Syagrus flexuosa (Mart.) Becc. (Arecaceae) seedling recruitment at the edge and interior of Cerrado remnants / Recrutamento de plântulas em Syagrus flexuosa (Mart.) Becc. (Arecaceae), na borda e interior de remanescentes de Cerrado

The edge effect has impacts on seed and seedling survival due to modifications in biotic and abiotic factors. Often, large-seeded tree species lost seed vectors in the forest edge due to the rarity or absence of large frugivores at this habitat type. In this study, I compared the seedling abundance and distribution of the palm Syagrus flexuosa between edges and interiors of three large Cerrado remnants. In every remnant, the number of seedlings around parent palms in the edge was smaller than around palm individuals located in the Cerrado interior. Moreover, the distribution of seedlings around parent palms differed between edges and interiors. In the edges, most seedlings were found under parent crowns, while in the interiors, the contrary occurred. The high concentration of seedlings under parent palms suggests a decrease of seed dispersal at the edges. Because S. flexuosa is a widely distributed palm that serves as an important resource for several animals along Cerrado habitats, changes on the regeneration process of this palm due to edge effects can further impact frugivore populations. Therefore, the decline of seedling establishment along forest edges implies changes in the Cerrado regeneration dynamics, which may compromise the persistence of ecological processes and animal communities.

O efeito de borda tem impactos severos na sobrevivência de sementes e plântulas devido a modificações dos fatores bióticos e abióticos. Frequentemente, espécies arbóreas com sementes grandes perdem seus dispersores na borda da floresta devido à raridade ou ausência de grandes frugívoros neste tipo de habitat. Neste estudo, comparei a abundância e distribuição de plântulas de S. flexuosa entre bordas e interiores de três grandes remanescentes de Cerrado. Em cada remanescente, o número de plântulas ao redor das palmeiras-mãe, na borda, era menor do que ao redor dos indivíduos no interior do Cerrado. Nas bordas, a maioria das plântulas foi encontrada junto às plantas mãe, enquanto no interior ocorreu o contrário. A alta concentração de plântulas sob as plantas adultas sugere diminuição da dispersão de sementes nas bordas. Como S. flexuosa é uma palmeira amplamente distribuída que serve como um recurso importante para vários animais nos habitats do Cerrado, mudanças no processo de regeneração dessa palmeira devido aos efeitos de borda podem impactar ainda mais as populações de frugívoros. Portanto, o declínio do estabelecimento de plântulas ao longo das bordas do Cerrado implica em mudanças na dinâmica de regeneração do Cerrado, o que pode comprometer a persistência de processos ecológicos e comunidades animais.

Composition and spatio-temporal dynamics of aquatic bird community in humid areas of Alto Parana Atlantic Forest

Abstract The northwestern portion of the Upper Paraná Atlantic Forest ecoregion is one of the most disturbed and fragmented areas in the Atlantic Forest, and little is known about the local avifauna. In this study, we have described the composition and diversity of the aquatic avifauna of this region and analyzed the patterns of similarity with respect to the seasonal as well as spatial distribution. We used the line transect sampling technique in six distinct humid areas (including lentic and lotic water bodies) during the dry and rainy seasons of 2012 and 2013. A total of 52 species of waterfowl were recorded. The species richness of the studied areas was surprisingly distinct; only seven waterfowl species, namely Cairina moschata (Linnaeus, 1758), Tigrisoma lineatum (Boddaert, 1783), Rosthramus sociabilis (Vieillot, 1817), Aramus guarauna (Linnaeus, 1766), Vanellus chilensis (Molina, 1782), Jacana jacana (Linnaeus, 1766), and Arundinicola leucocephala (Linnaeus, 1764), were common to these six studied areas. This indicated that the other bird species that were observed might be habitat selective. Moreover, the analysis of the composition of birds in the two seasons (dry and rainy) combined with their spatial distributions showed significant dissimilarities between the areas with lotic (river and constructed wetland) and lentic (lagoons) characteristics. Nevertheless, despite the small extent and low total richness of the entire study area, it was found to be home to 1/3 of all freshwater aquatic birds documented in the state of São Paulo, with the record of 5 migratory species and 11 new species added to the northwest of the state. The heterogeneity of local aquatic environments, habitat selection combined with seasonality, and the absence of other humid locations in the surroundings can explain the diversity and distribution of these birds in the water bodies of this uninvestigated Atlantic Forest ecoregion.

Resumo A porção noroeste da ecorregião Floresta Atlântica do Alto Paraná é uma das mais alteradas e fragmentadas da Mata Atlântica, da qual pouco se sabe sobre a avifauna local. Nosso objetivo foi descrever a diversidade e composição da avifauna aquática, bem como analisar os padrões de similaridade quanto a distribuição temporal e espacial destas aves nesta ecorregião. Utilizamos a transecção linear para amostragem em seis áreas úmidas (corpos dágua lênticos e lóticos), nos períodos de seca e chuva entre 2012 e 2013. Registramos 52 espécies de aves aquáticas e as riquezas das áreas mostraram-se distintas, pois apenas Cairina moschata (Linnaeus, 1758), Tigrisoma lineatum (Boddaert, 1783), Rosthramus sociabilis (Vieillot, 1817), Aramus guarauna (Linnaeus, 1766), Vanellus chilensis (Molina, 1782), Jacana jacana (Linnaeus, 1766), and Arundinicola leucocephala (Linnaeus, 1764) foram comuns às seis áreas, o que indica seleção de habitat. Quando analisada a composição das aves nos dois períodos aliada à distribuição espacial, encontramos dissimilaridades temporais acentuadas entre os ambientes com características lóticas (rio e aterro) e lênticas (lagoas). Isto mostra que, além das diferentes épocas sazonais, é necessário analisar separadamente os diferentes tipos de áreas úmidas. Por fim, apesar da extensão pequena e baixa riqueza total, a área amostrada abrigou 1/3 das aves aquáticas de água doce para o estado de São Paulo, cinco espécies migratórias e 11 novas espécies para o noroeste do estado. A heterogeneidade de ambientes aquáticos locais, forte seleção de habitat aliada à sazonalidade e ausência de outros locais úmidos em seu entorno, explicam a diversidade e distribuição destas aves estreitamente relacionadas aos corpos dágua desta desconhecida ecorregião da Mata Atlântica.

