Parasite load, iNOS and cytokine profiles, and histopathological aspects of Leishmania infantum infection in dogs with different clinical presentations / Carga Parasitária, iNOS, citocinas e histopatologia na infecção por Leishmania infantum em cães com apresentações clínicas distintas

ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease with a canine urban reservoir in South America. Dogs from an endemic area within Brazil, which were naturally infected with Leishmania infantum, and those presenting severe clinical (SC), mild, or no clinical (MNC) disease, were evaluated. Parasite load, histopathology, and cytokine and iNOS mRNA expressions were assessed in the spleen and liver in order to determine the potential markers for disease susceptibility or resistance. As a result, dogs with both SC and MNC had high parasite loads; IFN-γ was the most expressive cytokine in both organs, along with IL-6 and IL-4 being detected in the spleen and liver, and IL-10 only in liver. The hepatic tissue presented higher medians for IFN-γ and IL-10, and was the main organ to produce cytokines with hepatic IL-10 suggesting a regulatory follow up. Granulomas were detected in both organs; however, when absent in spleen, they were associated with elevated IL-6 levels, thus highlighting the anti-inflammatory role of IL-6. Microscopic lesions in the spleen were predominantly characterized by an extensively disorganized white pulp and splenic response was suggested as sub optimized. Parasite load, tissue damage, and immunological response may vary in the dogs with similar clinical symptoms, which may not be a good parameter for assessing the animal's susceptibility to VL.

RESUMO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença zoonótica com reservatório canino na América do Sul. Cães oriundos de área endemica brasileira, naturalmente infectados por Leishmania infantum, apresentando doença clínica severa (CS) ou doença branda ou ausente (BA) foram avaliados. Carga parasitária, histopatologia e expressão de mRNA de citocinas e iNOS foram analisados em baço e fígado, buscando determinar possíveis marcadores de susceptibilidade ou resistência à doença. Como principais resultados, tanto cães CS como BA apresentaram alta carga parsitária. IFN-γ foi a citocina mais expressiva em ambos os órgãos, sendo IL-6 e IL-4 também detectadas em baço e fígado e IL-10 em fígado. No tecido hepático foram encontradas as maiores medianas de IFN-γ e IL-10, sendo o fígado o principal órgão produtor de citocinas, com IL-10 sugerindo acompanhamento regulatório. Granulomas foram detectados em ambos os órgãos. Quando de sua ausência no baço, essa foi associada à elevação dos níveis de IL-6, salientando o papel anti-inflamatório dessa citocina. Alterações microscópicas foram principalmente caracterizadas por extensiva desorganização de polpa branca, com a resposta esplência sendo sugerida como subotimizada. Carga parasitária, dano tecidual e resposta immune variaram mesmo em cães com quadros clínicos similares, não sendo, portanto, a análise clínica um bom parâmetro para avaliação de susceptibilidade animal à LV.

Avaliação da resposta inflamatória in vivo e in vitro na esporotricose felina em diferentes apresentações clínicas / Evaluation of the inflammatory response in vivo and in vitro in feline sporotrichosis at different clinical presentations

A ocorrência de formas graves de esporotricose felina, aliada a lesões sem granulomas e ricas em estruturas leveduriformes, evidencia a suscetibilidade destes animais para a doença e enfatiza a importância do estudo da sua patogenia. O objetivo deste estudo foi descrever o processo inflamatório e a carga fúngica das lesões em diferentes apresentações clínicas, e sua relação com o perfil de leucócitos no sangue periférico de gatos com esporotricose por meio da técnica de citometria de fluxo (CF) e com a infecção pelo Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) e/ou pelo Vírus da Leucemia Felina (FeLV). Gatos com lesões cutâneas com isolamento de Sporothrix sp. foram incluídos no estudo, separados nos grupos L1, L2 e L3 (lesões em um, dois e três ou mais locais, respectivamente) e submetidos a coleta de sangue e de fragmentos de lesão. O estado geral dos animais foi classificado como bom, regular ou ruim. Ao exame histopatológico, as lesões foram agrupadas de acordo com o processo inflamatório (granulomatoso ou inespecífico), grau de ativação de fagócitos predominantes nos granulomas (macrófagos ou células epitelióides), organização do granuloma (bem formado ou mal formado) e intensidade dos tipos celulares no infiltrado. A carga fúngica foi verificada pelas técnicas de impregnação pela prata de Grocott (IPG) e imuno-histoquímica (IHQ). [...] O processo inflamatório granulomatoso supurativo (PIGS) foi observado em 99 casos. A maioria das lesões, sobretudo no grupo L3, apresentavam granulomas mal formados (pvalor= 0,032) e com predomínio de macrófagos (p-valor=0,010)...

