Identificación de ácidos polifenólicos en el extracto metanólico de las hojas de terminalia catappa Linn / Identification of polyphenolic acids in the methanolic extract from Terminalia catappa Linn leaves

INTRODUCCIÓN: diferentes extractos de Terminalia Catappa Linn. (Combretaceae) han demostrado de forma internacional, propiedades farmacológicas beneficiosas para la salud humana. Estas propiedades han sido atribuidas en lo fundamental a los polifenoles y glicósidos, encontrados en hojas, corteza y frutos. En Cuba esta especie es catalogada como una planta invasora y existen pocas investigaciones sobre su composición química y estudios farmacológicos. OBJETIVOS: identificar y cuantificar los ácidos polifenólicos presentes en el extracto metanólico de las hojas de T. catappa utilizándose la cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas. MÉTODOS: las hojas amarillo-rojizas fueron secadas, molidas, desgrasadas con hexano y y con posterioridad extraídas con metanol en un baño ultrasónico. El extracto se filtró y el disolvente se eliminó al vacío. El extracto seco se hidrolizó con ácido clorhídrico y se extrajo con acetato de etilo. Se determinó el rendimiento de extracción, las características organolépticas y los polifenoles totales mediante el método de Follin-Ciocalteu. La composición química del extracto hidrolizado se llevó a cabo por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas, previa formación de los derivados trimetilsilil. RESULTADOS: se obtuvo un líquido de color pardo rojizo oscuro de olor característico. El contenido total de polifenoles fue 184,6 (mg Pirogalol/100 g Extracto). Se detectaron 37 compuestos por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas en el extracto metanólico hidrolizado. Este extracto está compuesto de manera general por ácidos polifenólicos como el ácido gálico; ácido vanílico; ácido 3,4-dihidroxibenzoico; ácido 2,5-dihidroxi-benzoico y ácido 4- hidroxibenzoico. También se detectaron otros compuestos con elevados contenidos como ácido elágico y ácido levulínico. CONCLUSIONES: el extracto metanólico de hojas de T. catappa que crece en Cuba mostró un elevado contenido de ácidos polifenólicos, donde los ácidos gálico y elágico fueron los mayoritarios. La presencia de estos compuestos pudiera justificar las propiedades medicinales atribuidas a esta especie, a la vez que servirían de base para continuar con futuras pruebas farmacológicas que avalen sus usos con fines farmacéuticos.

INTRODUCTION: Different extracts of Terminalia Catappa Linn. (Combretaceae) internationally have shown pharmacological properties beneficial to human health. These properties have been largely attributed to polyphenols and their glycosides found in the leaves, bark and fruits. In Cuba this species is listed as an invasive plant and there is limited research on its chemical composition and pharmacological studies. OBJECTIVES: To identify and quantify the polyphenolic acids that could be present in the methanol extract of Terminalia catappa leaves using gas chromatography-mass spectrometry. METHODS: The yellow-red leaves were dried, ground, defatted with hexane and then extracted with methanol in an ultrasonic bath. The extract was filtered and the solvent removed under vacuum. The dry extract was hydrolyzed with hydrochloric acid and extracted with ethyl acetate. The extraction yield, the organoleptic characteristics and the total polyphenols by Follin-Ciocalteu method were determined. The chemical composition of the hydrolyzed extract was performed by gas chromatography-mass spectrometry after formation of trimethylsilyl derivatives. RESULTS: A dark reddish brown liquid with a characteristic odor was obtained. The total polyphenol content was 184.6 (mg Pyrogallol/100g extract). By mean of gas chromatography-mass spectrometry a total of 37 compounds were detected in the hydrolyzed methanol extract. This extract consists mainly of polyphenolic acids such as gallic acid; vanillic acid; 3,4-dihydroxybenzoic acid; 2,5-dihydroxybenzoic acid and 4- hydroxybenzoic acid. Other compounds with high content as ellagic acid and levulinic acid were also detected. CONCLUSIONS: The methanolic extract obtained from the leaves of Terminalia catappa growing in Cuba showed a high content of polyphenolic acids where gallic acid and ellagic predominated. The presence of these compounds could justify the medicinal properties attributed to this species, while providing the basis for further future pharmacological evidence to support its use for pharmaceutical purposes.

