Transmisión congénita de Trypanosoma cruzi en ratas Wistar de segunda generación / Congenital transmission of Trypanosoma cruzi in second generation Wistar rats

Se presentan los resultados de un estudio experimental sobre la transmisión congénita de Trypanosoma cruzi en crías de ratas albinas (Rattus norvegicus), cepa Wistar de segunda generación. El curso de la infección chagásica fue evaluado en las ratas infectadas inicialmente (RII) inyectadas con las formas metacíclicas del parásito, en las crías de la primera (C1ªG) y segunda generación (C2ªG), mediante pruebas de diagnóstico seroparasitológicas y molecular (PCR). En las RII se demostró infección aguda caracterizada por parasitemias patentes entre los 12 y 45 días post-inoculación (pi), e incremento en la respuesta inmune humoral con títulos desde 1:64 y 1:2048; en la fase crónica se evidencio ausencia de parasitemias y mantenimiento de una moderada respuesta humoral en el 100% de las madres. Las C1ªG no presentaron tripomastigotes en la sangre circulante, la prueba de IFI, reveló seropositividad apreciable en el 75% de los sueros. En las C2ªG, los exámenes directos de sangre y el hemocultivo, resultaron negativos; los xenodiagnósticos mostraron un 18,2% de positividad. Las pruebas serológicas empleadas (IFI y ELISA) detectaron un 31,8% y 34,1% anticuerpos circulantes anti-T. cruzi. La PCR aplicada a los sueros, presentó un bajo porcentaje de muestras positivas (6,8%) y en los tejidos (corazón y músculo esquelético) se observó una alta positividad de 54,5% y 45,4%, respectivamente. La presencia de formas flageladas en la sangre, la persistencia de la serología positiva por anticuerpos humorales transferidos vía materna y la permanencia de restos de ADN de T. cruzi en sueros y tejidos en un número importante de crías, confirma la infección congénita a su progenie, en segunda generación. Estos resultados son de gran importancia para una mejor comprensión de la epidemiología de la enfermedad de Chagas congénita

The results of the experimental study concerning the congenital transmission of Trypanosoma cruzi in second generation strain Wistar albino rats are presented. The course of the Chagas infection was evaluated in rats initially infected with the metacyclic forms of the parasite (RII) in first (C1stG) and second (C2ndG) generation offspring using parasitological, serological and molecular (PCR) diagnostic tests. In the RII, an acute infection characterized by patent parasitemias between 12 and 45 days post-inoculation and an increase in the humoral immune response with titers of 1:64 and 1:2048 in the chronic phase demonstrated the absence of parasitemia and maintenance of a moderate humoral response in 100% of the mothers. The C1stG did not show tripomastigotes in the blood circulation and the IIF test showed considerable seropositive in 75% of the sera. In C2ndG, direct blood and hemoculture exams performed were negative, while 18.2% of the xenodiagnosis were positive. The serological tests used (IIF and ELISA) detected 31.8% and 34.1% anti-T. cruzi circulating antibodies. The PCR applied to the serum presented a low percentage of positive (6.8%) samples and in tissues (heart and skeletal muscle) high positives of 54.5% and 45.4% respectively were observed. The presence of flagellated forms in the blood, the persistence of serological positive for humoral antibodies transferred by the mother and the permanence of remaining DNA of the T. cruzi in serum and tissues in a significant number of offspring confirm the congenital infection to their offspring in the second generation. These results are of great importance for the better understanding of the epidemiology of Chagas disease

Inducción de placas ateromatosas en ratas Wistar crónicamente infectadas con Trypanosoma cruzi: alimentadas con dieta rica en grasas / Induction of atheromatous plaques in Wistar rats chronically infected with Trypanosoma cruzi: fed high fat diet