Syagrus flexuosa (Mart.) Becc. (Arecaceae) seedling recruitment at the edge and interior of Cerrado remnants

Abstract The edge effect has impacts on seed and seedling survival due to modifications in biotic and abiotic factors. Often, large-seeded tree species lost seed vectors in the forest edge due to the rarity or absence of large frugivores at this habitat type. In this study, I compared the seedling abundance and distribution of the palm Syagrus flexuosa between edges and interiors of three large Cerrado remnants. In every remnant, the number of seedlings around parent palms in the edge was smaller than around palm individuals located in the Cerrado interior. Moreover, the distribution of seedlings around parent palms differed between edges and interiors. In the edges, most seedlings were found under parent crowns, while in the interiors, the contrary occurred. The high concentration of seedlings under parent palms suggests a decrease of seed dispersal at the edges. Because S. flexuosa is a widely distributed palm that serves as an important resource for several animals along Cerrado habitats, changes on the regeneration process of this palm due to edge effects can further impact frugivore populations. Therefore, the decline of seedling establishment along forest edges implies changes in the Cerrado regeneration dynamics, which may compromise the persistence of ecological processes and animal communities.

Resumo O efeito de borda tem impactos severos na sobrevivência de sementes e plântulas devido a modificações dos fatores bióticos e abióticos. Frequentemente, espécies arbóreas com sementes grandes perdem seus dispersores na borda da floresta devido à raridade ou ausência de grandes frugívoros neste tipo de habitat. Neste estudo, comparei a abundância e distribuição de plântulas de S. flexuosa entre bordas e interiores de três grandes remanescentes de Cerrado. Em cada remanescente, o número de plântulas ao redor das palmeiras-mãe, na borda, era menor do que ao redor dos indivíduos no interior do Cerrado. Nas bordas, a maioria das plântulas foi encontrada junto às plantas mãe, enquanto no interior ocorreu o contrário. A alta concentração de plântulas sob as plantas adultas sugere diminuição da dispersão de sementes nas bordas. Como S. flexuosa é uma palmeira amplamente distribuída que serve como um recurso importante para vários animais nos habitats do Cerrado, mudanças no processo de regeneração dessa palmeira devido aos efeitos de borda podem impactar ainda mais as populações de frugívoros. Portanto, o declínio do estabelecimento de plântulas ao longo das bordas do Cerrado implica em mudanças na dinâmica de regeneração do Cerrado, o que pode comprometer a persistência de processos ecológicos e comunidades animais.

Composition and spatio-temporal dynamics of aquatic bird community in humid areas of Alto Parana Atlantic Forest / Composição e dinâmica espaço-temporal da comunidade de aves aquáticas em áreas úmidas da Floresta Atlântica do Alto Paraná

Abstract The northwestern portion of the Upper Paraná Atlantic Forest ecoregion is one of the most disturbed and fragmented areas in the Atlantic Forest, and little is known about the local avifauna. In this study, we have described the composition and diversity of the aquatic avifauna of this region and analyzed the patterns of similarity with respect to the seasonal as well as spatial distribution. We used the line transect sampling technique in six distinct humid areas (including lentic and lotic water bodies) during the dry and rainy seasons of 2012 and 2013. A total of 52 species of waterfowl were recorded. The species richness of the studied areas was surprisingly distinct; only seven waterfowl species, namely Cairina moschata (Linnaeus, 1758), Tigrisoma lineatum (Boddaert, 1783), Rosthramus sociabilis (Vieillot, 1817), Aramus guarauna (Linnaeus, 1766), Vanellus chilensis (Molina, 1782), Jacana jacana (Linnaeus, 1766), and Arundinicola leucocephala (Linnaeus, 1764), were common to these six studied areas. This indicated that the other bird species that were observed might be habitat selective. Moreover, the analysis of the composition of birds in the two seasons (dry and rainy) combined with their spatial distributions showed significant dissimilarities between the areas with lotic (river and constructed wetland) and lentic (lagoons) characteristics. Nevertheless, despite the small extent and low total richness of the entire study area, it was found to be home to 1/3 of all freshwater aquatic birds documented in the state of São Paulo, with the record of 5 migratory species and 11 new species added to the northwest of the state. The heterogeneity of local aquatic environments, habitat selection combined with seasonality, and the absence of other humid locations in the surroundings can explain the diversity and distribution of these birds in the water bodies of this uninvestigated Atlantic Forest ecoregion.

Resumo A porção noroeste da ecorregião Floresta Atlântica do Alto Paraná é uma das mais alteradas e fragmentadas da Mata Atlântica, da qual pouco se sabe sobre a avifauna local. Nosso objetivo foi descrever a diversidade e composição da avifauna aquática, bem como analisar os padrões de similaridade quanto a distribuição temporal e espacial destas aves nesta ecorregião. Utilizamos a transecção linear para amostragem em seis áreas úmidas (corpos d'água lênticos e lóticos), nos períodos de seca e chuva entre 2012 e 2013. Registramos 52 espécies de aves aquáticas e as riquezas das áreas mostraram-se distintas, pois apenas Cairina moschata (Linnaeus, 1758), Tigrisoma lineatum (Boddaert, 1783), Rosthramus sociabilis (Vieillot, 1817), Aramus guarauna (Linnaeus, 1766), Vanellus chilensis (Molina, 1782), Jacana jacana (Linnaeus, 1766), and Arundinicola leucocephala (Linnaeus, 1764) foram comuns às seis áreas, o que indica seleção de habitat. Quando analisada a composição das aves nos dois períodos aliada à distribuição espacial, encontramos dissimilaridades temporais acentuadas entre os ambientes com características lóticas (rio e aterro) e lênticas (lagoas). Isto mostra que, além das diferentes épocas sazonais, é necessário analisar separadamente os diferentes tipos de áreas úmidas. Por fim, apesar da extensão pequena e baixa riqueza total, a área amostrada abrigou 1/3 das aves aquáticas de água doce para o estado de São Paulo, cinco espécies migratórias e 11 novas espécies para o noroeste do estado. A heterogeneidade de ambientes aquáticos locais, forte seleção de habitat aliada à sazonalidade e ausência de outros locais úmidos em seu entorno, explicam a diversidade e distribuição destas aves estreitamente relacionadas aos corpos d'água desta desconhecida ecorregião da Mata Atlântica.

