Evaluación de la eficacia de la prueba de inmunodifusión en gel agar para la detección de anticuerpos contra el virus de la leucosis enzootica bovina / Assessment of the Efficacy of the Agar Gel Immunodiffusion Test for the Detection of Antibodies Against the Enzootic Bovine Leukosis Virus

contra el virus de la leucosis enzoótica bovina (VLEB), comparándola con el ensayo inmunoenzimático (ELISA). Se procesaron 360 muestras de suero bovino para ambas pruebas, siguiendo las indicaciones del fabricante. El grado de concordancia (GC), valores predictivos (VP) y razones de verosimilitud (RV) fueron determinados y analizados. El GC entre ambas pruebas resultó ser del 86,4%, con un coeficiente Kappa (K) = 0,7. La IDGA detectó una significativa (P<0,001) menor proporción (47,2%) de sueros positivos que el ELISA (60,8%). La sensibilidad de la IDGA resultó ser del 77,6% por debajo de lo deseado, mientras que tuvo un 100% de especificidad. El VP positivo de100% y la razón de verosimilitud positiva RV con valor indeterminado (∞), mostraron que ésta es una prueba segura para la identificación de bovinos infectados con el VLEB. Contrariamente, el VP negativo de 74,2% y la RV negativa de 0,2, indican que existe una baja probabilidad, de que los bovinos con resultados seronegativos alVLEB, estén realmente libres de la infección por el VLEB. Los resultados sugieren que la IDGA es una prueba adecuada para estudios epidemiológicos en poblaciones con alta prevalencia del VLEB, por ser baja la posibilidad de generar resultados falsos positivos. Sin embargo, en poblaciones de baja prevalencia, su uso estaría restringido, debido a la considerable probabilidad de emitir resultados falsos negativos. En consecuencia, el ELISA debería ser la prueba de elección en programas de erradicación. Este trabajo es una contribución para el control y erradicación de la leucosis enzoótica bovina, al aportar información que permite seleccionar la técnica más adecuada, según la situación epidemiológica de esa enfermedad en la zona y el objetivo sanitario que se persigan.

The efficacy of the agar gel immunodifusion test (AGID) for the detection of antibodies against the enzootic bovine leucosis virus (EBLV) was evaluated and compared with the ELISA test. A total of 360 bovine serum samples were tested for both tests, following the manufacturer instructions. The agreement degree (AD), predictive values (PV), and coefficient of probability (CP) were determined and analyzed. There was a good AD between both tests (86.4%; Kappa coefficient =0.7). The AGID test detected a significant (P<0.001) lesser proportion (47.2%) of positive sera than the ELISA test (60.8%). The AGID sensitivity was 77.6% lower than the expected, while there was 100% specificity. The positive PV of a 100% and the positive CP with an undetermined value (∞) showed that AGID is a safe test for the detection of cattle infected with EBLV. In contrast, the negative PV of 74.2% and the negative CP of 0.2 indicate that there is a slight probability that cattle, whose sera were negative to EBLV using the AGID, are really free of EBLV infection. These results suggest that AGID is a suitable test for epidemiological studies, inpopulations with high EBLV prevalence, due to the minor risk of producing false positive results. However in populations with low prevalence of the disease, the use of the AGID test would be restricted due to the high possibility of giving false negative results. Therefore, the ELISA should be the test selected for eradication programs. This work is a contribution to the control and eradication programs of the enzootic bovine leucosis, since it provides information which allows the selection of the most adequate technique, according to the epidemiological status of this disease in the zone and the sanitary target pursued.

seroprevalencia de la leucosis enzoótica bovina y su asociación con signos clínicos y factores de riesgo en rebaños lecheros del estado barinas, venezuela / Seroprevalence of Enzootic Bovine Leukosis and its Association with Clinical Signs and Risk Factors in Dairy Herds from Barinas State, Venezuela