En el presente trabajo se investiga la inducción de placas ateromatosas en ratas albinas machos, cepa Wistar (Rattus norvegicus) crónicamente infectadas con Trypanosoma cruzi y alimentadas ad libitum con una dieta rica en grasas de origen vegetal, durante tres meses. La infección crónica evidenciada por pruebas sero-parasitológicas, reveló presenciade anticuerpos IgG anti- T. cruzi y ausencia de parasitemiaspatentes. La dieta rica en grasas produjo en las ratas infectadas (A) y sanas (C) un aumento significativo en el peso (P<0,05), en comparación con las ratas controles (B) y sanas (D) sometidas a la dieta normal. El estudio histopatológicode secciones de la arteria aorta de las ratas del grupo A (infectadas/dieta grasa), mostró abundantes depósitoslipídicos, procesos inflamatorios (vasculitis) y placas ateromatosas en formación. En las secciones de corazón y músculo esquelético se evidenció miocarditis y miositis con características de cronicidad sin parasitismo tisular. Las pruebas inmunohistoquímicas aplicadas a los cortes de arteria,corazón y músculo esquelético de las ratas infectadas A (infectadas/dieta-grasa) y B (infectadas/dieta-normal), mostraron abundantes depósitos antigénicos, lo que indica persistencia de antígenos parasitarios. En conclusión, las ratasinfectadas con T. cruzi alimentadas con la dieta rica en grasas, tienen una mayor propección a desarrollar placas ateromatosas.Los resultados demostraron que una dieta hiperlipídicaes un factor de riesgo para el desarrollo de enfermedadateromatosa en individuos con enfermedad de Chagas

This work is focused on the induction of atheromatous plaques in male albino rats (Rattus norvegicus), Wistar, chronically infected with Trypanosoma cruzi and fed ad libitum with diet rich in fats of vegetal origin, during three months. The chronic infection detected by serological and parasitological assays, revealed the presence of antibodies IgG anti- T. cruzi and the absence of patents parasitemias. The diet rich in fats produced in the group of infected rats (A) and the group of healthy rats (C) a significant increase in the weight (P<0,05), in comparison with the control group of infected rats (B) and the group of healthy rats (D), fed with a normal diet. The histopathological study of sections of the aorta arteryof the rats of the group (A) (infected/diet fat), showed abundants lipid deposits, inflammatory processes (vasculitis) and atheromatous plaques in development. The sections of the heart and skeletal muscle showed pictures of a myocarditis and myositis with features of chronic tissue without parasitism. The immunohistochemestry assays applied to the cuts of artery, heart and skeletal muscle of the infected rats A (diet/fat) and B (normal/diet), showed abundants antigen deposits. In conclusion, the rats chronically infected with T. cruzi and fed with a diet rich in fats, have a main propensity to develop atheromatous plaques. The results showed that a hyperlipidic diet is a risk factor for the development of atheromatous disease in individuals with Chagas`disease

Efectos de la ingestión de una dieta con alto contenido en grasas en ratas Wistar crónicamente infectadas con Trypanosoma cruzi / The effects of ingesting a high-fat diet on Wistar rats chronically infected with Trypanosoma cruzi

Se investigan los efectos de la ingestión de una dieta con alto contenido en grasas en ratas albinas (R. norvegicus) crónicamente infectadas con Trypanosoma cruzi “Planalto”, mediante pruebas de diagnóstico sero-parasitológicas, cuantificación del Índice de Masa Corporal (IMC), detección de la Proteína C Reactiva (PCR), evaluación de los niveles de lípidos plasmáticos (colesterol total, lipoproteínas de alta densidad - HDL y triglicéridos) y presencia de depósitos lipídicos en la arteria aorta. Durante el curso de la infección chagásica, se detectaron parasitemias patentes entre los 10 y 35 días pi, con un máximo promedio de 36,68±2 trips./mm³ de sangre a los 25 días. A los 90 días pi, se evidenció ausencia de parasitemias y presencia de anticuerpos IgG anti- T. cruzi. Las ratas chagásicas (A) y las sanas (C) sometidas a la dieta rica en grasas, mostraron: diferencias significativas (p<0,05) en el IMC, en comparación con los grupos de ratas sometidas a la dieta normal (B: infectadas y D: sanas); discreta reacción de la PCR en los sueros de las ratas infectadas B; aumento significativo en los niveles de colesterol total, colesterol - HDL y triglicéridos en los grupos A y C en comparación con los grupos controles B y D (p<0,05). El estudio histológico de las arterias de ratas del grupo A, reveló importantes depósitos lipídicos ubicados en la capa muscular próximos a las capas íntima y adventicia. Estos resultados sugieren que el incremento en los niveles de lípidos plasmáticos estimulado por el proceso infeccioso, son los principales mecanismos por el cual T. cruzi podría estar influyendo en la iniciación o progresión de placas ateromatosas