Matteucinol combined with temozolomide inhibits glioblastoma proliferation, invasion, and progression: an in vitro, in silico, and in vivo study

Glioblastoma is the most prevalent and malignant brain tumor identified in adults. Surgical resection followed by radiotherapy and chemotherapy, mainly with temozolomide (TMZ), is the chosen treatment for this type of tumor. However, the average survival of patients is around 15 months. Novel approaches to glioblastoma treatment are greatly needed. Here, we aimed to investigate the anti-glioblastoma effect of the combination of matteucinol (Mat) (dihydroxyflavanone derived from Miconia chamissois Naudin) with the chemotherapeutic TMZ in vitro using tumor (U-251MG) and normal astrocyte (NHA) cell lines and in vivo using the chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) assay. The combination was cytotoxic and selective for tumor cells (28 μg/mL Mat and 9.71 μg/mL TMZ). Additionally, the combination did not alter cell adhesion but caused morphological changes characteristic of apoptosis in vitro. Notably, the combination was also able to reduce tumor growth in the chick embryo model (CAM assay). The docking results showed that Mat was the best ligand to the cell death membrane receptor TNFR1 and to TNFR1/TMZ complex, suggesting that these two molecules may be working together increasing their potential. In conclusion, Mat-TMZ can be a good candidate for pharmacokinetic studies in view of clinical use for the treatment of glioblastoma.

Density-dependent seed predation in Attalea geraensis Barb. Rodr. (Arecaceae) caused by bruchid beetles in the Brazilian Cerrado / Predação dependente da densidade em sementes de Attalea geraensis Barb. Rodr. (Arecaceae), causada por besouros no Cerrado brasileiro

Abstract Palms are an important component of Neotropical communities as they are often diverse and abundant. In some areas, palms occur in high density and act as limiting factor in tree recruitment by limiting tree seedling and sapling abundance. In this study, I evaluated the intensity of seed mortality caused by insects in Attalea geraensis, in a large area of preserved Cerrado (Serra do Cabral, MG, Brazil) during wet season when both A. geraensis fruits and bruchid beetles were abundant. I collected a total of 63 infructescences which had from 3 fruits and 7 seeds to 82 fruits and 251 seeds. Endocarps had from 1 to 6 seeds. Seed mortality per infructescence due to beetles (Pachymerus cardo) was intense, and increases positively and disproportionally according to seed number per infructescence. Besides that, average proportions of seeds preyed upon by insects were consistently high (> 0.83), irrespective of seed number per endocarp. Positive density-dependent seed mortality caused by specialized natural enemies has been assumed to promote species rarity, an important feature of species coexistence in Neotropical forests. Then, the intense seed mortality documented in this study suggests that seed predators may contribute to the richness and diversity of plant species in the Cerrado, the richest and most endangered savanna in the world.

Resumo Devido à abundância e diversidade, as palmeiras são um componente importante das comunidades neotropicais. Em algumas áreas as palmeiras ocorrem em elevada densidade, tornando-se um fator limitante ao recrutamento de árvores, por restringir a abundância de plântulas e árvores jovens. Neste estudo, avaliei a intensidade de mortalidade das sementes de Attalea geraensis , causada por insetos, em uma grande área preservada de Cerrado (Serra do Cabral, MG, Brasil), durante a estação chuvosa, quando frutos de A. geraensis e besouros predadores de sementes eram abundantes. Coletei um total de 63 infrutescências que tinham de 3 frutos e 7 sementes a 82 frutos e 251 sementes. Os endocarpos tinham de 1 a 6 sementes. Nas infrutescências a mortalidade das sementes causada por besouros (Pachymerus cardo) foi intensa e aumentou positiva e desproporcionalmente conforme o número de sementes por infrutescência. Além disso, independentemente do número de sementes por endocarpo, as proporções médias de sementes predadas por endocarpo foram consistentemente altas (> 0,83). A mortalidade densidade dependente positiva de sementes causada por inimigos naturais especializados é assumida como uma das principais causas da raridade das espécies vegetais, um fator importante para coexistência de espécies nas florestas neotropicais. Portanto, a intensa mortalidade de sementes documentada neste estudo sugere que predadores de sementes podem contribuir para a riqueza e diversidade de espécies de plantas no Cerrado, a savana mais rica e ameaçada do mundo.

The effect of size and density on nut removal in Syagrus loefgrenii Glassman (Arecaceae) in the Brazilian Cerrado / Efeito do tamanho e densidade sobre a remoção de sementes em Syagrus loefgrenii Glassman (Arecaceae) no Cerrado brasileiro

Abstract In this study I tested the effect of Syagrus loefgrenii nut size and number on the intensity of removal by rodents across seasons. Trials were performed in which piles of either small or large endocarps (1, 3, 6, 12, and 25) were subjected to removal by rodents in the Cerrado (Brazilian savanna). Despite of variations in the intensity of removal, always this process decrease conform endocarp number. Also, mean proportion of endocarp removal was unrelated to year period, initial number, and size of endocarps. Hence, endocarp removal was consistently negative density-dependent. As, in principle, the observed patterns of nut removal point out similar survival chances for both nut sizes, the pervasive negative density-dependent response emerges as a strategy in S. loefgrenii to swamp rodents all year round irrespective of seed size.

Resumo Avaliei o efeito do tamanho e densidade de endocarpos de Syagrus loefgrenii sobre a intensidade de remoção por roedores conforme a estação do ano. Para tanto, desenvolvi experimentos no Cerrado em que pilhas de endocarpos pequenos ou grandes (1, 3, 6, 12 e 25), foram sujeitos à remoção por roedores. Apesar da intensidade de remoção variar ao longo do ano, sempre esse processo teve relação inversa com o número de endocarpos. Além disso, em qualquer estação do ano, as proporções médias de endocarpos removidos sempre foram menores nas pilhas maiores, independentemente do tamanho dos endocarpos. Portanto, o processo de remoção de endocarpos foi negativamente dependente da densidade. Como, em princípio, os padrões de remoção em S. loefgrenii sugerem chances similares de sobrevivência tanto para endocarpos grandes, quanto pequenos, a preponderância de resposta negativamente dependente da densidade emerge como uma estratégia de S. loefgrenii voltada a saciar roedores em qualquer período do ano independentemente do tamanho de suas sementes.

