de três esquemas de indução da ovulação para inseminação intra-uterina (IIU). MÉTODOS: foram avaliados retrospectivamente 110 ciclos de IIU, sendo estes divididos em três grupos, de acordo com o protocolo de indução da ovulação utilizado: 100 mg de citrato de clomifeno (CC) do 3º ao 7º dia do ciclo (grupo CC, n=24); acrescentou-se ao esquema do grupo CC 75 UI de gonadotrofina menopáusica humana (hMG) nos dias 3, 5 e 7 do ciclo (grupo CC+hMG, n=29) e hMG isolado, 75 UI do 3º ao 8º dia do ciclo (grupo hMG, n=57). Para análise estatística foi utilizado o teste t de Student para comparação entre médias e o teste c² para comparação entre proporções. RESULTADOS: a média de idade das pacientes no início do tratamento foi de 33,3 anos (23 a 40 anos), sendo similar nos três grupos. A espessura endometrial média no dia da aplicação da gonadotrofina coriônica humana (hCG) foi significativamente maior no grupo hMG (10,2±0,2 mm) em comparação à obtida nos grupos CC e CC + hMG (7,9±0,4 e 8,7±0,2 mm, respectivamente, p<0,001). A taxa de gestação clínica média foi de 18,2 por cento, sendo semelhante nos três grupos (grupo CC=12,5 por cento; grupo CC+hMG=24,1 por cento; grupo hMG=19,3 por cento). CONCLUSAO: observou-se maior espessura endometrial média com o uso isolado de hMG em comparação ao uso isolado de CC ou à associação CC+hMG. Não foram observadas diferenças significativas entre as taxas de gestação clínica obtidas com os três esquemas de indução da ovulação utilizados (CC isolado, associação de CC e hMG e hMG isolado)

Fitoestrogênios: valor terapêutico no climatério / Phytoestrogens: therapeutic value in climacteric

Os fitoestrogênios são um grupo de componentes não-esteróides com propriedades estruturais e funcionais semelhantes às dos estrogênios. As isoflavonas (genisteina e daidzeina) são as mais conhecidas nesse grupo. Seu mecanismo de ação se dá por meio de sua interação com os receptores estrogênicos; possuem efeitos antioxidantes e propriedades de inibição enzimática. Devido à sua capacidade de interagir com os receptores estrogênicos, tem-se aventado a sua utilização como alternativa à terapia de reposição hormonal no climatério. Embora a maioria dos estudos demonstre um efeito benéfico nos sintomas do climatério, há controvérsias. Os dados disponíveis no momento são controversos com relação à prevenção de doenças cardiovasculares e osteoporose.

Phytoestrogens are non-steroid compounds that have structural and functional properties similar to estrogens. The isoflavones (genistein and daidzein) are well known among these components. Isoflayones have antioxidant effects and anti-enzyme properties. In addition, isoflavones interact with estrogen receptors, opening the possibilitv of their utilization as a possible alternative to the usual hormone replacement therapy in the climaterium.

Função cognitiva na pós-menopausa / Cognition in menopause: effects of estrogen therapy

Com o propósito de avaliar o efeito do estrogênio na função cognitiva de mulheres na pós-menopausa, compararam-se os resultados do uso da terapia estrogênica com a utilização do placebo. Também se propôs estudar a relação entre os efeitos do tratamento nos sintomas climatéricos e depressivos e os resultados dos testes de função cognitiva. A metodologia utilizada foi o estudo duplo-cego, randomizado, controlado, comparando o uso de 2 mg de 17-beta-estradiol por via oral com o placebo. As pacientes estudadas eram mulheres na pós-menopausa, com idades entre 48 e 65 anos, com 8 anos de instrução formal. Excluíram-se mulheres com depressão moderada ou grave, com demência, usuárias de medicações com ação sobre o sistema nervoso central ou com contra-indicações à reposição hormonal. As 74 mulheres incluídas foram avaliadas em relação à função cognitiva, sintomas depressivos e climatéricos antes e depois de 12 semanas de terapia hormonal, utilizando-se os seguintes testes psicométricos: Mini-mental, Evocação Imediata e Tardia de Estória, Span de Dígitos, FAS, Teste Stroop, Dígito-simbolo, Trilhas A, Trilhas B e Teste dos sinos, além das Escalas de Depressão de Hamilton e Climatérica de Greene. Os grupos placebo e estradiol foram homogêneos em relação à idade, número de gestações, tempo de pós-menopausa, índice de massa corporal e pontuação nos diferentes testes antes do inicio do tratamento. Ao final do estudo, os resultados mostraram melhora significante apenas no grupo que usou estradiol nos seguintes testes: Evocação Imediata e Tardia de Estória e Escalas de Greene e Hamilton. Houve melhora em ambos os grupos nos testes FAS, Stroop e Sinos. Entretanto, ao se comparar os grupos, o único teste que mostrou diferença significante foi a Escala Climatérica de Greene. Observou-se ainda uma relação direta entre a redução dos sintomas climatéricos e o melhor desempenho apenas no Teste Stroop

