Ultrastructural analysis and residual DNA evaluation of rabbit vein scaffold

Abstract Purpose: To investigate the ultrastructural characteristics and analysis of residual DNA in scaffold models, produced with decellularized vena cava in an experimental model with rabbits. Methods: Three groups were created for ultrastructural and residual DNA analysis: group 1 - control, consisting of samples of vena cava in natura; group 2 - SD, consisting of vein fragments submitted to 2% sodium deoxycholate decellularization by shaking (160rpm - Shaker News Brunswick Scientific®) for 1 hour at controlled temperature shaker at 37°C; group 3 - SDS, consisting of vein fragments submitted to 1% sodium dodecyl sulfate decellularization under the same previous condition, for 2 hours. Results: The ultrastructural matrix of the blood vessel maintained its vintegrity after either decellularization models. The results of the two quantification methods demonstrated a significant decrease in the DNA content of the decellularized vena cava samples as compared to the control samples and, differed statistically from each other, p <0.05. Conclusion: The 2% DS protocol for vein decellularization, in this experimental model, was considered the best protocol because it presented less amount of residual DNA without causing substantial destruction of the extracellular matrix.

Light-emitting diode effects on combined decellularization of tracheae. A novel approach to obtain biological scaffolds

PURPOSE: To obtain a decellularized tracheal scaffold associating traditional approaches with the novel light-emitting diode (LED) proposal. METHODS: This study was performed with New Zealand adult rabbits weighing 3.0 - 4.0 kg. Different protocols (22) were used combining physical (agitation and LED irradiation), chemical (SDS and Triton X-100 detergents), and enzymatic methods (DNase and RNase). RESULTS: Generally, the cells surrounding soft tissues were successfully removed, but none protocol removed cells from the tracheal cartilage. However, longer protocols were more effective. The cost-benefits relation of the enzymatic processes was not favorable. It was possible to find out that the cartilaginous tissue submitted to the irradiation with LED 630nm and 475 nm showed an increased number of gaps without cells, but several cells were observed to be still present. CONCLUSION: The light-emitting diode is a promising tool for decellularization of soft tissues. .

Expressão diferencial de microRNAs no câncer de próstata / Differential microRNAs expression in prostate cancer / Expresión diferencial de microARNs en cáncer de próstata

Introdução: MicroRNAs são pequenos RNAs não codificantes, que atuam como reguladores pós-transcricionais deRNAs mensageiros-alvo. Estudos recentes demonstram que a expressão diferencial de alguns microRNAs associa-se com o desenvolvimento, invasão e metástase de vários tipos de câncer, incluindo o câncer de próstata. Os avanços nas técnicas de detecção e descoberta de novos marcadores moleculares são ferramentas importantes para o diagnósticoprecoce e tratamento individual dos pacientes. Objetivo: Realizar revisão científica sobre os principais microRNAsalterados no câncer de próstata. Método: O PubMed foi a base de dados escolhida para a pesquisa e as palavras-chave utilizadas foram microRNA e câncer de próstata. A descoberta e o estudo dos microRNAs envolvidos na progressão do câncer são temas científicos recentes e, das 260 publicações encontradas, 25 foram selecionadas para compor estarevisão. Resultados: Muitos microRNAs são classificados como promotores da sobrevivência celular e do crescimentotumoral. Os trabalhos selecionados para esta revisão descrevem expressão diferenciada de microRNAs em amostrasde tumores prostáticos e em células tumorais prostáticas estudadas in vitro. A alteração de microRNAs no plasma, naurina e no tecido tumoral mostrou-se uma ferramenta interessante para distinguir pacientes com câncer de próstata de pacientes saudáveis, classificando essas moléculas como biomarcadores promissores. Conclusão: A excelente qualidade das publicações evidencia a importância da regulação pós-transcricional exercida pelos microRNAs na progressão do câncer de próstata. Apesar de o tema ser recente, técnicas moleculares de última geração estão sendo empregadas para a descoberta de novos microRNAs e para a caracterização da função daqueles já existentes

Gel de plaquetas: arcabouço 3D para cultura celular / Platelet gel: 3D scaffold for cell culture