Seed removal of Dipteryx alata Vog. (Leguminosae: Faboidae) in the edge and interior of Cerrado / Remoção de sementes de Dipteryx alata Vog. (Leguminosae: Faboidae) na borda e interior do Cerrado

Abstract Post-dispersal seed agents of mortality include pathogens, invertebrates, and vertebrates, which may shape tropical tree populations and communities. In this study I experimentally evaluated Dipteryx alata endocarp removal both in the interior and edge of Cerrado vegetation. Specifically, I simulated primary dispersion of endocarps by bats and evaluated secondary removal intensity according to habitat, season, and endocarp number. This study was developed in the Pombo Natural Municipal Park, a large Cerrado remnant with an area of 9,000 ha, located in the Western Brazil. In each of the two habitat types, I set down 45 points in which D. alata piles of 1, 3, 7, 15, and 40 endocarps were positioned. On average, endocarp removal in the interior was higher than in the edge, so that the intensity of removal varied from positive density-dependent (interior: rains), to negative density-dependent (edge: both seasons). Also, at both habitat types and seasons non removed endocarps were intensely attacked by fungus. Indeed, seed mortality by fungus infestation was positive density-dependent. The results indicate high propensity of endocarps to escape from removal in the edge, in principle, a defaunated area. As Dipteryx species strongly rely on caviomorph rodents for their dispersal, the scarcity of these vectors might reduce recruitment chances of D. alata in remnants of Cerrado. This imply in future changes in the vegetation structure from the edge to the interior towards low tree diversity.

Resumo A mortalidade pós-dispersão de sementes é causada por agentes como patógenos, invertebrados e vertebrados, os quais influenciam a dinâmica de populações e comunidades arbóreas. Nesse estudo, avaliei experimentalmente intensidade de remoção, por roedores, de endocarpos de Dipteryx alata na borda e interior da vegetação do Cerrado. Simulando a dispersão primária por morcegos, posicionei pilhas com diferentes números de endocarpos nos dois hábitats do cerrado e avaliei a remoção secundária, tanto na estação seca quanto na chuvosa. Os experimentos foram desenvolvidos no Parque Natural Municipal do Pombo, um grande remanescente com 9000 ha (Três Lagoas, MS, Brasil). Em cada um dos habitat defini 45 pontos nos quais pilhas com 1, 3, 7, 15 e 40 endocarpos foram posicionadas. A remoção de endocarpos foi significativamente maior no interior em relação à borda, tal que a intensidade de remoção variou de positivamente dependente da densidade (interior: chuvas), a negativamente dependente da densidade (borda: ambas as estações). Além disso, tanto na borda, quanto interior, bem como nas duas estações os endocarpos não removidos foram intensamente infestados por fungos. Consequentemente, a mortalidade causada por esses patógenos foi densidade dependente. Os resultados sugerem que os endocarpos de D. alata teriam maiores chances de escapar à remoção na borda, em princípio, depauperada em termos de roedores dispersores. A escassez desses vetores reduziria as chances de recrutamento de D. alata, favorecendo mudanças futuras na estrutura da vegetação, a partir da borda, em termos de menor diversidade arbórea.

The effect of size and density on nut removal in Syagrus loefgrenii Glassman (Arecaceae) in the Brazilian Cerrado

Abstract In this study I tested the effect of Syagrus loefgrenii nut size and number on the intensity of removal by rodents across seasons. Trials were performed in which piles of either small or large endocarps (1, 3, 6, 12, and 25) were subjected to removal by rodents in the Cerrado (Brazilian savanna). Despite of variations in the intensity of removal, always this process decrease conform endocarp number. Also, mean proportion of endocarp removal was unrelated to year period, initial number, and size of endocarps. Hence, endocarp removal was consistently negative density-dependent. As, in principle, the observed patterns of nut removal point out similar survival chances for both nut sizes, the pervasive negative density-dependent response emerges as a strategy in S. loefgrenii to swamp rodents all year round irrespective of seed size.

Resumo Avaliei o efeito do tamanho e densidade de endocarpos de Syagrus loefgrenii sobre a intensidade de remoção por roedores conforme a estação do ano. Para tanto, desenvolvi experimentos no Cerrado em que pilhas de endocarpos pequenos ou grandes (1, 3, 6, 12 e 25), foram sujeitos à remoção por roedores. Apesar da intensidade de remoção variar ao longo do ano, sempre esse processo teve relação inversa com o número de endocarpos. Além disso, em qualquer estação do ano, as proporções médias de endocarpos removidos sempre foram menores nas pilhas maiores, independentemente do tamanho dos endocarpos. Portanto, o processo de remoção de endocarpos foi negativamente dependente da densidade. Como, em princípio, os padrões de remoção em S. loefgrenii sugerem chances similares de sobrevivência tanto para endocarpos grandes, quanto pequenos, a preponderância de resposta negativamente dependente da densidade emerge como uma estratégia de S. loefgrenii voltada a saciar roedores em qualquer período do ano independentemente do tamanho de suas sementes.

Density-dependent seed predation in Attalea geraensis Barb. Rodr. (Arecaceae) caused by bruchid beetles in the Brazilian Cerrado

Abstract Palms are an important component of Neotropical communities as they are often diverse and abundant. In some areas, palms occur in high density and act as limiting factor in tree recruitment by limiting tree seedling and sapling abundance. In this study, I evaluated the intensity of seed mortality caused by insects in Attalea geraensis, in a large area of preserved Cerrado (Serra do Cabral, MG, Brazil) during wet season when both A. geraensis fruits and bruchid beetles were abundant. I collected a total of 63 infructescences which had from 3 fruits and 7 seeds to 82 fruits and 251 seeds. Endocarps had from 1 to 6 seeds. Seed mortality per infructescence due to beetles (Pachymerus cardo) was intense, and increases positively and disproportionally according to seed number per infructescence. Besides that, average proportions of seeds preyed upon by insects were consistently high (> 0.83), irrespective of seed number per endocarp. Positive density-dependent seed mortality caused by specialized natural enemies has been assumed to promote species rarity, an important feature of species coexistence in Neotropical forests. Then, the intense seed mortality documented in this study suggests that seed predators may contribute to the richness and diversity of plant species in the Cerrado, the richest and most endangered savanna in the world.

