RESUMO
La infección por Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es causa de diarrea con o sin sangre, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. El objetivo de este trabajo fue validar una técnica de PCR múltiple para el diagnóstico de STEC basado en la detección de los genes stx1, stx2 y rfbO157. La validación de la técnica se realizó en dos laboratorios independientes, en forma paralela. Se determinó rango de trabajo, selectividad y robustez. Se evaluó el desempeño de la técnica al combinar distintas concentraciones de dos cepas con diferentes factores de virulencia. El rango de trabajo dependió de la cepa analizada, los valores máximos y mínimos fueron 6,6 x 107 y 1,0 x 104 UFC/50 µl. El límite de detección fue de 1,0 x 104 UFC/50 µl y el límite de corte de 1,0 x 105 UFC/50 µl. La robustez fue óptima al modificar diferentes variables. Se obtuvo 100% de inclusividad, exclusividad, precisión analítica, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo. No se observó interferencia al combinar distintas concentraciones de los factores de virulencia blanco de la reacción. La técnica validada es una alternativa apropiada para la detección y confirmación de STEC O157 y no-O157 a partir de cultivos bacterianos.
Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) cause non-bloody or bloody diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS) in humans. The aim of the present study was to validate a multiplex PCR for the STEC diagnosis based on the detection of stx1, stx2 and rfbO157 genes. The multiplex PCR validation was carried out in two independent laboratories in a parallel way. Work range, selectivity and robustness were established. The PCR performance was evaluated using different concentrations of two STEC strains harboring different target genes. The work range depended on the strain analyzed, the maximum and the minimum values were 6.6 x 107 and 1.0 x 104 CFU/50 µl. The detection limit was 1.0 x 104 CFU/50 µl and the cut limit 1.0 x 105 CFU/50 ml. A good robustness was observed when different variables were introduced. Inclusivity, exclusivity, positive predictivity, negative predictivity and analytical accuracy were of 100%. Interference was not shown when different concentrations of STEC strains, carrying different genes, were used. The validated technique is an appropriate alternative for detection and confirmation of STEC O157 and non-O157 strains from bacterial cultures.
Assuntos
Escherichia coli/genética , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Toxinas Shiga/genética , Fracionamento Celular/instrumentação , Detergentes , DNA Bacteriano/genética , DNA Bacteriano/isolamento & purificação , Escherichia coli/química , Escherichia coli/classificação , Polietilenoglicóis , Especificidade da Espécie , Toxina Shiga I/genética , /genéticaRESUMO
Várias plantas nativas do bioma Cerrado são utilizadas como plantas medicinais. Dentre elas, o pequi possuí ação moluscicida utilizada no combate a esquistossomose. Objetivamos neste trabalho a verificação da toxicidade de frações de pequi sobre outros organismos aquáticos, antes da utilização destas em mananciais. Para isso, analisamos alterações no índice mitótico das células epiteliais das brânquias de Guaru (Poecilia vivipara) expostas às frações da folha e da casca do caule de pequi extraídas com acetato de etila. Constatamos que nenhuma das frações se mostrou letal aos peixes. Os animais expostos à fração acetato de etila da folha não apresentaram modificações significativas no índice mitótico em relação ao grupo controle, mas os animais expostos à fração acetato de etila da casca do caule apresentaram aumento do índice mitótico das células epiteliais em duas regiões dos filamentos branquiais. Desta forma, a fração acetato de etila da folha poderia ser utilizada como moluscicida em mananciais, enquanto que a fração acetato de etila da casca do caule necessitaria passar por outros testes mais específicos.