Se realizó un estudio sobre la seroprevalencia de la leucosis enzoótica bovina (LEB) en 360 bovinos lecheros, representativos de los municipios Pedraza y Barinas del estado Barinas, Venezuela, durante el periodo comprendido entre julio y noviembre 2007. En todos ellos se evaluó la presencia de signos clínicos compatibles con LEB (caquexia, decaimiento, y tumefacciones en los ganglios linfáticos supraescapulares e inguinales superficiales). Se recolectaron muestras de sangre, para la detección de anticuerpos y la proporción de linfocitos, lo cual se hizo mediante la prueba de ELISA y por contaje de linfocitos, respectivamente, relacionándose el porcentaje de animales seropositivos con el hallazgo de signos, tumefacciones en los ganglios y valores linfocíticos. Adicionalmente, se evaluó la seropositividad entre sexos, grupos etarios y número de partos, como factores de riesgo, mediante la prueba de Chi cuadrado (X²). Se detectaron 219 de 360 (60,83%) bovinos con anticuerpos específicos contra el virus de la LEB (VLEB), indicando una prevalencia elevada de distribución uniforme, en ambos municipios. La proporción de animales seropositivos con signos clínicos resultó ligeramente superior (33,79%) a la de los seronegativos (19,86%), aunque estos valores no fueron estadísticamente significativos. De igual manera, no se encontraron diferencias entre los seropositivos y seronegativos, en cuanto a las tumefacciones detectadas en los ganglios detectados, indicando que la ausencia de ellas no implica ausencia de infección. Las elevadas proporciones de linfocitos en los bovinos seropositivos y seronegativos resultaron similares, revelando no estar relacionadas con la infección por el VLEB. Con respecto a los factores de riesgo, la edad y el número de partos, mostraron estar asociados con la presencia de anticuerpos (P=0,0030 y P=0,0001, respectivamente), mientras que para el sexo no se detectaron. Estos resultados representan una contribución al conocimiento del comportamiento de la LEB en Venezuela.

An investigation was conducted to study the seroprevalence of enzootic bovine leukosis (EBL) in dairy cattle from the municipalities of Pedroza and Barinas, located at the State of Barinas, Venezuela, from July to November 2007. A total of 360 dairy cows were used. In all animals, the presence of clinical signs compatible with EBL, such as emaciation, weakness, tumefaction in suprascapular and superficial inguinal lymph nodes, were assessed. Blood samples positive to antibodies against EBLV were collected, specific antibodies to EBLV and lymphocyte proportion in samples were determined through the ELISA test and lymphocyte count, respectively. The percentage of positive animals was related to clinical findings, tumors, and lymphocytes values. Additionally, seropositivity among sex, age groups, and calving number, considered as risk factors, were also analyzed using the Chi square (X²) test. Of a total of 360 animals, 219 (60.83%) were positive to EBLV antibodies, indicating an elevated prevalence of uniform distribution in both municipalities. The proportion of seropositive animals with clinical signs was slightly higher (33.79%), when compared to seronegative animals (19.86%), although these values were not statistically significant. Likewise, no differences were found between serpositives and seronegatives regarding tumefaction detected, indicating that absence of such tumefaction does not imply lack of infection. The elevated amount of lymphocytes in both seropositive and seronegative animals was similar, reflecting no relationship with the infection through the EBLV. Concerning risk factors, age and calving number showed to be associated with the presence of antibodies (P=0.0030 and P=0.0001, respectively). In contrast, such association was not found for the variable sex. These results represent a contribution to the comprehension of EBL behaviour in Venezuela.

Neospora caninum en un rebaño lechero y su asociación con el aborto / Neospora caninum in a dairy cattle herd and its association to abortion

Neospora caninum es uno de los agentes infecciosos que con frecuencia se reportan como causantes de abortos en la ganadería bovina. En Venezuela, apenas existen estudios puntuales sobre su grado de difusión, así como sobre su implicación en la fisiología de la gestación. A fin de contribuir al conocimiento de esta enfermedad, se llevó a cabo una evaluación para determinar su responsabilidad en la ocurrencia de abortos, para lo cual se seleccionó un rebaño con abortos endémicos, 11% en vacas y 20% en novillas, con edad promedio de 4,5 meses de gestación. Una muestra de 169 vacas (10%), 87 y 82 con y sin registros de abortos, respectivamente, fueron analizadas para la detección de anticuerpos específicos contra N. caninum, mediante la prueba de ELISA. La prevalencia resultó en 44%, confirmando la infección por el parásito. En el grupo con aborto 47 (54%) resultaron con anticuerpos específicos contra el protozoario, indicativo de infección, mientras que en el grupo sin aborto sólo 28 (34%). Se encontró una asociación importante entre la condición de infección con Neospora caninum y la ocurrencia de los abortos (P = 0,00934), indicando que N. caninum tuvo una elevada implicación en la etiología de los mismos. Los resultados de este trabajo son una contribución al conocimiento de la enfermedad.