Resumo Devido à abundância e diversidade, as palmeiras são um componente importante das comunidades neotropicais. Em algumas áreas as palmeiras ocorrem em elevada densidade, tornando-se um fator limitante ao recrutamento de árvores, por restringir a abundância de plântulas e árvores jovens. Neste estudo, avaliei a intensidade de mortalidade das sementes de Attalea geraensis , causada por insetos, em uma grande área preservada de Cerrado (Serra do Cabral, MG, Brasil), durante a estação chuvosa, quando frutos de A. geraensis e besouros predadores de sementes eram abundantes. Coletei um total de 63 infrutescências que tinham de 3 frutos e 7 sementes a 82 frutos e 251 sementes. Os endocarpos tinham de 1 a 6 sementes. Nas infrutescências a mortalidade das sementes causada por besouros (Pachymerus cardo) foi intensa e aumentou positiva e desproporcionalmente conforme o número de sementes por infrutescência. Além disso, independentemente do número de sementes por endocarpo, as proporções médias de sementes predadas por endocarpo foram consistentemente altas (> 0,83). A mortalidade densidade dependente positiva de sementes causada por inimigos naturais especializados é assumida como uma das principais causas da raridade das espécies vegetais, um fator importante para coexistência de espécies nas florestas neotropicais. Portanto, a intensa mortalidade de sementes documentada neste estudo sugere que predadores de sementes podem contribuir para a riqueza e diversidade de espécies de plantas no Cerrado, a savana mais rica e ameaçada do mundo.

Nut density and removal in Syagrus loefgrenii Glassman (Arecaceae) in the Brazilian Cerrado / Densidade de sementes e remoção em Syagrus loefgrenii Glassman (Arecaceae) no Cerrado brasileiro

Abstract In this study, I tested the effect of Syagrus loefgrenii nut number on the removal intensity by rodents across seasons. Also, I assessed both S. loefgrenii fruit production, and dispersion pattern to analyze the relationship between these parameters and nut removal. Trials were performed (autumn, winter, spring, and summer), in which endocarps were placed inside trays (5, 15, and 40 endocarps) in the Cerrado (Brazilian savanna). Syagrus loefgrenii exhibited clumped distribution, although its local density had no correlation with endocarp removal rate. Despite of variations, S. loefgrenii fruit production had no seasonal difference, although, high proportions of endocarps were year round removed. This mostly results from nearly complete endocarp loss in depots of 5 and 15, while the opposite occurred in those of 40. Hence, the intensity of removal consistently decreases with endocarp number, so that endocarp removal conformed to negative distance-dependence. As this palm exhibit clumped distribution and, in principle, fruit asynchronously, if, at least, a group of neighboring stems bore fruits simultaneously, an enhanced number of nuts might be available at a given site. Therefore, seeds within a dense S. loefgrenii fruit patch might experience high survival rates due to satiation of post dispersal seed predators.

Resumo Neste estudo, testei o efeito da densidade de endocarpos de Syagrus loefgrenii sobre a intensidade de remoção por roedores conforme a estação do ano. Também, avaliei tanto a produção de frutos, quanto o padrão de dispersão dessa palmeira em relação à intensidade de remoção de endocarpos. Executei experimentos no Cerrado (outono, inverno, primavera e verão), nos quais acondicionei 5, 15 e 40 endocarpos em pratos plásticos perfurados (pilhas experimentais). Syagrus loefgrenii exibiu distribuição agrupada. Apesar disso, a densidade local dessa palmeira em nenhuma estação esteve correlacionada com a taxa de remoção de endocarpos. Não ocorreram diferenças temporais significativas quanto aos níveis de frutificação, e, simultaneamente, documentei intensa remoção de endocarpos. Isso ocorreu, sobretudo, nas pilhas com 5 e 15 endocarpos, as quais, na maioria dos casos, perderam quase todos endocarpos. No entanto, as pilhas com 40 perderam poucos diásporos. Nesse sentido a intensidade de remoção decresceu consistentemente conforme o número de endocarpos, tal que esse processo mostrou ser negativamente dependente da distância. Syagrus loefgrenii exibiu padrão agrupado de distribuição, além de produzir frutos assincronicamente. Nesse sentido, caso um grupo de palmeiras vizinhas frutifique simultaneamente, uma grande quantidade de diásporos estará disponível em um dado local. Portanto, sementes em meio a uma densa carga de frutos podem ser favorecidas, uma vez que predadores pós-dispersão seriam saciados.

Seed rain generated by bats under Cerrados pasture remnant trees in a Neotropical savanna

Abstract In this study we described the seed rain generated by bats under four Cerrados tree species common within pastures, Buchenavia tomentosa, Couepia grandiflora, Licania humilis and Qualea grandiflora. We analyzed the similarity among the four tree species in terms of seed rain composition, and compared the number of seeds and seed species deposited under them. Besides that, we assessed the relationship between seed rain intensity and the density of each tree species. Then, we randomly selected 10 mature trees of each species to sample seed rain. We recorded a total of 4892 bat dispersed seeds from 11 species. Also, we observed that along the year seed deposition varied substantially under all trees. At least two seed sub-communities could be distinguished according to tree species used by bats as feeding roost. One related to Couepia grandiflora and Licania humilis, and the other to Buchenavia tomentosa and Qualea grandiflora trees. The variability of seed rain composition in any particular tree and the range of actual seed fall into a particular species indicate patchiness in seed rain, and the overall results appear to be consistent in terms of a substantial and diverse seed rain generated by bats in a highly anthropized landscape. This is the first study concerning seed dispersal by bats in modified Brazilian Cerrado, one of the most endangered biomes in the world. In this respect, by preserving a dense and diverse collection of remnant trees within today's pastures may, potentially, contribute to a faster Cerrado recovery in extensive areas that can be reclaimed for restoration in the future.

Resumo Neste estudo descrevemos a chuva de sementes gerada por morcegos sob quatro espécies arbóreas comuns em pastagens no Cerrado (Bouchenavia tomentosa, Couepia grandiflora, Licania humilis e Qualea grandiflora). Também, analisamos a similaridade quanto à composição da chuva de sementes depositada sob as quatro espécies arbóreas, além da relação entre a intensidade da chuva de sementes e densidade de cada espécies arbóreas. Para tanto, selecionamos aleatoriamente 10 árvores por espécie que fossem reprodutivamente maduras, para amostrar a chuva de sementes. Registramos um total de 4892 sementes, pertencentes a 11 espécies de plantas, dispersadas por morcegos. Durante o ano a deposição de sementes variou substancialmente sob todas as árvores amostradas. Duas sub-comunidades de sementes emergiram associadas às espécies arbóreas usadas por morcegos como abrigo de alimentação. Uma relacionada à Couepia grandiflora e Licania humilis, e outra relacionada à Buchenavia tomentosa e Qualea grandiflora. A variabilidade da composição da chuva de sementes sob qualquer uma das árvores, bem como a amplitude dessa chuva sob cada espécie de árvore indicou um padrão heterogêneo e intenso de deposição de uma coleção diversa de sementes em uma área altamente antropizada. Neste aspecto, a manutenção de uma rica e densa coleção de árvores remanescentes nas áreas de pastagens pode contribuir, potencialmente, para uma regeneração mais rápida do Cerrado em extensas áreas que podem requerer planos de restauração futuramente.

