Detection of antigens in paraffin sections of worms and snails infected by Angiostrongylus cantonensis by immunofluorescence reaction / Detecção de antígenos em cortes parafinados de vermes e caramujos infectados por Angiostrongylus cantonensis pela reação de imunofluorescência

The Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) was used to identify stage-specific antigenic structures in paraffin sections of female larvae and worms and snails tissues, infected with third stage larvae of Angiostrongylus cantonensis. Sera from eosinophilic meningitis cases were used to assess reactivity. Non-reactive sera from patients with other parasitic diseases and from individuals without other etiologies were used as controls for cross-reactivity. Larvae and worms showed high reactivity to IgG antibodies. IgM antibodies reacted with low intensity only to larvae. Fluorescent reactions were observed in the cuticles and internal structures on worms sections, with a marked reaction in the uterus content. In the snail tissues, the larvae were found exclusively inside the granulomas, with fluorescent markings in the cuticles of the larvae and inside the granulomatous tissues. This fluorescent pattern suggests the presence of excretory/secretory antigens distributed throughout the granulomas. Expressive cross-reactivity occurred in sera from patients with other parasitic diseases, especially strongyloidiasis. The use of IFA applied to paraffin sections to identify structures with antigenic potential and the study of new serological markers, can contribute to the improvement of the laboratory diagnosis of eosinophilic meningitis. (AU)

A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) foi utilizada para localizar antígenos em estruturas estágio-específicas em cortes parafinados de vermes fêmeas e em tecidos de caramujos do Gênero Biomphalaria infectados com larvas de terceiro estágio de Angiostrongylus cantonensis. Soros de casos confirmados de meningite eosinfílica foram usados para avaliação da reatividade. Soros não reagentes de casos suspeitos; de pacientes com outras parasitoses e de indivíduos sem outras etiologias foram utilizados como controle de reatividade cruzada. Anticorpos da classe IgG foram reativos para antígenos presentes nos dois estágios e, anticorpos IgM somente para o estágio larvário. Nos cortes de vermes, as marcações fluorescentes foram assinaladas nas cutículas e estruturas internas, com acentuada marcação para os conteúdos uterinos. Nos tecidos dos caramujos as larvas foram encontradas exclusivamente no interior dos granulomas, com marcações fluorescentes nas cutículas das larvas e no interior dos tecidos granulomatosos. O padrão de fluorescência no granuloma sugere a marcação de antígenos excretores/secretores. Reatividade cruzada mais expressiva ocorreu com anticorpos presentes em soros de pacientes com outras parasitoses, com destaque para estrongiloidíase. A RIFI em cortes parafinados abre novas perspectivas para identificação de antígenos e de marcadores sorológicos, que possam ser aplicados no aprimoramento do diagnóstico laboratorial da meningite eosinofílica. (AU)

Immunoanalysis of different antigenic preparations of Angiostrongylus cantonensis for neuroangiostrongyliasis diagnosis improvement

BACKGROUND Angiostrongylus cantonensis is the etiological agent of neuroangiostrongyliasis in humans, which is developed in gastropods and vertebrate species, mainly rodents. Human transmission occurs through consumption of molluscs and paratenic hosts infected with L3, and the migration of larvae to the central nervous system causes eosinophilic meningitis. Laboratory diagnosis is based on molecular and immunological tests, using young or adult females as a source of antigens. However, these tests give positive results only after several weeks of symptoms onset and also cross-reactions with others parasite infections may occur. OBJECTIVES The purpose of this work was to study different antigenic preparations of distinct evolutionary phases of A. cantonensis, in order to improve serological techniques for disease immunodiagnosis. METHODS For this purpose, antigenic fractions of different evolutionary forms were evaluated by Dot-enzyme-linked immunosorbent assay (Dot-ELISA) and Western blot using serum samples. FINDINGS All analysed fractions showed reactivity with serum samples from patients with neuroangiostrongyliasis, especially female membrane alkaline (FAM) and female soluble alkaline (FAS) fractions together with female soluble saline (FSS), improving the technique specificity. MAIN CONCLUSIONS The results point to the possibility of use of raw female antigens in association with alkaline membrane antigens extracted from adult worms to aid in diagnosis and helps initiate neuroangiostrongyliasis surveillance and control actions.