Tensão pré-menstrual / Premenstrual syndrome

A Tensão pré-menstrual é condição que inclui sintomas físicos, emocionais e cognitivos, afetando 75 porcento das mulheres no menacme, ocorrendo exclusivamente durante a fase lútea do ciclo menstrual. Cerca de 3 a 5 porcento das pacientes afetadas apresentam a sua forma grave (distúrbio disfórico pré-menstrual). O diagnóstico exige anamnese e exame físico minuciosos para excluir outras causas de sintomas físicos ou emocionais. Não há um consenso sobre a sua etiologia, sendo descritos fatores biológicos, emocionais, comportamentais, socioculturais e genéticos. O tratamento inclui medidas gerais, intervenções no estilo de vida, suplementos nutricionais e tratamento farmacológico, sendo seu objetivo uma boa qualidade de vida, pela redução dos sintomas, com melhora das funções sociais

Proposta de um aparelho para disjunçäo palatina: o borboleta de marinho / Proposal of an appliance to acomplish palatal disjunction: the marinho's butterfly

A expansäo maxilar rápida é um tratamento ortopédico usado para correçäo da mordida cruzada uni ou bilateral causada por deficiência transversal da maxila, com a vantagem de consumir menor tempo de tratamento. Este artigo descreve um novo aparelho para a realizaçäo da disjunçäo palatina -"O borboleta marinho's", além de dar as indicaçöes para esse tipo de tratamento, ativaçäo, adaptaçäo e técnica de cimentaçäo do aparelho

Infertilidade e Emoçäo / Infertility and Emotion

Os aspectos psicológicos vivenciados pelos casais inférteis apresentam certas particularidades, podendo interferir na relaçäo do casal, nas relaçöes familiares e sociais e, em alguns casos, também no desempenho profissional. O conhecimento destas particularidades é de fundamental importância para que possamos ajudar esses casais durante o tratamento de infertilidade

Avaliaçäo do efeito da Tibolona (Livial) na sexualidade de mulheres na pós-menopausa / Evaluation of the effect of tibolone on sexuality and climacteric symptoms on postmenopausal woman

OBJETIVOS: Avaliar efeito da tibolona sobre a sexualidade e sintomas climatéricos de mulheres na pós-menopausa. TIPO DE ESTUDO: Estudo prospectivo, aberto, näo comparativo e multicêntrico. MATERIAL E MÉTODOS: 30 mulheres na pós-menopausa foram tratadas com 2,5mg de tibolona, por via oral, durante 24 semanas. Como parâmetros de avaliaçäo foram utilizados o Questionário de Sexualidade Feminina de McCoy e a Escala de Climatério de Greene, aplicados antes do início do estudo e após 4, 12 e 24 semanas de tratamento. Também foi realizado o exame de citologia hormonal vaginal antes do início do estudo e após o tratamento. O evento adverso mais comum foi o sangramento vaginal. Nenhuma paciente abandonou o tratamento devido a evento adverso. RESULTADOS: Houve um aumento significativo na pontuaçäo do Questionário de Sexualidade de McCoy do início (60,4 pontos) até o término do estudo (100,8 pontos). A pontuaçäo média da Escala de Climatério de Greene decresceu significativamente do início (52,3 pontos) até o término do estudo (27,9 pontos). Na citologia hormonal vaginal houve aumento da porcentagem de células do tipo superficiais. CONCLUSÃO: A tibolona, na dose diária de 2,5mg, foi segura e bem tolerada e demonstrou um evidente benefício na sexualidade e no controle dos sintomas climatéricos em mulheres na pós-menopausa.

Comparação dos resultados cefalométricos obtidos com a utilização dos aparelhos ortópédicos guia PAM e Frãnkel para correção de maloclusão Classe II de Angle em Pacientes em fase de crescimento / Cephalometric chages in orthopedics appliance guia PAM and Frãnkel to the treatment of Angle Classe II maloclusions in Young Patients

O objetivo deste trabalho foi comparar os resultados cefalométricos obtidos com a urilização dos aparelhos ortopédicos Guia PAM e Frãnkel para correção de maloclusão de Classe II de Angle, sendo que o tempo médio de tratamento com o aparelho Guia PAM é de seis meses ativo e cinco meses de contenção e com o uso de Frãnkel é de 21 meses

Prognóstico de fertilidade após uma gestaçäo ectópica / Fertility outcome after an ectopic pregnancy

Os tratamentos propostos para a gravidez ectópica devem ser particularizados, para que cada paciente possa receber uma abordagem adequada, reservando-se o direito do melhor prognóstico. O tratamento pode ser conservador, desde que sejam obedecidos rigorosos critérios e cuidados; medicamentos, em condiçöes especiais e com o devido acompanhamento; e cirúrgico, ainda observando-se a melhor via para sua realizaçäo. Esta revisäo visa dar ao médico assistente melhores condiçöes para a individualizaçäo de cada caso.