Seed rain generated by bats under Cerrado’s pasture remnant trees in a Neotropical savanna / Chuva de sementes gerada por morcegos sob árvores remanescentes do Cerrado no Brasil Central

Abstract In this study we described the seed rain generated by bats under four Cerrado’s tree species common within pastures, Buchenavia tomentosa, Couepia grandiflora, Licania humilis and Qualea grandiflora. We analyzed the similarity among the four tree species in terms of seed rain composition, and compared the number of seeds and seed species deposited under them. Besides that, we assessed the relationship between seed rain intensity and the density of each tree species. Then, we randomly selected 10 mature trees of each species to sample seed rain. We recorded a total of 4892 bat dispersed seeds from 11 species. Also, we observed that along the year seed deposition varied substantially under all trees. At least two seed sub-communities could be distinguished according to tree species used by bats as feeding roost. One related to Couepia grandiflora and Licania humilis, and the other to Buchenavia tomentosa and Qualea grandiflora trees. The variability of seed rain composition in any particular tree and the range of actual seed fall into a particular species indicate patchiness in seed rain, and the overall results appear to be consistent in terms of a substantial and diverse seed rain generated by bats in a highly anthropized landscape. This is the first study concerning seed dispersal by bats in modified Brazilian Cerrado, one of the most endangered biomes in the world. In this respect, by preserving a dense and diverse collection of remnant trees within today's pastures may, potentially, contribute to a faster Cerrado recovery in extensive areas that can be reclaimed for restoration in the future.

Resumo Neste estudo descrevemos a chuva de sementes gerada por morcegos sob quatro espécies arbóreas comuns em pastagens no Cerrado (Bouchenavia tomentosa, Couepia grandiflora, Licania humilis e Qualea grandiflora). Também, analisamos a similaridade quanto à composição da chuva de sementes depositada sob as quatro espécies arbóreas, além da relação entre a intensidade da chuva de sementes e densidade de cada espécies arbóreas. Para tanto, selecionamos aleatoriamente 10 árvores por espécie que fossem reprodutivamente maduras, para amostrar a chuva de sementes. Registramos um total de 4892 sementes, pertencentes a 11 espécies de plantas, dispersadas por morcegos. Durante o ano a deposição de sementes variou substancialmente sob todas as árvores amostradas. Duas sub-comunidades de sementes emergiram associadas às espécies arbóreas usadas por morcegos como abrigo de alimentação. Uma relacionada à Couepia grandiflora e Licania humilis, e outra relacionada à Buchenavia tomentosa e Qualea grandiflora. A variabilidade da composição da chuva de sementes sob qualquer uma das árvores, bem como a amplitude dessa chuva sob cada espécie de árvore indicou um padrão heterogêneo e intenso de deposição de uma coleção diversa de sementes em uma área altamente antropizada. Neste aspecto, a manutenção de uma rica e densa coleção de árvores remanescentes nas áreas de pastagens pode contribuir, potencialmente, para uma regeneração mais rápida do Cerrado em extensas áreas que podem requerer planos de restauração futuramente.

Chaco Chachalaca (Ortalis canicollis, Wagler, 1830) feeding ecology in a gallery forest in the South Pantanal (Brazil) / Ecologia alimentar do aracuã-do-pantanal (Ortalis canicollis) em uma floresta ripária no Pantanal Sul

Cracids are generalist frugivores, which often exploit plant food resources such as flowers and leaves, mainly when fruit production declines. The Chaco chachalaca (Ortalis canicollis) is the most abundant cracid in the Pantanal (Brazil), and particularly common in the gallery forests. However, the factors related to their occurrence in this habitat type are unclear. In this study I describe the feeding habits and feeding niche breadth fluctuations of the Chaco chachalaca in relation to food resources abundance and diversity at the Miranda river gallery forest (Southern Pantanal). I also analyzed the relationships between Chaco chachalacas feeding activity and food resources abundance. This parameter (flowers and fruits) exhibited significant seasonal differences of abundance in which flowers were plentiful at the end of the dry, while fruits were abundant during the early wet season. However, food resources diversity to Chaco chachalacas exhibited no seasonal difference. Their feeding activity paralleled the availability of food resources, so that when some items were massively available an enhanced number of Chaco chachalacas foraged in the gallery forest, particularly during the prolonged dry season when they extensively used flowers and Genipa americana fruits. In fact, the Chaco chachalaca feeding niche breadth value presented low values in this period, while high values were common in the rest of the year. The flexible diet of this cracid, potentially favors their year round presence in the gallery forest, mainly during the prolonged dry season when the propensity for famine might be high. Since the Chaco chachalaca is among the largest and most abundant canopy frugivores in the gallery forest, it may contribute to forest regeneration, an underscored role due to the impact of annual floods and meandering dynamics on tree loss.

Cracídeos são frugívoros generalistas que, também, exploram flores e folhas, sobretudo quando frutos são escassos. No Pantanal (Brasil), o aracuã-do-pantanal (Ortalis canicollis) é o cracídeo mais abundante, sendo particularmente comum em matas ciliares. No entanto, os fatores relacionados com sua ocorrência nesse habitat são desconhecidos. Nesse estudo eu descrevo tanto os hábitos alimentares quanto as variações de amplitude de nicho alimentar do aracuã-do-pantanal em relação à abundância e diversidade de recursos alimentares na mata ciliar do rio Miranda (Pantanal-Sul, Brasil). Também, analisei a relação entre atividade alimentar e oferta de recursos alimentares. Esse parâmetro (flores e frutos) exibiu variações significativas de abundância em que a produção de flores foi pronunciada de meados para o final da estação seca, enquanto a oferta de frutos foi elevada do início para meados da estação chuvosa. No entanto, a diversidade de recursos alimentares disponíveis para o aracuã-do-pantanal não diferiu entre as estações. A atividade alimentar do aracuã-do-pantanal foi paralela a oferta de recursos alimentares, tal que quando alguns itens eram abundantes um grande número de Aracuãs forrageava na mata ciliar, sobretudo durante a severa estação seca em que consumiram extensivamente flores e frutos de Genipa americana. De fato, a amplitude do nicho alimentar do aracuã-do-pantanal foi baixa nesse período, enquanto valores elevados foram comuns no restante do ano. A dieta flexível do aracuã-do-pantanal, potencialmente, favorece sua permanência continua na mata ciliar, principalmente durante a severa estação seca, quando a propensão a escassez de alimento se acentua. O aracuã-do-pantanal está entre os maiores frugívoros da mata ciliar, portanto, sua importância para regeneração desse habitat deve ser elevada em razão da constante perda de árvores causada pelas cheias anuais e a dinâmica de formação de meandros.

