A rapid and sensitive diagnosis of bovine leukaemia virus infection using the nested shuttle polymerase chain reaction

Bovine leukaemia virus (BLV) is the causative agent of enzootic bovine leukosis (EBL). In Argentina, where a program to eradicate EBL has been introduced, sensitive and reliable diagnosis has attained high priority. Although the importance of the agar gel immunodiffusion test remains unchanged for routine work, an additional diagnostic technique is necessary to confirm cases of sera with equivocal results or of calves carrying maternal antibodies.Utilizing a nested shuttle polymerase chain reaction, the proviral DNA was detected from cows experimentally infected with as little as 5 ml of whole blood from BLV seropositive cows that were nonetheless normal in haematological terms. It proved to be a very sensitive technique, since it rapidly revealed the presence of the provirus, frequently at 2 weeks postinoculation and using a two-round procedure of nested PCR taking only 3 hours. Additionally, the primers used flanked a portion of the viral genome often employed to differentiate BLV type applying BamHI digestion. It is concluded that this method might offer a highly promising diagnostic tool for BLV infection.

O Vírus da leucemia bovina (BLV) é o agente causal da Leucose Enzoótica Bovina (EBL). Na Argentina, iniciou-se um programa de erradicação da EBL. Neste estágio, é prioritário possuir uma ferramenta de diagnóstico confiável. Embora seja indiscutível a importância do teste de agar gel imunodifusão, empregado rotineiramente no diagnóstico serológico da EBL, faz-se necessária uma técnica de diagnóstico adicional capaz de confirmar os resultados duvidosos. Foi possivel detectar ADN proviral aplicando Nested-PCR em novilhos experimentalmente infectados com pequenas doses de sangue total (5ml) obtidas de um bovino BLV soropositivo. Esta técnica, cujo procedimento leva 3 horas, demonstrou ser muito sensível, uma vez que foi capaz de detectar a presença do provirus duas semanas após a inoculação. Os primers utilizados são os que detectam uma porção do genoma viral que geralmente é usado para diferenciar os tipos de BLV, utilizando a digestão com BamHI. Sugerimos que este método possa ser um instrumento válido para o diagnóstico precoce da infeção pelo BLV.

A rapid and sensitive diagnosis of bovine leukaemia virus infection using the nested shuttle polymerase chain reaction

Bovine leukaemia virus (BLV) is the causative agent of enzootic bovine leukosis (EBL). In Argentina, where a program to eradicate EBL has been introduced, sensitive and reliable diagnosis has attained high priority. Although the importance of the agar gel immunodiffusion test remains unchanged for routine work, an additional diagnostic technique is necessary to confirm cases of sera with equivocal results or of calves carrying maternal antibodies.Utilizing a nested shuttle polymerase chain reaction, the proviral DNA was detected from cows experimentally infected with as little as 5 ml of whole blood from BLV seropositive cows that were nonetheless normal in haematological terms. It proved to be a very sensitive technique, since it rapidly revealed the presence of the provirus, frequently at 2 weeks postinoculation and using a two-round procedure of nested PCR taking only 3 hours. Additionally, the primers used flanked a portion of the viral genome often employed to differentiate BLV type applying BamHI digestion. It is concluded that this method might offer a highly promising diagnostic tool for BLV infection.

Coinfección con toxoplasma gondii y virus de la inmunodeficiencia felina (FIV) / Toxoplasma gondii and feline immunodeficiency virus (FIV) coinfection

Se utilizaron 100 sueros de gatos provenientes de la ciudad de La Plata y alrededores con el fin de determinar la relación entre la infección con FIV y la infección con T. gondii. Los sueros se analizaron para determinar anticuerpos anti-FIV y anti-T. gondii por las pruebas de inmunobloting e inmunofluorescencia indirecta, respectivamente. Para el análisis de los resultados los sueros se clasificaron en cuatro grupos según presentaran o no anticuerpos anti-FIV y anti-T. gondii (Tox): Grupo 1) FIV+ Tox+; Grupo 2) FIV+ Tox-; Grupo 3) FIV- Tox+; Grupo 4) FIV- Tox-. Se establecieron tres categorías por grupo con respecto a los signos clínicos de los gatos estudiados. El porcentaje de sueros positivos a FIV y a T. gondii (34,5 por ciento, 19/55) fue significativamente mayor que el porcentaje de sueros positivos a FIV y negativos a T. gondii (17,7 por ciento, 8/45; p < 0,05, prueba exacta de Fisher). Los títulos de anticuerpos anti T. gondii fueron significativamente mayores en el Grupo 1 con respecto al Grupo 3. La distribución de los signos clínicos fue significativamente diferente entre los 4 grupos. El porcentaje de animales con signos clínicos potencialmente compatibles con FIV y/o toxoplasmosis fue: Grupo 1: 57,9 por ciento, Grupo 2: 75 por ciento; Grupo 3: 48,6 por ciento y Grupo 4: 27 por ciento. Los resultados del presente trabajo indican la asociación entre la infección con el FIV y la infección con T. gondii