The occurrence of severe forms of feline sporotrichosis, along with lesions without granulomasand rich in yeast-like forms, demonstrate the susceptibility of these animals to the disease andemphasizes the importance of the study of its pathogenesis. The aim of this study was to describethe inflammatory changes and fungal load at different clinical presentations and its relationshipwith the profile of leukocytes in peripheral blood of cats with sporotrichosis by means of flowcytometry (FC) technique and with Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and / or FelineLeukemia Virus (FeLV). Cats presenting cutaneous lesions with isolation of Sporothrix sp. inculture were included. They were separated in groups L1, L2 and L3 (lesions in one, two andthree or more sites, respectively) and were subjected to blood sample collection and to biopsy ofthe lesion. The general condition of the animals was classified as good, fair or poor.Histologically, the lesions were described according to the inflammatory process (granulomatousor nonspecific), degree of activation of predominant phagocytes within the granulomas(macrophages or epithelioid cells), granulomas organization (well-formed or poorly formed) andintensity of cell types within the inflammation. The fungal load was assessed by Grocott silverstain (GSS) technique and immunohistochemistry (IHC). [...] Onehundred and one animals were included: 20 in group L1, 22 in group L2 and 59 in group L3.Histologically, 99 lesions showed suppurative granulomatous inflammation (SGI). Most lesions,specially in the group L3, showed poorly formed granulomas (p-value=0.032) and predominantlymacrophages (p-value=0.010)...

Padronização da reação de imuno-histoquímica, utilizando soro policlonal de coelho anti-Sporothrix schenckii, para o diagnóstico da esporotricose canina / Standardization of the reaction immunohistochemistry using polyclonal rabbit anti-Sporothrix schenckii for the diagnosis of canine sporotrichosis

O aumento do número de casos de esporotricose em cães descrito desde 1998 no Rio de Janeiro, aliado à escassez de leveduras nas lesões nestes animais requerem métodos diagnósticos rápidos e sensíveis. A sobreposição de áreas endêmicas e a ocorrência de reação cruzada em testes sorológicos entre a esporotricose e a leishmaniose tegumentar americana (LTA) no Rio de Janeiro enfatizam a relevância do diagnóstico diferencial entre elas. A imuno-histoquímica (IHQ) é um método sensível e específico e pode ser uma alternativa ao diagnóstico. O presente estudo teve como objetivo descrever os achados histopatológicos das lesões cutâneas de esporotricose e LTA em cães, padronizar a técnica de IHQ utilizando soro anti-Sporothrix schenckii em lesões cutâneas de esporotricose canina, comparar esta técnica com as técnicas histológicas convencionais e investigar a ocorrência de reações cruzadas com Leishmania sp.. A análise histopatológica foi realizada em 94 casos de esporotricose e 35 casos de LTA. As lesões foram caracteristicamente granulomatosas supurativas nas duas doenças. Contudo, os granulomas supurativos bem formados e ricos em neutrófilos e o infiltrado inflamatório periférico perivascular, perifolicular e intersticial elevaram a chance do diagnóstico de esporotricose. Os granulomas mal formados e o infiltrado inflamatório periférico difuso com presença de linfócitos e macrófagos favoreceram o diagnóstico da LTA. A pesquisa de leveduras foi realizada em 87 casos. A impregnação pela prata de Grocott e a IHQ detectaram leveduras em, respectivamente, 43,7% e 65,5% dos casos, e as duas técnicas associadas em 74,7% dos casos. A detecção de antígenos de S. schenckii pela IHQ elevou a sensibilidade do diagnóstico histológico a 80,5%. Nas lesões de LTA utilizadas como controle negativo para a IHQ, nenhum tipo de marcação ocorreu. Assim, diante de quadros histopatológicos compatíveis com o descrito para esporotricose, a IHQ é um método complementar ao diagnóstico histológico, garantindo maiores sensibilidade e especificidade aos resultados.

Histopatologia de lesões tumoriformes presentes na cavidade nasal de eqüídeos do Brasil / Histopathology of tumor-like masses present in the nasal cavity of equids from Brazil

Este estudo foi realizado com o objetivo de analisar os aspectos microscópicos e enfatizar a importância do exame histopatológico na determinação do diagnóstico de lesões tumoriformes na cavidade nasal de eqüídeos. Para tanto, foram estudados microscopicamente cortes de tecido de 11 eqüídeos com lesões tumoriformes na cavidade nasal. Essas amostras foram enviadas ao Serviço de Anatomia Patológica da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Federal Fluminense, Niterói, Rio de Janeiro, no período de 2000 a 2004. Foram diagnosticados três casos de rinosporidiose, um de amiloidose, seis de pólipos nasais e um de hematoma etmoidal progressivo.

The purpose of the present study was to analyze the microscopic aspects of tumor-like masses present in the nasal cavity of equids and also to emphasize the importance of histopathological examination for determining the diagnosis. Tissue sections of tumor-like masses from the nasal cavity of 11 equids were microscopically examined. These samples were sent to the Anatomic Pathology Service of the Veterinary Medicine College from the Fluminense Federal University, Niterói, Rio de Janeiro, from 2000 to 2004. Three cases of rhinosporidiosis, one of amyloidosis, six of nasal polyps and one of progressive ethmoid hematoma were diagnosed.