Crop damage of Eriotheca gracilipes (Bombacaceae) by the Blue-Fronted Amazon (Amazona aestiva, Psittacidae), in the Brazilian Cerrado / Predação pré-dispersão de sementes de Eriotheca gracilipes (Bombacaceae), pelo Papagaio verdadeiro (Amazona aestiva, Psittacidae) no Cerrado brasileiro

Seed predation has major effects on the reproductive success of individuals, spatial patterns of populations, genetic variability, interspecific interactions and ultimately in the diversity of tree communities. At a Brazilian savanna, I evaluated the proportional crop loss of Eriotheca gracilipes due the Blue-Fronted Amazon (Amazona aestiva) during a fruiting period. Also, I analyzed the relationship between proportional crop loss to Amazons and both fruit crop size and the distance from the nearest damaged conspecific. Trees produced from 1 to 109 fruits, so that Amazons foraged more often on trees bearing larger fruit crop size, while seldom visited less productive trees. Moreover, the relationship between fruit crop sizes and the number of depredated fruits was significant. However, when only damaged trees were assessed, I found a negative and significant relation between fruit crop size and proportional crop loss to Blue-Fronted Amazons. Taking into account this as a measure more directly related to the probability of seed survival, a negative density dependent effect emerged. Also, Amazons similarly damaged the fruit crops of either close or distant neighboring damaged trees. Hence, in spite of Blue-Fronted Amazons searched for E. gracilipes bearing large fruit crops, they were swamped due to the presence of more fruits than they could eat. Moderate seed predation by Blue-Fronted Amazons either at trees with large fruit crops or in areas where fruiting trees were aggregated implies in an enhanced probability of E. gracilipes seed survival and consequent regeneration success.

Avaliei durante um episódio de frutificação, no cerrado brasileiro, o impacto da predação de sementes, pelo Papagaio verdadeiro (Amazona aestiva), sobre as cargas de frutos da paineira do cerrado (Eriotheca gracilipes). Também, analisei as relações entre a taxa predação e tanto o tamanho das cargas de frutos, quanto à distância da E. gracilipes mais próxima predada. As ávores produziram de 1 a 109 frutos, sendo que os papagaios forragearam frequentemente em árvores com grandes cargas, enquanto raramente visitaram árvores com poucos frutos. Além disso, a relação entre tamanho da carga e número de frutos predados foi significativa. No entanto, a relação entre quantidade e proporção de frutos predados pelos Papagaios verdadeiros foi negativa e significativa. Considerando que a proporção de frutos predados é uma medida estreitamente relacionada às chances de sobrevivência das sementes, a predação pelos papagaios foi negativamente dependente da densidade. Apesar dos papagaios visitarem árvores com grandes cargas de frutos, foram saciados devido a presença de cargas superiores ao potencial de predação. Além disso, os papagaios danificaram igualmente as cargas de frutos tanto de árvores próximas quanto distantes entre si. O reduzido impacto pelos papagaios tanto sobre as grandes cargas de frutos quanto em áreas adensadas de E. gracilipes, implica em elevadas probabilidades de sobrevivência das sementes e respectiva chance de regeneração de E. gracilipes.

Plant food resources exploited by Blue-and-Yellow Macaws (Ara ararauna, Linnaeus 1758) at an urban area in Central Brazil / Plantas alimentares exploradas pela Arara Canindé (Ara ararauna, Linnaeus 1758) em uma área urbana do Brasil Central

In this study, we described the food plants available to Blue-and-Yellow Macaws (Ara ararauna), its feeding habits and the relationship between these parameters with feeding niche breadth. We established four transects, each one 12 km long, to sample fruiting plants and the feeding habits of this macaw (monthly 40 h, of observations), at the urban areas of Três Lagoas (Mato Grosso do Sul, Brazil). During all studied months, macaws foraged for palm fruits, mainly Syagrus oleracea and Acrocomia aculeata fruit pulp, both available all year, as well as Caryocar brasiliense and Anacardium occidentale seeds, in the wet season. The year-round feeding activity of macaws suggests Três Lagoas city as an adequate feeding area. The permanent availability of plant food resources, potentially, resulted from the diverse fruiting patterns of exotic and, mainly, native plant species, which provided a variety of suitable fruit patches.

Neste estudo, nós descrevemos as plantas alimentares disponíveis para Arara-Canindé (Ara ararauna), sua atividade alimentar, bem como a relação desses parâmetros com a amplitude do seu nicho alimentar. Para tanto, estabelecemos quatro trajetos, cada um com 12 km, dispersos na área urbana de Três Lagoas (Mato Grosso do Sul, Brasil). A partir deles amostramos, mensalmente durante 40 h, as espécies vegetais que frutificavam e a atividade alimentar dessa ave. As araras exploraram frutos em todos os meses do ano e consumiram principalmente frutos comuns e nutritivos. Entre os itens mais explorados pelas araras estiveram as sementes de Anacardium occidentale e Caryocar brasiliense, cuja frutificação ocorreu durante a estação chuvosa, bem como a polpa dos frutos das palmeiras Syagrus oleracea e Acrocomia aculeata, que frutificaram o ano todo. A presença de araras forrageando todos os meses em Três Lagoas sugere a adequação dessa área urbana como local de alimentação. A disponibilidade de recursos alimentares ao longo do ano, potencialmente, decorreu da combinação da variedade dos padrões de frutificação em espécies vegetais exóticas e, sobretudo, nativas que proporcionaram oferta abundante e variada de recurso alimentar.