INTRODUÇÃO: O reparo tissular é o objetivo final da cirurgia. A cultura celular requer arcabouço mecânico que dê suporte ao crescimento celular e difusão dos nutrientes. O uso do plasma rico em plaquetas (PRP) como um arcabouço 3D possui diversas vantagens: é material biológico, de fácil absorção pós-transplante, rico em fatores de crescimento, em especial PDGF- ββ e TGF-β que estimula síntese de matriz extracelular na cartilagem. OBJETIVO: Desenvolver arcabouço 3D à base de PRP. MATERIAIS E MÉTODOS: Duas formas foram idealizadas: Sphere e Carpet. Condições estéreis foram utilizadas. O gel de plaquetas permaneceu em cultura celular, observado diariamente em microscópio invertido. RESULTADOS: Ambos arcabouços obtiveram sucesso, com aspectos positivos e negativos. DISCUSSÃO: A forma Sphere não aderiu ao plástico. Observou-se retração do gel e investigação ao microscópio dificultada devido às áreas opacas no campo visual. A forma Carpet não aderiu ao plástico e apresentou-se translúcida. O tempo de estudo foi de 20 dias. CONCLUSÕES: A produção de um arcabouço 3D PRP foi um sucesso, e trata-se de uma alternativa que necessita ser mais utilizado e investigado para que se consolide em uma rota eficiente e confiável na tecnologia de engenharia tissular, particularmente em cultura de tecido cartilaginoso.

INTRODUCTION: Tissue repair has been the ultimate goal of surgery. Cell culture requires a mechanical scaffold that supports cell growth and nutrient diffusion. Using platelet-rich plasma (PRP) as a 3D scaffold presents various advantages: it is a biological material, easily absorbed after transplantation, rich in growth factors, in particular, PDGF-ββ and TGF-β that stimulate extracellular matrix synthesis in cartilage culture. OBJECTIVE: To develop a PRP 3D scaffold. Material and METHODS: Two forms were idealized: Sphere and Carpet. Sterile conditions were used. The platelet gel remained in culture conditions, observed at an inverted microscope on a daily basis. RESULTS: Both forms were successful because they produced a 3D environment that supports cell growth, with positive and negative features. DISCUSSION: The Sphere form didn't attach to the plate. Gel retraction was observed and the investigation at the microscope was difficult, because of the opaque areas in the optical field. The Carpet form didn't retract, and didn't produce opaque areas. Follow-up time was 20 days. CONCLUSIONS: The production of a PRP 3D scaffold was successful, and this is an alternative requiring further investigation in order to establish an efficient and reliable route in tissue engineering technology, particularly in cartilage tissue culture.

Cultura de condrócitos em arcabouço tridimensional: hidrogel de alginato / Chondrocyte cultures in tridimensional scaffold: alginate hydrogel

OBJETIVOS: O presente estudo teve como objetivo cultivar condrócitos retirados da articulação do joelho de coelhos encapsulados em hidrogel de alginato (HA) e caracterizar a produção de matriz extracelular (ECM). MÉTODOS: A cartilagem articular foi removida do joelho de coelhos, com três a seis meses, fragmentada em pedaços de 1mm e submetida à digestão enzimática. Uma concentração de 1x106 céls/mL foram ressuspensas em uma solução de alginato de sódio a 1,5 por cento (w/v), em seguida fez-se o processo de gelatinização em CaCl2 (102 mM), permitindo a formação do HA e cultivo em meio DMEM-F12 durante quatro semanas. A distribuição das células e a ECM foram acessadas através das secções histológicas coradas com e azul de toluidina hematoxilina e eosina (HE). RESULTADOS: Houve um aumento no número e na viabilidade dos condrócitos durante as quatro semanas de cultura. Através das análises histológicas dos HAs corados com azul de toluidina e HE foi possível observar a distribuição definida dos condrócitos no hidrogel, assemelhando-se a grupos isógenos e formação de matriz territorial. CONCLUSÃO: Este estudo demonstrou a eficiência do HA como arcabouço para ser usado na cultura de condrócitos, constituindo uma alternativa no reparo de lesões na cartilagem articular.

OBJECTIVES: The aim of this study was to culture chondrocytes from knee joint cartilage of rabbits encapsulated in alginate hydrogel (HA) and to characterize the production of extracelular matrix (ECM). METHODS: Joint cartilage was obtained from rabbits' knees, three to six months old, fragmented into 1-mm pieces and submitted to enzymatic digestion. A concentration of 1x106 cells/mL were re-suspended into a 1.5 percent (w/v) sodium alginate solution, followed by gel formation process with CaCl2 (102 mM), allowing HA to build for culturing it into a DMEM-F12 medium for four weeks. The distribution of cells and ECM were assessed from histological slices stained toluidine blue and hematoxyline-eosin (HE). RESULTS: There was an increase of the number and viability of the chondrocytes during the four weeks of culture. By assessing the histological sections stained with toluidine blue and HE, we could note the definitive distribution of chondrocytes in the hydrogel, similarly to isogenous groups and territorial matrix formation. CONCLUSION: In this study, the alginate was shown to be an effective scaffold for use in chondrocytes culture, constituting an alternative for repairing joint cartilage defects.