Neospora caninun is one of the most frequent infectious organisms causing abortion in cattle. Nevertheless, few detailed studies have been done about this parasite in Venezuela. The present study was designed to assess the importance of bovine neosporosis for causing abortion in an infected herd, which has 11 and 20% of abortion in cows and heifers, respectively, most of them occurred at 4.5 months of gestation. A sample of 169 cows (10%), 87 and 82 with and without abortion, respectively, were tested for specific antibodies to N. caninum by ELISA. The prevalence was found to be 44% that confirmed the infection in the herd. A total of 47 of the aborted cows (54%) were seropositive to N. caninum indicating that they had been infected with the parasite, while only 28 (34%) of the non-aborted cows resulted infected. It was found a significant association between seropositivity to N.caninum and abortion (P = 0.00934), which revealed the role of Neospora caninum in the occurrence of the abortions. The result of this work is a contribution to the knowledge of the disease.

Identificación molecular de una cepa de herpesvirus bovino tipo 2 en Venezuela / Molecular identification of a bovine herpes virus type 2 strain in Venezuela

El herpesvirus bovino tipo 2 (HVB-2) es el agente responsable de la mamilitis bovina, enfermedad que puede ser confundida con la fiebre aftosa por las lesiones que ocasiona en la ubre y pezones de las vacas infectadas. Para investigar su presencia en el país, se procesaron con fines de diagnóstico virológico muestras de tejidos epiteliales de ubre, recolectadas de ocho vacas con sospecha clínica de fiebre aftosa. Todas las muestras resultaron negativas a fiebre aftosa y estomatitis vesicular, pero de una de ellas se aisló una cepa viral en cultivo primario de riñón fetal bovino, la cual ocasionó un efecto citopático característico al observado por la acción del virus HVB-2. Mediante la prueba de PCR se amplificó una banda de 422 pb, la cual se correspondió al producto esperado de acuerdo al protocolo empleado para el diagnóstico molecular de herpesvirus bovino tipo 2. El análisis por BLAST y la alineación de las secuencias del amplicon obtenido permitió confirmar la presencia de este virus en el país.

Bovine mamilitis is a viral disease which is caused by Bovine Herpes Virus type 2 (BHV - 2). This disease is difficult to differentiate of Food and Mouth Disease (FMD) because infected cows show vesicles and ulcerating lesions on teats and udder. In order to investigate if BHV-2 is present in Venezuelan cattle udder samples of eight cows undergoing clinical symptoms similar to FMD were taken and tested for viral diagnostic. All samples were negative to FMD and vesicular stomatitis, but a viral strain with cytopathic effect typical to BHV-2 was isolated from one of them when a primary cells culture of bovine kidney fetus was inoculated. The presence of BHV-2 was confirmed in Venezuela according with the cytopathic effect, the PCR product of 422 bp obtained by specific test and the significant alignments by BLAST.

Eficacia de la inmunoflorescencia indirecta para la detección temprana del virus de encefalitis equina Venezolana en cerebro de ratones lactantes / Efficacy of the indirect immunofluorescent test for early detection of venezuelan equine encephalitis virus in suckling mice brain tissue

El objeto del trabajo fue estandarizar y evaluar la eficacia de la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para detectar en forma temprana, antígeno del Virus de Encefalitis Equina Venezolana (VEEV) en cerebro de ratón lactante, utilizando la Fijación de Complemento (FC) como prueba de comparación. En principio, por IFI se detectó antígeno viral a las 10, 12 y 26 horas post inoculación (hpi) para las cepas P676, Lara 95 y TC-83, respectivamente. La sensibilidad de esta prueba para la cepa Lara-95, fue de 89 por ciento a las 24 hpi (período asintomático), en comparación con 32 por ciento para FC, indicando que la escasa cantidad de antígeno viral en las fases iniciales de la enfermedad se evidencia por la primera técnica. Además, la sensibilidad de ambas técnicas, en comparación con la prueba biológica, fue de 86 por ciento y 29 por ciento respectivamente. A las 36 horas post inoculación, en ratones con síntomas nerviosos evidentes, la sensibilidad y especificidad de ambas pruebas fue de 100 por ciento. Estos resultados indican que la inmunofluorescencia indirecta es una alternativa válida y eficiente para la evaluación de focos de Encefalitis Equina Venezolana, contribuyendo de esta manera con la vigilancia epidemiológica de la enfermedad.