Stability of 50mg-Beeswax alcohols tablets (Abexol®) packed in high-density polyethylene flasks

Introduction: beeswax alcohols, consisting in a reproducible mixture of six primary fatty alcohols from 24 to 34 carbon atoms purified from Apis mellifera beeswax, has been shown to produce antioxidant and gastroprotective effects. This substance is used to manufacture Abexol® 50 mg tablets, the finished form used in clinical studies and in routine practice. Objective: to determine the stability of 50 mg‒Beeswax alcohols tablets (Abexol®) packed in high‒density polyethylene flasks. Methods: samples from three batches of Abexol® 50 mg tablets packed in white high density polyethylene flasks (Rainbow & Nature, Sydney, Australia) were put into cardboard boxes and kept under climatic conditions of the zone IV (30±2 ºC, 70±5 percent of relative humidity) for five years. Results: all parameters tested were within specifications throughout the whole study: appearance (white round tablets with intact surfaces), average weight (initial average weight±7,5 percent), total content of the six fatty alcohols (50±3.75 mg), disintegration time (<15 min), hardness (˃3 kg/cm2) and microbiological content (≤1 000 bacteria/g and ≤100 fungi/g, absence of E. coli,S. aureus, Pseudomonas, Salmonella and C. albicans). This result is consistent with the data of a previous stability study of Abexol® 50 mg tablets manufactured in Cuba and packed in blisters of polyvinyl chloride and aluminum. Conclusions: the results of the present study support that Abexol®50mg tablets packed in white high density polyethylene flasks and stored at the conditions of the climatic zone IV have a shelf life of 5 years(AU)

Introducción: los alcoholes de la cera de abejas constituyen una mezcla reproducible de seis alcoholes grasos primarios de 24 a 34 átomos de carbono purificados de la cera de Apis mellifera. Esta sustancia, con efectos antioxidantes y gastroprotectores, es empleada para la elaboración de las tabletas de Abexol® con dosis de 50 mg de alcoholes, forma farmacéutica terminada utilizada en los ensayos clínicos y en la práctica de rutina. Objetivo: determinar la estabilidad de las tabletas con 50 mg de alcoholes de cera de abejas (Abexol®) en frascos de polietileno de alta densidad. Métodos: muestras de tres lotes de tabletas de Abexol® con dosis de 50 mg envasadas en frascos de polietileno de alta densidad ( Rainbow & Nature, Sydney, Australia) se pusieron en cajas de cartón y se mantuvieron en las condiciones de la zona climática IV (30±2 ºC, 70±5 por ciento de humedad relativa) durante cinco años. Resultados: los parámetros evaluados se mantuvieron dentro de sus especificaciones de calidad durante todo el estudio: apariencia (tabletas blancas redondas con superficies enteras), peso promedio (inicial±7,5 por ciento), contenido total de los seis alcoholes grasos (50±3,75 mg), tiempo de desintegración (<15 min), dureza (˃3 kg/cm2) y contenido microbiológico (≤1 000 bacterias/g y ≤100 hongos/g, ausencia de E. coli, S. aureus, Pseudomonas, Salmonella y C. albicans). Este resultado es consistente con los datos de un estudio previo de estabilidad de tabletas de Abexol® con dosis de 50 mg, fabricadas en Cuba y envasadas en blísteres de cloruro de polivinilo y aluminio. Conclusiones: los resultados del presente estudio sustentan que las tabletas de Abexol® con dosis de 50 mg, envasadas en frascos de polietileno de alta densidad y almacenadas en las condiciones de la zona climática IV, presentan un tiempo de vida útil de cinco años(AU)

Análisis multivariable de la composición química de aceite esencial dehojas de Melaleuca quinquenervia que crece en Cuba / Multivariate analysis of the chemical composition of the essential oil from leaves of Melaleuca quinquenervia growing in Cuba