Aprimoramento do imunodiagnóstico da angiostrongilíase meningoencefálica frente a diferentes preparações antigênicas de Angiostrongylus cantonensis / Improved immunodiagnosis of meningoencephalic angiostrongyliasis against different antigenic preparations of Angiostrongylus cantonensis

Angiostrongylus cantonensis é o agente etiológico da neuroangiostrongilíase, o qual se desenvolve em diversas espécies de moluscos e atinge a fase adulta em vertebrados, principalmente roedores, com a possibilidade de participação de hospedeiros paratênicos. A transmissão humana ocorre por meio da preparação inadequada e consumo de moluscos ou hospedeiros de transporte infectados, onde a migração de larvas L3 para o sistema nervoso central causa o quadro de meningite eosinofílica. O diagnóstico laboratorial da patologia é baseado em testes moleculares, que podem apresentar baixa sensibilidade em regiões não endêmicas, e imunológicos utilizando antígenos brutos de fêmeas jovens e adultas, com sensibilidades e especificidades variadas. O objetivo deste trabalho foi estudar diferentes preparações antigênicas de fases evolutivas distintas de A. cantonensis, com o intuito de aperfeiçoar as técnicas sorológicas para o imunodiagnóstico da doença. Para tanto, fêmeas adultas foram avaliadas pela reação de imunofluorescência indireta em cortes parafinados para a focalização de regiões antigênicas no corpo do parasita. Além disso, frações antigênicas de diferentes formas evolutivas foram avaliadas pelas técnicas Dot-ELISA e Western blot com soros e LCRs. Os resultados apontam para a presença de proteínas antigênicas no sistema reprodutivo de fêmeas, além da possibilidade de melhoria do diagnóstico com a utilização de antígenos brutos de fêmeas em associação com antígenos alcalinos de membrana extraídos de vermes adultos para auxiliar no diagnóstico e desencadear ações de vigilância e controle da angiostrongilíase meningoencefálica.

Estudo da fauna enteroparasitária de morcegos sinantrópicos do município de São Paulo/Brasil, no período de abril de 2007 a novembro de 2008 / Study of entroparasite fauna of synantropic bats from city of São Paulo/Brazil from april 2007 to november 2008

A expansão territorial das cidades reduz o habitat de animais silvestres e alguns se adaptam a convivência humana, como várias espécies de morcegos. Através de denúncias de munícipes, o Centro de Controle de Zoonoses de São Paulo (CCZ) efetua coletas regulares de morcegos para o monitoramento da raiva, porém pouco se sabe sobre outros patógenos albergados por eles. Este trabalho teve como objetivo estudar a fauna enteroparasitária de morcegos presentes em áreas urbanas da cidade de São Paulo, verificar sua possível associação às infecções humanas e avaliar o perfil de seus hospedeiros. Para tanto, o CCZ enviou ao Instituto Adolfo Lutz os tratos digestórios de morcegos capturados no período de abril de 2007 a novembro de 2008. Para a identificação dos enteroparasitos encontrados, os espécimes foram fixados, corados, fotografados e as imagens analisadas no programa AxioVision 4.6. A análise do perfil do hospedeiro foi baseada na idade, sexo, hábito alimentar e distribuição geográfica. Dos 647 morcegos estudados, 117 (18,08%) albergavam uma ou mais espécies de parasitos. Helmintos foram encontrados em 17,47% da população hospedeira, em que as infecções por nematódeos corresponderam a 48,67%, sendo a família Molineidae responsável por 76,37%. Já trematódeos corresponderam a 32,74%, sendo Edcaballerotrema eduardocaballeroi a espécie mais frequente (83,78%),enquanto o cestódeo Vampirolepis sp. esteve presente em 30,97% dos animais positivos. Oocistos de coccídeos foram encontrados em 5,26% dos morcegos infectados e três animais apresentaram esporos suspeitos de microsporídeos. Com relação ao perfil dos hospedeiros, as infecções por enteroparasitos foram mais frequentes em animais adultos, do sexo feminino e com hábito alimentar insetívoro. A distribuição geográfica abrangeu praticamente toda a extensão metropolitana, com morcegos infectados por nematódeos...