RESUMO
INTRODUÇÃO: O objetivo deste estudo foi avaliar a concordância entre os kits de fator antinúcleo (FAN) HEp-2 em relação aos padrões de fluorescência observados. Objetivou-se, ainda, avaliar o desempenho dos kits em relação à intensidade de fluorescência apresentada pelo uso dos conjugados fluorescentes, o número de mitoses por campo presentes no poço de reação e a titulação necessária para se obter o limiar de reatividade mínima (1+) dos soros controle reagentes presentes nos kits. MATERIAIS E MÉTODOS: Setenta e quatro amostras com resultados conhecidos foram testadas em quatro kits comerciais para a pesquisa de FAN HEp-2. O processamento estatístico foi feito pelo programa STATA® 9.2 e a concordância entre os resultados foi aferida pelo teste Kappa. RESULTADOS: O índice de concordância entre os kits, obtido pelo teste Kappa, foi superior a 0,94. Houve grande variabilidade quanto ao número de mitoses por campo presentes por poço de reação e quanto à intensidade de fluorescência dos conjugados, além de ter havido significativa diferença em dois kits em relação à diluição necessária para obtenção do limiar de reatividade mínima (1+). CONCLUSÃO: A taxa de concordância geral obtida pelo teste Kappa foi elevada, atingindo índice superior a 0,94. As maiores diferenças foram devido à presença de amostras com padrão variando entre nuclear pontilhado fino (PF), nuclear pontilhado fino denso (PFD) e nuclear homogêneo (HOMO). É necessária maior padronização dos kits quanto ao soro controle para a obtenção do limiar de reatividade mínima e em relação à intensidade de fluorescência dos conjugados.
INTRODUCTION: The objective of this study was to assess the concordance among antinuclear antibody (ANA) HEp-2 kits as to the observed fluorescent patterns. The objective was also to evaluate their performance concerning the following items: fluorescence intensity due to the use of fluorescent conjugates, the number of mitosis per field on the reaction wells, and the required dilution to obtain minimum reactivity (1+) of the reagent control-serum present in the kits. MATERIAL AND METHODS: Seventy-four samples previously known results were tested using four commercial kits ANA HEp-2 kits. The statistical evaluation was carried out with STATA® 9.2 software and the concordance among the results was assessed with Kappa test. RESULTS: The concordance coefficient among the kits obtained with Kappa test was higher than 0.94. There was a great variability as to the number of mitosis per field on the reaction wells and the intensity of fluorescence conjugates. Concerning the required dilution to obtain a minimum reactivity (1+), there was a significant difference in two kits. CONCLUSION: The general concordance level obtained with Kappa test was higher than 0.94. The greatest differences were observed in samples with nuclear fine speckled (FS), nuclear dense fine speckled (DFS) and nuclear homogeneous (HOMO) patterns. As far as serum for minimum reactivity level and intensity of fluorescent conjugates are concerned, a better standardization is yet to be pursued.
Assuntos
Anticorpos Antinucleares , Autoanticorpos , Doenças Autoimunes/diagnóstico , Kit de Reagentes para Diagnóstico/normasRESUMO
OBJETIVO: O III Consenso Brasileiro para Pesquisa de Autoanticorpos em Células HEp-2 (FAN) objetivou discutir estratégias para controlar a qualidade do ensaio, promover a atualização das associações clínicas dos diversos padrões e avaliar as dificuldades de implantação do II Consenso ocorrido no ano de 2002. MÉTODOS: Nos dias 13 e 14 de abril de 2007 participaram do encontro em Goiânia pesquisadores e especialistas de diversos centros universitários e laboratórios clínicos de diferentes regiões do Brasil, com o propósito de discutir e aprovar as recomendações que visam a melhores padronização, interpretação e utilização do ensaio pelos clínicos. Foram convidados como ouvintes representantes comerciais de diferentes empresas produtoras de insumos para realização do teste de FAN. RESULTADOS E CONCLUSÃO: Dada a heterogeneidade de microscópios e reagentes disponíveis no mercado, o III Consenso enfatizou a necessidade do controle de qualidade em ensaios de imunofluorescência indireta. Foram também feitas algumas adequações na terminologia utilizada para classificar os diferentes padrões. Finalmente, foi realizada uma atualização das associações clínicas com finalidade de facilitar cada vez mais o melhor uso do ensaio pelos clínicos.
OBJECTIVE: The Third Brazilian Consensus for Autoantibodies Screening in HEp-2 Cells (ANA) had as purpose the evaluation of difficulties in the accomplishment of the 2nd Consensus recommendations that took place in the year of 2002, the discussion of strategies for quality control of the assay and the discussion of an update of the clinical associations of the several immunofluorescent patterns. METHODS: Several ANA experts from university centers and private laboratories in different areas in Brazil joined the workshop in Goiânia on 2007 April 13 and 14 with the purpose of discussing and approving the recommendations for standardization, interpretation and use of the test by physicians. Commercial representatives of different ANA slide brands were also invited as listeners to the workshop. RESULTS AND CONCLUSION: The 3rd ANA Consensus emphasized the need for quality control in indirect immunofluorescent assays since there is a considerable heterogeneity of available microscopes and reagents. It also promoted adaptations in the previously approved terminology used to classify the different patterns and finally updated the clinical associations of the several patterns with the purpose of providing guidance for interpretation of the assay by clinical pathologists and assistant physicians.