El aceite esencial de Melaleuca quinquenervia de la Ciénaga de Zapata, Cuba, obtenido a escala piloto con un rendimiento promedio de 0,8%, presentó una densidad relativa y un índice de refracción promedios de 0,9253g/mL y 1,4827 respectivamente. La determinación de su composición química por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas permitió identificar 42 compuestos, de los cuales 26 se sometieron al Análisis por Componentes Principales y al Análisis por Conglomerados. Dichos análisis permitieron la separación de las muestras en dos grupos con diferencias significativas (p<0,05) entre los contenidos promedios de sus principales constituyentes. A partir de dichos análisis se estableció la presencia de dos quimiotipos diferentes: uno con elevados contenidos de viridiflorol (33,8 por ciento), seguido por el 1,8-cineol (21,8 por ciento), y otro quimiotipo del tipo 1,8-cineol (30,0 por ciento) con un contenido relativamente elevado de viridiflorol (24,6 por ciento). Ambos quimiotipos presentaron concentraciones similares de los monoterpenos limoneno y αlfa-pineno.

The essential oil of Melaleuca quinquenervia from Ciénaga de Zapata, Cuba, obtained at pilot scale with average yield of 0.8%, showed average relative density and refraction index of 0.9253g/mL and 1.4827 respectively. It ́s chemical composition determination by gas chromatography coupled to Mass Spectrometry allow identifying 42 compounds, 26 of which were submitted to Principal Components Analysis and to Conglomerates Analysis. Such analyses allowed the separation of the samples into two groups with significant differences (p<0.05) between the average contents of its main components. From such analyses, it was established the presence of two different chemotypes: one with high contents of viridiflorol (33.8 percent), followed by 1,8-cineol (21.8 percent), and another chemotype rich in 1,8-cineol (30,0 percent) with a relatively high content in viridiflorol (24.6 percent). Both chemotypes showed similar concentrations of limonene and αlfa-pinene monoterpenes.

Estabilidad del D-004 ingrediente activo en frascos de polietileno de alta densidad / Stability of D-004 active ingredient in high density polyethylene flasks

Introducción: el D-004 es un ingrediente farmacéutico activo obtenido de los frutos de la palma real cubana (Roystonea regia), compuesto fundamentalmente por una mezcla de ácidos grasos libres entre 8 y 18 átomos de carbono, con potencialidades en el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna. Objetivo: determinar la vida útil del D‒004 en frascos de polietileno de alta densidad en las zonas climáticas IV y II. Métodos: muestras de tres lotes pilotos de D-004, envasadas en frascos blancos de polietileno de alta densidad y protegidos por cajas de cartón, se colocaron en las condiciones de las zonas climáticas IV (30 ºC/70 % HR) y II (25 ºC/60 % HR). Se determinaron las características organolépticas y los contenidos de material insaponificable, ácidos grasos y microbiológicos desde el tiempo inicial hasta los 36 meses, y se determinaron gráficamente los tiempos de vida útil en ambas zonas. Resultados: en las dos zonas climáticas el D‒004 cumplió con los parámetros de estabilidad evaluados durante los primeros 33 meses, pero a los 36 meses el contenido de ácidos fue inferior al límite establecido en varias de las muestras. Los análisis de regresión permitieron determinar tiempos de vida útil del D‒004 en las zonas IV y II. Conclusiones: se demostró que el ingrediente activo D‒004 que se obtuvo a escala piloto, se envasa en frascos de polietileno de alta densidad y protegido por un envase secundario (caja de cartón), presenta una vida útil de 30 y 32 meses en las zonas climáticas IV y II, respectivamente(AU)

Introduction: D­004 is a pharmaceutical active ingredient obtained from the Cuban royal palm fruits (Roystonea regia), mainly composed by a mixture of free fatty acids between 8 and 18 carbon atoms, potentially useful to treat benign prostatic hyperplasia. Objective: to determine the shelf life of D­004 in high-density polyethylene flasks in climatic zones IV and II. Methods: samples of three pilot batches of D­004, packed in white high-density polyethylene flasks and protected by cardboard boxes, were placed under conditions of the climatic zones IV (30 ºC/70 % RH) and II (25 ºC / 60 % RH). Organoleptic characteristics and unsaponifiable matter, fatty acids and microbiological contents were determined from the initial time till 36 months, and shelf lives were graphically determined in both zones. Results: in the two climatic zones, the D­004 fulfilled the tested stability parameters during the first 33 months, but at the month 36th, the acid content in several samples was lower than the set limit. The regression analyses allowed determining the shelf lives of D­004 in climatic zones IV and II. Conclusions: it was demonstrated that the active ingredient D­004, obtained at pilot scale, packed in high density polyethylene flasks and protected by a secondary container (cardboard box), exhibits a shelf life of 30 and 32 months in the climatic zones IV and II, respectively(AU)