Efecto de la infección con los virus de rinotraqueitis infecciosa bovina y diarrea viral bovina sobre la reproducción en bovinos no vacunados / Effect nof infectious bovine rhinotracheitis virus and bovine viral diarrhea virus infections on reproduction in a non-vaccinated cattle herd

Se realizó un estudio para determinar si las infecciones por los virus de rinotraqueitis infecciosa bovina (VRIB) y diarrea viral bovina (VDVB) afectaban el comportamiento reproductivo de un rebaño de alto mestizaje Brahman, no vacunado contra ambos virus. El manejo reproductivo se basó en una estación de servicio (ES) con inseminación artificial (IA), al inicio, y monta natural (MN) posteriormente. Para ello, una muestra de 80 vientres se categorizó en dos grupos para efectos de comparación: 1) Desempeño deficiente (DD) y 2) Desempeño ideal (DI), conformados por 35 y 45 animales, respectivamente. Todos los animales fueron objetos de monitoreo serológico para ambos virus, antes y durante la ES, medinte kits de ELISA comerciales (SVANOVA, Biotech). Los resultados muestran que el 51 por ciento de los animales, de ambos grupos, se infectaron con VRIB antes de la ES. El 26 por ciento de los animales de los grupos DD y el 16 por ciento del grupo DI se infectaron durante la ES y de los mismos, quedaron preñados y parieron normalmente el 78 y 100 por ciento, respectivamente. En relación al VDVB, el 86 por ciento y el 78 por ciento de los animales de los grupos DD y DI, respectivamente, se infectaron antes de la ES y, escasamente, 3 y 7 por ciento de ellos se infectaron durante la ES. La prueba de Fisher indicó que no hubo asociación entre la ocurrencia de infección por VRIB y VDVB con la condición de preñez (P menor o igual 0,62 y P menor o igual 0,60, respectivamente). Estos hallazgos indican que las infecciones por estos virus no interfirieron con el desempeño reproductivo del rebaño

Efecto del período de incubación virus/suero (1 y 24 horas) sobre la sensibilidad y especificidad de la prueba de seroneutralización para rinotraqueitis infecciosa bovina / Effect of virus/serum incubation period (1 and 24 hours) on the sensitivity and specificity of the serum neutralization test for infectious bovine rhinotracheitis

En base a reportes que señalan una baja sensibilidad de la prueba de seroneutralización (SN), con 1 hora de incubación, para Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (RIB), se realizó un ensayo para comparar el desempeño de la SN, para la detección de anticuerpos contra dicho virus, con dos períodos de incubación virus/suero (1 y 24 horas), usando como referencia un kit de ELISA. La concordancia de ambas pruebas de SN (1 y 24 horas) con el ELISA fue de 82 por ciento (kappa=0,77) y 98,5 por ciento (kappa=0,98), respectivamente. La sensibilidad y especificidad fueron de 66,7 y 100 por ciento, respectivamente, en 1 hora, en comparación con 100 y 96,6 por ciento en 24 horas. La seropositividad de 65 sueros bovinos probados por SN, en ambos períodos, se comparó entre sí, para lo cual los títulos seroneutralizantes se agruparon en 6 clases. El porcentaje de seropositivos fue menor con 1 hora que con 24 horas, 37 y 57 por ciento, respectivamente (0,05 > P > 0,02). El 96 por ciento de los sueros procesados con 1 hora quedaron agrupados en las clases 1 y 2, mientras que con 24 horas de incubación el 57 por ciento de ellos se ubicaron en la clase 6, correspondiendo ésta a la de mayores niveles de anticuerpos. Estos resultados indican que la prueba de SN, para detección de anticuerpos contra RIB, es más confiable cuando se utiliza un período de incubación de 24 horas

Evaluación de un ELISA para estudios epidemiológicos de rinotraqueítis infecciosa bovina a través de muestras de leche de cántaras / Evaluation of an ELISA for epidemiological studies of infectious bovine rinotracheitis virus by using bulk churn milk samples