The effects of ingesting a high fat diet on albino rats (R. norvegicus) chronically infected with Trypanosome cruzi “Planalto” were researched using serological and parasitological diagnostic tests, body mass index (BMI) quantification, detection of C-Protein Reactive (CPR), evaluation of the plasmatic lipid levels (total cholesterol, high density lipoproteins HDL and triglycerides) and the presence of lipidic deposits in the aorta artery. During the course of the chagasic infection, patent parasitemias were detected between the ages of 10 and 35 days post-infection (pi) with a maximum average of 36.68 ± 2 tryps/mm³ of blood at 25 days. At 90 days pi, the absence of parasitemias and the presence of IgG anti T. cruzi antibodies were in evidence. The chagasic rats in chronic phase (A) and the healthy controls (C) submitted to a high fat diet showed: 1. Significant variations (p0.05) in the BMI, in comparison with the rat groups receiving a normal diet (B: infected and D: healthy rats); 2. A discrete CRP reaction in the serum of infected rats B; 3. A significant increase was shown in the total cholesterol levels, HDL cholesterol and triglycerides for groups A and C in comparison with control groups B and D (p0.05). The histological study of rat arteries in group A revealed important lipid deposits located in the muscular layer near the intimal and adventitial layer. These results suggest that the increase in plasmatic lipid levels stimulated by the infectious process are the main mechanisms through which T. cruzi could be influencing the initiation or the progression of atheromatous plaque

Efectos de la infección chagásica aguda en ratas wistar gestantes / Effects of acute chagasic infection on gestating wistar rats

Se investiga en ratas albinas (Rattus norvegicus), cepa Wistar, inoculadas por vía intraperitoneal con 5x10(4) tripomastigotes sanguícolas de Trypanosoma cruzi, y preñadas 10 días después de la inoculación, los efectos de la infección aguda sobre la gestación, utilizando diferentes pruebas de diagnóstico. Los resultados revelaron diferencias significativas (P < 0,01) entre los valores de parasitemia promedio de los grupos de ratas vírgenes B y ratas gestantes D, durante la primera y segunda semana de gestación, registrándose a los 12 días de la gravidez niveles de parasitemias de hasta 55 ± 3 y 27 ± 9 trips/mm³ de sangre. Anticuerpos anti-T. cruzi fueron detectados en los sueros de las ratas infectadas, mostrando diferencias significativas (P < 0,05) cuando se compara la interacción grupo-tiempo. Presencia de formas flageladas de T. cruzi en los tubos de cultivo inoculados con líquido amniótico de 3 (50%) de 6 ratas sacrificadas a término de gestación. Instauración de una miocarditis y miositis aguda de variable intensidad acompañada de nidos de amastigotes de T. cruzi a nivel del corazón, músculo esquelético y fibras musculares lisas del útero grávido. Las placentas mostraron una placentitis moderada sin parasitismo a nivel del estroma velloso, placas coriónica y desidual. Las glándulas mamarias presentaron un infiltrado celular discreto sin parasitosis en los alveólos, conductos excretores y tejido conectivo inter e intralobulillar. Las células alveolares exhibieron un citoplasma basofílico y abundante secreción. El análisis morfométrico, reveló diferencias significativas (P < 0,01) en el tamaño de fetos y placentas obtenidos de ratas infectadas D y controles sanas C. La infección chagásica aguda produjo en la rata gestante alteraciones parasitológicas, inmunológicas, histopatológicas y morfométricas importantes, las cuales fueron potenciadas por los efectos paralelos inducidos por la gravidez; la presencia de formas flageladas de T. ...

White Wistar rats (Rattus norvegicus) were intraperitoneally inoculated with 5x10(4) blood form trypomastigotes of Trypanosoma cruzi and impregnated 10 days after inoculation. The effects of acute infection on gestation were examined using different diagnostic tests. Results showed significant differences (P < 0.01) level in parasitemia values between group B virgin rats and group D gestating rats, during the first and second week, with levels of parasitemias 12 days after impregnation of 55 ± 3 and 27 ± 9 tryps/mm³. Anti-T. cruzi antibodies were found in the serum of infected rats, showing differences (P < 0.05) level comparing group-time interaction. Flagellate forms of T. cruzi were present in culture tubes inoculated with amniotic fluid from 3 (50%) of 6 rats sacrificed at the end of gestation. There was also myocarditis and acute myositis of varying intensity accompanied by many nest of T. cruzi amastigotes around the heart, in skeletal muscle and smooth muscle fiber in the gravid uterus. There was moderate placentitis without parasitism in the villous stroma and chorionic and decidual plates. Mammary glands showed discrete cellular infiltrate without parasitosis in the alveoli, excretory ducts and in inter and intralobular connective tissue. Alveolar cells showed basophilic cytoplasm and abundant secretion. Morphometric analysis of fetuses and placenta from infected rats D and healthy controls C showed significant differences (P < 0.01) level in size and weight. In conclusion, the gestating rats acute chagasic infection produces important parasitological, immunological, histopathological and morphometric changes: these are exacerbated by the concurrent effects of pregnancy. Flagellate forms of T. cruzi in the amniotic liquid are evidence of congenital fetal infection. T. cruzi did not interfere with gestation and at term of pregnancy the fetuses were apparently normal.

