Insulina regula a translocação nuclear de NF-κB p65, inflamação e morte celular em modelo experimental de sepse em camundongos diabéticos / Insulin regulates NF-κB p65 nuclear translocation, inflammation and cell death in septic diabetic mice

Sepse é uma resposta sistêmica e deletéria do indivíduo a uma infecção, sendo um importante problema de saúde pública. Pacientes diabéticos são bastante afetados representando cerca de 22% de todos os pacientes sépticos. A suscetibilidade para o desenvolvimento de sepse no diabetes, bem como a ação da insulina em modular alguns parâmetros imunológicos necessitam de maiores esclarecimentos O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com insulina em um modelo murino de diabetes e sepse. Camundongos C57BL/6 foram tornados diabéticos por administração de aloxana. Os seguintes parâmetros foram analisados vinte e quatro horas após a ligadura cecal e punção (CLP): (a) interleukine (IL)-6, IL-10, chemokine (C -C motif) ligand 2 (CCL2) e tumor necrosis fator (TNF ) -α no soro; (b) os níveis de IL-1ß, IL-6, TNF-α, IL-10, chemokine (C -X-C motif) ligand (CXCL)-1 e CXCL2 no lavado peritoneal (LPe) e broncoalveolar (LBA), bem como nos rins e fígado; (c) contagens celulares totais e diferenciais em LPe e LBA; (d) capacidade endocítica de neutrófilos e produção de espécies reactivas de oxigénio (ERO); (e) níveis de apoptose e necrose no baço e níveis relativos de células CD4+ e CD8+; (f) resultados histopatológicos de pulmão, rim e fígado; e (g) níveis de translocação nuclear de NF-κB p65. Camundongos diabéticos-CLP exibiram concentrações séricas aumentadas de TNF-α, IL-6, CCL2, IL-1, IL-6, CXCL1, CXCL2 e IL-10 e contagens de neutrófilos em LPe. A capacidade endocítica dos neutrófilos e a produção de ERO apresentavam-se reduzidas em animais CLP-diabéticos e os níveis de IL-6, TNF-α, CXCL1 e CXCL2 em LBA e IL-1ß, IL-6, CXCL1 e CXCL2 nos homogenados renais aumentaram diabéticos -CLP. O tratamento destes com insulina reduziu os nívies de citocinas séricas, aumentou a concentração de citocinas e a migração celular para o Lpe, restaurou a capacidade endocítica e a produção de ERO e reduziu a translocação nuclear NF-κB p65 no tecido renal. Estes dados sugerem que a insulina modula a produção/libertação de citocinas, regula a migração celular, a apoptose, a necrose e a translocação nuclear de NF-κB p65 na sepse induzida por CLP em camundongos diabéticos.

Sepsis is a systemic and harmful response of the individual to infection and is an important public health problem. Diabetic patients are greatly affected representing about 22% of all septic patients. The susceptibility to sepsis development in diabetic individuals and insulin action in modulating some immunological parameters require further clarification. The aim of this study was to evaluate the effects of insulin treatment in a mouse model of diabetes and sepsis. C57BL/6 mice were rendered diabetic by alloxan administration. The following parameters were analyzed twenty-four hours after a cecal ligation and puncture (CLP): (a) interleukin (IL)-6, IL-10, chemokine (C-C motif) ligand 2 (CCL2), and tumor necrosis factor (TNF) - α levels in serum; (b) IL-1ß, IL-6, TNF-α, IL-10, chemokine (C-X-C motif) ligand (CXCL)1 and CXCL2 levels in peritoneal lavage (PeL) and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, as well as in the kidneys and liver; (c) total and differential cell counts in PeL and BAL fluid; (d) neutrophil endocytic capacity and reactive oxygen species (ROS) production; (e) spleen cell apoptosis and necrosis levels and relative CD4+ and CD8+ T cell levels; (f) lung, kidney, and liver histopathological results; and (g) NF-kB p65 nuclear translocation levels. Diabetic-CLP mice exhibited increased serum TNF-α, IL-6, CCL2, IL-1, IL-6, CXCL1, CXCL2 and IL-10 concentrations and neutrophil counts in PeL fluid. Neutrophil endocytic capacity and ROS production were decreased in diabetic-CLP mice, and IL-6, TNF- α, CXCL1 and CXCL2 leves in BAL fluid and IL-1ß, IL-6, CXCL1 and CXCL2 levels in kidney homogenates were increased in diabetic-CLP mice. Treatment of these mice with insulin reduced serum cytokine levels increased cytokine and cell migration into PeL fluid, and restored neutrophil endocytic capacity and ROS production and NF-kB p65 nuclear translocation in the kidney. These data suggest that insulin modulates cytokine production/release, regulates cellular migration, apoptosis, necrosis and NF-kB p65 nuclear translocation in CLP-induced sepsis in diabetic mice.