Se llevó a cabo un estudio en cuatro fincas lecheras, a objeto de evaluar la utilidad de un Kit de ELISA comercial para estimar la prevalencia de anticuerpos contra el virus herpes bovino tipo 1 (VHB-1), mediante el análisis de muestras de leche de cántaras. Para ello se realizó un muestreo simultáneo de suero y leche en 80 vacas, durante un proceso de ordeño. Además, los productos del ordeño se acopiaron en siete cántaras, se registraron las vacas asignadas a cada cántara y se recolectó una muestra de leche de cada una de ellas. Las muestras de suero, leche individual de cántara se procesaron para la detección de anticuerpos contra el VHB-1 mediante el kit, siguiendo las recomendaciones del fabricante, quedando el Punto de Corte para la leche en 0,07. No se detectaron anticuerpos en ninguna de las 35 muestras de leche recolectadas de vacas que resultaron sin anticuerpos en suero. En relación a las vacas que resultaron seropositivas se observó un incremento en los anticuerpos en leche, a medida que se incrementaron los mismos en suero, lo cual fue indicativo de una tendencia hacia una relación lineal entre los valores de ambas variables, aunque no hubo correlación (r= 0,4324; P= 0,0348). Los títulos de anticuerpos de las muestras de leche de las cántaras mostraron una moderada asociación con las proporciones de vacas seropositivas cuyas leches se acopiaron en ella, lo que sugiere que es factible utilizar el kit de ELISA para estudios epidemiológicos de rinotraqueitis infecciosa bovina, a través de muestras de la leche de cántaras o tanque

Detección molecular de calcivirus entericos de bovino en Venezuela / Molecular identification of bovine enteric calciviruses in Venezuela

Caliciviruses are a well-established cause of respiratory, vesicular and hemorrhagic diseases in animals. In addition, these viruses are an important cause of enteric diseases in humans. Recently, molecular analysis of several bovine enteric calicivirus isolates indicated that they are genetically close to human enteric calicivirus. To investigate if bovine enteric caliciviruses circulate in Venezuela, 129 stool samples collected between 1994 and 2000 were assayed by reverse transcription-polymerase chain reaction amplification. The presence of calicivirus was confirmed in one of the samples analyzed, collected in the Lara State from a healthy calf, 2 months old. Phylogenetic studies based on partial RNA polymerase sequences indicated that the Venezuelan isolate (Bo/NV/Lara/2000/VE) is most closely related to the genogroup III, genus Noroviruses.

Comportamiento de las cepas del virus vivo modificado tipo "A" utilizadas para el control de la fiebre aftosa en Venezuela / Behavior of two strain of modified live viruses type \"A\" used to control of foot-and mouth disease in Venezuela

Se realizó un estudio de 2 cepas de virus vivo modificado de fiebre aftosa, subtipos A24 y A32, para determinar su inocuidad e inmunogenicidad frente a subtipos homólogos. En las pruebas de inocuidad, fueron inoculados 4 bovinos con 10 8,4 DL 50% RL de la cepa A24 por animal, vía intradermolingual, y un segundo grupo con igual número de bovinos con 10 8,3 DL 50% RL de la cepa A32 por vía intramuscular. Los resultados indicaron que la cepa A32 tiene escasa o ninguna patogenicidad, mientras que la cepa A24 mostró cierto grado de patogenicidad. Para medir la inmunogenicidad, se utilizaron las pruebas de Protección Ratón Lactante (PRL) y Protección a la Generalización Podal (PGP), utilizándose un grupo de 8 bovinos para cada cepa, los cuales fueron vacunados y revacunados con 60 días de intervalo, con 10 8,7 DL 50% RL de 10 8,5 DL 50% RL de las cepas A24 y A32, respectivamente. Seis bovinos susceptibles permanecieron sin vacunar como animales control. En primovacunación los índices de seroprotección obtenidos en las pruebas de PRL, indicaron que la cepa A24 confiere un 50% de protección y que la cepa A32 no induce protección, mientras que en postrevacunación la cepa A24 mostró un 100% de protección en contraste con un 50% de la cepa A32. En las pruebas de PGP, sin embargo, no se observó diferencia en la inmunogenicidad de las cepas estudiadas, las cuales mostraron un 100% de protección postrevacunación