Investigaciones sobre la transmisión vertical de Trypanosoma cruzi en ratas Wistar crónicamente infectadas / Research on vertical transmission of Trypanosoma cruzi in chronocally infected Wistar rats

Se presentan los resultados de un estudio experimental sobre la posible transmisión vertical de Trypanosoma cruzi en ratas albinas (Rattus norvegicus) cepa Wistar crónicamente infectadas. El curso de la infección fue evaluado antes del apareamiento, durante la gestación y después del parto mediante pruebas de diagnóstico parasitológico, inmunológico e histopatológico. Como controles se utilizaron ratas vírgenes infectadas y sanas gestantes. Los exámenes directos en muestras de sangre, hemocultivos y xenodiagnósticos realizados a las madres y a las crías, no presentaron parasitemias patentes y/o subpatentes. Exámenes serológicos realizados con la IFI y ELISA a las ratas vírgenes infectadas (A), gestantes infectadas (B) y a las crías, revelaron anticuerpos específicos anti-T. cruzi en el 100% de las madres infectadas, 26,2 y 44,6% de las crías y 41,6 y 83,3% de las crías sanas que fueron alimentadas sobre madres infectadas. El estudio minucioso de las muestras frescas y de cultivo de líquido amniótico, no mostró formas flageladas de T. cruzi. El estudio histopatológico reveló discreta miocarditis, miositis y vellositis con características de cronicidad, acompañada de nidos de amastigotes de T. cruzi a nivel del músculo cardíaco, esquelético y en el estroma de una placenta; moderado infiltrado inflamatorio sin parasitismo en útero, cordón umbilical y glándulas mamarias. La persistencia de nidos de amastigotes de T. cruzi en el corazón, músculo esquelético y en una placenta de ratas con infección chagásica crónica, sugiere la posibilidad de infección fetal. La patogenicidad de la cepa, formas del parásito utilizado y el tamaño del inóculo, pudieran ser factores que inciden en las variaciones observadas en la transmisión vertical de T. cruzi.

Presencia de Trypanosoma cruzi en tejidos de ratas wistar infectadas experimentalmente y sus fetos / Presnece of Tryoanosoma cruzi in tissues of experimentally infected Wistar rats and their fetuses

Este estudio fue realizado con un grupo de ratas juveniles hembras (Rattus norvegicus) cepa Wistar con 20 días de nacidas y 250 grs. de peso. Cada rata fue inoculada inyectándole por vía intraperitoneal 0.1 mL de la suspensión sanguínea con 1x10 5 tripomastigotes sanguícolas de Trypanosoma cruzi (cepa I/PAS/VE/00/PLANALTO). Los parásitos fueron aislados de Panstrongylus geniculatus, naturalmente infectado y capturado en un área urbana del valle de Caracas, Venezuela y mantenidos en ratones NMRI. A los 10 días post-infección a estas ratas (GI) les fue determinado el ciclo estral y luego fueron apareadas con los machos en una relación 2 hembras/1 macho en cada jaula. Grupos de ratas vírgenes inoculadas con T. cruzi (GII), ratas sanas (GIII) y ratas preñadas (GIV) fueron usadas como controles. La infección por T. cruzi en las ratas de GI reveló los más altos niveles de parasitemias patentes con 12,2 ±1.1 T.cruzi /mm 3 de sangre a los 18,24 y 34 días post-infección con 6,12 y 20 días de gestación respectivamente, al compararla con el GII. Los títulos de anticuerpos específicos anti-T. cruzi fueron mayores en el grupo de ratas gestantes e infectadas con T. cruzi, en comparación con las vírgenes infectadas, representados por 1:512 y 1:2048 a los 19 y 20 días post-infección respectivamente. El 33% de las muestras de líquido amniótico de las ratas del GI, desarrollaron formas flageladas de T. cruzi en el medio de cultivo NNN. El estudio histopatológico de los cortes de 6 µ de espesor coloreados con hematoxilina y eosina del corazón fetal (CF) obtenidos de 2 fetos de ratas del GI con 34 días de infección, reveló nidos de amastigotes en el tejido cardíaco. En las placentas de las ratas del GI se observó una placentitis caracterizada por intenso infiltrado inflamatorio de células mononucleares y polimorfonucleares con predominio de neutró filos.