Urine storage under refrigeration preserves the sample in chemical, cellularity and bacteriuria analysis of ACS / Armazenamento da urina, sob refrigeração, preserva a amostra nas análises químicas, celularidade e bacteriuria no EAS

INTRODUCTION: The analysis of urine abnormal constituents and sediment (ACS) comprises tests of great diagnostic and prognostic value in clinical practice. When the analysis of ACS cannot be performed within two hours after collection, the sample must be preserved in order to avoid pre-analytical interferences. Refrigeration is the most applied technique due to its cost effectiveness. Moreover, it presents fewer inconveniences when compared to chemical preservation. However, changes in ACS may also occur in samples under refrigeration. OBJECTIVE: To analyze the influence of refrigeration at 2 to 8ºC on the storage of urine samples within 24 hours. MATERIAL AND METHOD: A total of 80 urine samples were selected from patients admitted at Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) university hospital, which were tested for ACS at room temperature and stored under refrigeration for 6, 12 and 24 hours. RESULTS: The results showed that refrigeration proved to be effective when compared to samples kept at room temperature, inasmuch as the physical, chemical, microbial and cellularity features were preserved. Nevertheless, crystalluria was present after a 6- hour storage period. CONCLUSION: The tests revealed that cooling preserved cellularity and chemical characteristics of urine samples for up to 12 hours. Nonetheless, the precipitation of crystals was evident in this storage method. Thus, the possible consequences of storing urine samples for ACS test under these conditions should be included in the analysis report.

INTRODUÇÃO: A pesquisa de elementos anormais e sedimentoscopia na urina (EAS) compreende testes de grande valor diagnóstico e prognóstico na prática clínica. Quando a análise do EAS não puder ser realizada dentro de duas horas após a coleta da amostra, esta deve ser conservada para que interferências pré-analíticas sejam evitadas. A refrigeração é a técnica mais utilizada devido ao custo-benefício e por apresentar menos inconvenientes quando comparada com conservantes químicos. No entanto, alterações no EAS também podem ocorrer na amostra sob refrigeração. OBJETIVO: Analisar a influência da refrigeração entre 2 a 8ºC no armazenamento do EAS por um período de até 24 horas. MATERIAL E MÉTODO: Foram selecionadas 80 amostras de urina de pacientes internados no hospital da Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) testadas para EAS, à temperatura ambiente, e armazenadas sob refrigeração em 6, 12 e 24 horas. RESULTADOS: Os resultados mostraram que a refrigeração foi eficaz quando comparada com amostras mantidas à temperatura ambiente, já que as características físicas, químicas, da celularidade e da microbiota da urina foram preservadas. No entanto, a cristalúria se fez presente desde as 6 horas de armazenamento. CONCLUSÃO: Os testes demonstraram que a refrigeração preservou as características químicas e a celularidade da urina por até 12 horas. No entanto, precipitações de cristais mostraram-se evidentes neste método de armazenamento. Dessa forma, a sugestão de se relatar no laudo as possíveis consequências dessa forma de armazenamento de urina para o EAS pode ser importante.