Evaluation of umbilical cord mesenchymal stem cells labeling with superparamagnetic iron oxide nanoparticles coated with dextran and complexed with Poly-L-Lysine / Avaliação da marcação de células-tronco mesenquimais de cordão umbilical com nanopartículas superparamagnéticas de óxido de ferro recobertas com Dextran e complexadas a Poli-L-Lisina

Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da marcação de células-tronco mesenquimais obtidas da parede da veia do cordão umbilical com nanopartículas de óxido de ferro superparamagnéticas recobertas com dextran e complexadas a um agente transfector não viral denominado de Poli-L-Lisina. Métodos: A marcação das células-tronco mesenquimais foi realizada utilizando as nanopartículas de óxido de ferro superparamagnéticas recobertas com dextran complexadas e não complexadas a Poli-L-Lisina. As nanopartículas de óxido de ferro superparamagnéticas recobertas com dextran foram incubadas com o Poli-L-Lisina em um sonicador ultrassonico a 37ºC por 10 minutos, para a formação do complexo através de interação eletrostática. Em seguida, as células-tronco mesenquimais foram incubadas overnight com as nanopartículas de óxido de ferro superparamagnéticas complexadas e não com Poli-L-Lisina. Após o período de incubação as células-tronco mesenquimais foram avaliadas quanto à internalização do complexo nanopartícula de óxido de ferro superparamagnéticas /dextran/Poli-L-Lisina e nanopartícula de óxido de ferro superparamagnéticas /dextran através de ensaio citoquímico com azul de prússia. A viabilidade celular das célulastronco mesenquimais marcadas foi avaliada através do ensaio de proliferação celular utilizando o método de 5,6-carboxy-fluoresceinsuccinimidyl-ester e de morte celular através do método de anexinaiodeto de propídeo, ambos utilizando o recurso de citometria de fluxo. Resultados: Observamos nos ensaios citoquímicos que as célulastronco mesenquimais que foram marcadas com as nanopartícula de óxido de ferro superparamagnéticas /dextran sem a Poli-L-Lisina, não internalizaram com eficiência as nanopartículas devido pouca detecção de sua presença no interior das células. As células-tronco mesenquimais marcadas com o complexo nanopartícula de óxido de ferro superparamagnéticas /dextran/Poli-L-Lisina internalizaram com eficiência as nanopartículas devido à maior presença destas no interior das células. Os ensaios de viabilidade e morte celular demonstraram respectivamente que as células-tronco mesenquimais marcadas com as nanopartícula de óxido de ferro superparamagnéticas /dextran/Poli-L-Lisina continuam proliferando ao longo de sete dias e a porcentagem de células em apoptose inicial e tardia é baixa em relação à porcentagem de células vivas ao longo de três dias. Conclusão: Evidenciamos através de nossos resultados a necessidade da utilização da Poli-L-Lisina complexada com a nanopartícula de óxido de ferro superparamagnéticas /dextran para melhor internalização nas célulastronco mesenquimais. Paralelamente, demonstramos que este tipo de marcação não é citotóxico para as células-tronco mesenquimais já que os testes de morte e viabilidade celular mostraram que as células continuam vivas e proliferando.

Labeling of human mesenchymal stem cells with quantum dots allows tracking of transplanted cells engrafted in infarcted pig hearts / A marcação de células-tronco mesenquimais humanas com quantum dots possibilita a identificação de células transplantadas enxertadas em corações de porcos após o infarto do miocárdio

Objective: The purpose of this paper was to validate fluorescent quantum dots QD as a cell marker for tracking human mesenchymal stem cells in vivo, using a pre-clinical model of acute myocardium infarction. Methods: Human umbilical cord mesenchymal stem cells were isolated and expanded in vitro. Mesenchymal stem cells were labeled with QD 655. Myocardium infarction induction in pigs was performed by occluding the left descending coronary artery for 60 minutes, with a balloon catheter. One day after the myocardium infarction, intracoronary injection of mesenchymal stem cells was performed. One week after cell transplantation, the animals were killed; their hearts were removed and underwent histological examination Results: All the mesenchymal stem cells were labeled with QD 655. The labeling process did not affect viability, proliferation, and osteogenic and adipogenic differentiation potential of the cells. Labeled mesenchymal stem cells were easily tracked in the histological sections of the infarcted area. Cells were observed with a frequency of two per section, while no cells were observed in the remote myocardium. Conclusion: These results indicate that QD 655 labeling is an efficient tool for tracking mesenchymal stem cells in vivo

Objetivo: Avaliar uma nova modalidade de marcação celular com quantum dots QD fluorescentes em células-tronco mesenquimais humanas (CTM), transplantadas em um modelo pré-clínico de infarto agudo do miocárdio. Métodos: CTM de cordão umbilical humano foram isoladas e expandidas in vitro. CTM foram marcadas passivamente com o nanocristal QD 655. A indução do infarto foi realizada pela cateterização e oclusão por 60 minutos da artéria coronária descendente anterior esquerda sob fluoroscopia. Um dia após o infarto, CTM foram transplantadas por via intracoronária. Uma semana após o transplante de CTM, os animais foram sacrificados e os corações removidos e analisados histologicamente. Resultados: Todas as CTM foram efetivamente marcadas com QD 655. A marcação não afetou a viabilidade, a taxa de proliferação e a capacidade de diferenciação em osteoblastos e adipócitos das células. CTM marcadas foram facilmente identificadas em cortes histológicos das áreas de infarto/borda de infarto com frequência média de duas células por corte histológico, enquanto que na região remota não foi detectada qualquer marcação. Conclusão: Os resultados indicam que a marcação de CTM com QD 655 é eficiente para rastreamento de células mesenquimais in vivo

Mapeamento e caracterização do domínio ativatório da troponina T / Mapping and caracterization of the activation domain of troponin T

A regulação dependente de `Ca²+ï da atividade ATPásica da acto-miosina em concentrações fisiológicas de actina, tropomiosina e troponina ocorre exclusivamente na presença de troponina T (TnT). Nosso grupo demonstrou que um polipeptídeo correspondente aos primeiros 191 aminoácidos da TnT ativa a atividade ATPásica da acto-miosina na presença de tropomiosina e na ausência das outras duas subunidades do complexo troponina (TnI/TnC). Com o objetivo de mapear e caracterizar esse domínio ativatório da TnT, construímos fragmentos de TnT correspondentes às regiões compreendidas entre os resíduos de aminoácidos: 1-157 (TnT1-157), 1-76 (TnT1-76), 77-157 (TnT77-57), 77-191 (TnT77-191) e 158-191 (TnT158-191)...