Determinación de esteroles en la fracción insaponificable del aceite de los frutos de la palma real cubana (Roystonea regia) / Determination of sterols determination in unsaponifiable fraction from Cuban royal palm (Roystonea regia) fruit oil

Introducción: los esteroles han sido ampliamente estudiados por su importancia nutricional y farmacéutica. Sin embargo, para nuestro conocimiento, la composición de esteroles del aceite de los frutos de la palma real cubana (Roystonea regia) no ha sido determinada hasta el momento. Objetivos: determinar la composición de esteroles que pudieran estar presentes en la fracción insaponificable del aceite de R. regia mediante CG-EM. Métodos: muestras de dos lotes de aceite de R. regia fueron sometidas al procedimiento para la determinación de esteroles establecido por el del Instituto de Nutracéuticos de los EE.UU., el cual consiste, fundamentalmente, en una saponificación con disolución de KOH/EtOH y posterior extracción con n-hexano de las fracciones insaponificables. Las fracciones obtenidas fueron analizadas por CG-EM como derivados TMS e identificadas por comparación de sus espectros con los de patrones comerciales y los de la base de espectros Wiley. Para la cuantificación se utilizó el colestano como patrón interno. Resultados: en la fracción insaponificable del aceite de R. regia se encontró un contenido total de esteroles de 66,1por ciento; lo que representa un 0,14 por ciento del aceite. La fracción de esteroles, estuvo compuesta principalmente por â -sitosterol (51,2 por ciento), estigmasterol (9,6 porciento), campesterol (9,2 por ciento), 24-metilen-cicloartanol (9,2 porciento), Ã5-avenasterol (8,9 por ciento), cicloartanol (7,5 por ciento); además de otros componentes minoritarios como cicloartenol, ã-sitosterol y colesterol. Conclusiones: se identificaron y se cuantificaron mediante CG-EM los esteroles de la fracción insaponificable del aceite de R. regia, en la cual el â-sitosterol resultó el componente mayoritario. Estos resultados son una contribución al estudio de la composición química de dicho aceite y pudieran avalar su posible utilidad nutricional y seguridad

Introduction: sterols have been widely studied because of their pharmaceutical and nutritional importance. However, to our knowledge, the sterol composition of the oil from the Cuban Royal Palm fruits (Roystonea regia (Kunth) F. Cook), has not been yet identified Objectives: to determine by GC-MS the sterols that could be present in the unsaponifiable fraction of R. regia oil. Methods: samples of two batches of R. regia oil were subjected to the established procedure of the US Institute for Nutraceutical Advancement to determine sterols, which mainly consists of saponification with KOH/EtOH solution and a subsequent extraction of the unsaponifiable fractions by using n-hexane. These fractions were analyzed by GC-MS as TMS derivatives and they were identified by comparing their spectra with those of commercial available standards and with spectra of the Wiley mass spectrum library. Quantification was made by using cholestane as internal standard. Results: a total sterol content of 66.1percent was found in the unsaponifiable fraction of R. regia oil, which represents 0.14 percent from the oil. The sterol fraction was mainly composed of â-sitosterol (51.2 percent), stigmasterol (9.6 percent), campesterol (9.2 percent), 24-methylen-cycloartanol (9.2 percent), Ã5-avenasterol (8.9 percent) and cycloartanol (7.5 percent) in addition to other minor components such as cycloartenol, ?-sitosterol, and cholesterol. Conclusions: sterol compounds were identified and quantified by GC-MS in the unsaponifiable fraction of R. regia oil, in which the â-sitosterol was the predominant component. These results are a contribution to the chemical composition study of such oil and could support its possible nutritional usefulness and safety