The inflammatory stimulus of a natural latex biomembrane improves healing in mice

The aim of the present study was to compare healing obtained with biomembranes with the natural healing process (sham) using biochemical and immunohistological assays. C57BL/6 mice were divided into 4 groups of 15 mice each and received different subcutaneous implants: natural latex biomembrane (NLB), denatured latex (DL), expanded polytetrafluorethylene (ePTFE), or sham. On the 2nd, 7th, and 14th days post-treatment, 5 mice per group were sacrificed and biopsied for the following measurements: oxidative stress based on malondialdehyde (MDA), myeloperoxidase (MPO) and hydrogen peroxide by the method of ferrous oxidation-xylenol orange (FOX), as well as glutathione and total proteins; histological evaluation to enumerate inflammatory cells, fibroblasts, blood vessels, and collagen, and immunohistochemical staining for inducible nitric oxide synthase, interleukin-1β, vascular endothelial growth factor (VEGF), and transforming growth factor-β1 (TGF-β1). On day 2 post-treatment, NLB stimulated a dense inflammatory infiltrate mainly consisting of polymorphonuclear cells, as indicated by increased MPO (P < 0.05), but oxidative stress due to MDA was not observed until the 7th day (P < 0.05). The number of blood vessels was greater in NLB (P < 0.05) and DL (P < 0.05) mice compared to sham animals on day 14. NLB induced fibroplasia by day 14 (P < 0.05) with low expression of TGF-β1 and collagenesis. Thus, NLB significantly induced the inflammatory phase of healing mediated by oxidative stress, which appeared to influence the subsequent phases such as angiogenesis (with low expression of VEGF) and fibroplasia (independent of TGF-β1) without influencing collagenesis.

Relationship among Apis mellifera L. stings, swarming and climate conditions in the city of Rio Claro, SP, Brazil

The presence of bees (Apis mellifera L.) in urban areas has increased in recent years due to environmental disturbances caused by humans. Bee migration to cities may provoke serious accidents, since some people present allergic reactions to their venoms. In Rio Claro city, São Paulo state, Brazil, the number of calls to the fire brigade for removal of bee swarms, and the number admissions in local hospitals due to bee stings were investigated during 2002 and 2003, and a correlation between these data and the average temperature, rainfall and relative humidity was found. The study period was divided into three phases according to the number of times that the fire brigade was called to remove swarms (263 times): January to July 2002 - 51 calls (19.39 percent); August 2002 to July 2003 - 140 calls (53.23 percent); and August to December 2003 - 72 calls (27.38 percent). A significant correlation among the number of calls, the local temperature and rainfall was detected. The number of accidents was not associated with environmental variables. Based on the current results, public activities for prevention of bee attacks may be developed to avoid unwanted contact between humans and these insects, and/or provide the appropriate management of the colonies.

Bird mixed-flocks and nuclear species in a tecoma savanna in the Pantanal / Bandos mistos de aves e espécie nuclear em uma savana de ipês no Pantanal

In bird mixed flocks, a prominent species, the so-called nuclear species, improves the cohesion and maintenance of the flocks, while other less conspicuous species are assumed as satellite. In this study we described the composition, as well as examined the existence of both nuclear and satellite species in mixed flocks of a savanna in the Pantanal. The observations were developed using three transects during the dry season of 2002. Bird species abundance and respective rate of participation in mixed flocks were surveyed by transects, while intraspecific sociality, communication, foraging maneuvers of species, and responses to predators were sampled by direct observations. These parameters were evaluated to distinguish nuclear from satellite species. We observed 41 bird mixed flocks, which included from 2 to 17 species of which Suiriri suiriri (Vieillot), one of the most abundant species, was present in most flocks, often represented by 2-4 individuals, whereas most other species occurred lone or in pairs. While foraging by acrobatic maneuvers S. suiriri often gave contact calls, as well as earlier giving alarm calls if faced with a risk of predation. In addition, S. suiriri always started mixed flocks movements. Conversely, most other species were silent and closely inspected the vegetation while foraging. Such species always followed S. suiriri and seldom gave contact calls. Hence, the conspicuous traits exhibited by S. suiriri, potentially, are exploited by the other bird species as cues, which are important references for bird mixed flock cohesion in a savanna in the southern Pantanal.

Em bandos mistos de aves, a espécie nuclear possui características que promovem a coesão e manutenção dos bandos, enquanto espécies menos conspícuas são consideradas satélites. Este estudo teve como objetivos descrever a composição, bem como analisar a existência de espécies nucleares e satélites em bandos mistos em um tipo de savana do Pantanal Sul. As observações foram desenvolvidas ao longo de três trajetos durante a estação seca de 2002. A abundância das espécies e respectiva taxa de participação nos bandos mistos foram amostradas através de trajetos, enquanto dados sobre socialidade intra-específica, comunicação, manobras de forrageio e reação a predadores foram obtidos através de observações diretas. Esses parâmetros foram adotados como critérios, para distinguir espécies nucleares de satélites. Foram detectados 41 bandos mistos que incluíram de 2 a 17 espécies, sendo que Suiriri suiriri, uma das espécies mais abundantes na savana de ipês, esteve presente em praticamente todos os bandos, na forma de um par ou grupo de indivíduos que, regularmente, emitiam chamados de contato, enquanto forrageavam executando manobras acrobáticas. Também, emitiram chamados de alarme quando em risco de predação e foram seguidos pelas demais espécies durante os deslocamentos dos bandos. A maioria das outras espécies inspecionava a vegetação silenciosamente enquanto forrageavam, seguiam S. suiriri em seus deslocamentos e raramente emitiam chamados de contato. Portanto, características conspícuas exibidas por S. suiriri, potencialmente, são exploradas pelas demais espécies como importantes referências para coesão dos bandos mistos de aves em uma savana no Pantanal sul.

Hymenoptera marking technique

In true social hymenopterans, such as many species of bees, wasps and all species of ants, the main characteristics are the overlapping of generations, the care with the offspring and the division of labor among the members of the colony. The first biological feature means that in a same moment there are groups of individuals, with variable ages, that execute different activities in the colony. In order to study the division of labor among the members of the colony, or to estimate the life span of these insects, or even to analyze any kind of behavior in non-social insects, it is necessary to know the exact age of each individual. For this reason, the insects must be identified soon after emergence. The identification of insects with numbers is an important technological improvement in behavioral studies, mainly in honeybee colonies. The aim of this scientific note is to describe an easy and cheaper technique for marking hymenopterans.