RESUMO
The objective of this study was to detect and identify hepatitis E virus (HEV) strains in liver and bile samples from slaughtered pigs in the state of Paraná, Brazil. Liver and bile samples were collected from 118 asymptomatic adult pigs at a slaughterhouse in a major Brazilian pork production area. The samples were assayed using a nested reverse transcription-polymerase chain reaction protocol with primer sets targeting open reading frames (ORF)1 and 2 of the HEV genome. HEV RNA was detected in two (1.7%) liver samples and one (0.84%) bile sample using both primers sets. The HEV strains were classified as genotype 3b on the basis of their nucleotide sequences. These data suggest that healthy pigs may be a source of HEV infection for consumers of pig liver and slaughterhouse workers in Brazil.
Assuntos
Animais , Bile/virologia , Vírus da Hepatite E/isolamento & purificação , Fígado/virologia , Sus scrofa/virologia , Matadouros , Brasil , Vírus da Hepatite E/genética , Filogenia , Reação em Cadeia da PolimeraseRESUMO
The common occurrence of multiple papillomavirus infections has been shown in several studies involving the human host. However, investigations with the aim of identifying mixed papillomavirus infections in cattle have been conducted only recently. In the current work we describe a co-infection with two different bovine papillomavirus (BPV) types that was identified in a bovine teat papilloma. The skin wart was obtained from a cow belonging to a Brazilian beef herd. A PCR assay was carried out with the FAP primer pair, which amplifies a partial segment of the L1 gene (approximately 478 bp), and the amplicon was submitted to direct sequencing. Because nucleotide sequences with satisfactory quality scores were not obtained, the amplicon was cloned and further sequencing, involving ten selected clones, was performed. The sequence analysis of the cloned inserts revealed the presence of two different BPV types. BPV-1 (Deltapapillomavirus genus) was detected in six clones, while BPV-6 (Xipapillomavirus genus) was detected in four clones. This finding confirms the presence of BPV co-infection associated with cutaneous papillomatosis in cattle.
Em seres humanos, as infecções múltiplas pelo papilomavírus têm sido demonstradas em vários estudos. Em bovinos, somente recentemente foram conduzidas investigações com o objetivo de avaliar infecções mistas pelo papilomavírus. O presente trabalho teve como objetivo descrever a co-infecção por dois tipos de papilomavírus bovino (BPV) em um papiloma de teto. A amostra clínica foi obtida de uma vaca pertencente a um rebanho de corte localizado na região norte do estado do Paraná, Brasil. Inicialmente, a técnica de PCR foi realizada com o par de oligonucleotídeos iniciadores FAP, que amplificam um segmento do gene L1, sendo que o amplicon gerado foi submetido ao sequenciamento direto. Entretanto, como as sequências obtidas não apresentaram qualidade aceitável, o amplicon foi clonado e dez clones foram selecionados para um novo sequenciamento. A análise das sequências dos insertos revelou a presença de dois diferentes tipos de BPV. O BPV-1 (gênero Deltapapillomavirus) foi detectado em seis clones, enquanto o BPV-6 (gênero Xipapillomavirus) foi detectado em quatro clones. Esse resultado confirma a ocorrência da co-infecção pelo BPV associada a papilomas cutâneos em bovinos.
RESUMO
Cutaneous papillomatosis is a pathological condition commonly found in cattle and is characterized by the presence of benign proliferative tumors caused by bovine papillomavirus (BPV) infection. While multiple infections with human papillomavirus (HPV) are common in healthy and immunodeficient humans, studies with the aim of identifying mixed infections are still sporadic in veterinary medicine. The aim of this study is to describe the occurrence of multiple BPV infections in cattle affected by cutaneous papillomatosis. Fifteen skin warts were collected from at least two diverse anatomical regions of six bovines with papillomatosis belonging to three cattle herds from the Paraná state in Brazil. The BPV types present in the skin wart samples were determined by a PCR assay performed with the FAP primer pair for partial L1 gene amplification followed by direct sequencing or by cloning and sequencing of the inserts. Sequence analysis of the obtained amplicons allowed the identification of four characterized BPV types (BPV-1, -2, -6, and -8) and three previously described putative new BPV types (BPV/BR-UEL3, BPV/BR-UEL4, and BPV/BR-UEL5). Double infections were identified in four (A, B, D, and E) of the six animals included in this study. In this work, the strategy adopted to evaluate skin warts from diverse anatomical sites of the same animal allowed the identification of multiple infections with two or three different BPV types. The analysis of four animals belonging to a single cattle herd also showed the presence of six different viral types. These results clearly suggest that both multiple papillomaviral infection and a high viral diversity can be as frequent in cattle as in human beings.
A papilomatose cutânea é comumente observada nos rebanhos bovinos e caracterizada pela presença de tumores proliferativos benignos causados pela infecção pelo papilomavírus bovino (BPV). Enquanto a infecção múltipla pelo papilomavírus humano (HPV) é um achado comum tanto em seres humanos saudáveis quanto em pacientes com imunodeficiência, na medicina veterinária esses relatos ainda são escassos. O objetivo desse estudo foi descrever a ocorrência de infecções múltiplas pelo BPV em rebanhos afetados pela papilomatose cutânea. Quinze papilomas foram obtidos, de pelo menos duas regiões anatômicas diferentes, de seis bovinos com papilomatose e provenientes de três rebanhos de corte localizados no estado do Paraná, Brasil. Os tipos virais presentes nas lesões foram identificados por PCR, utilizando o par de oligonucleotídeos iniciadores FAP, seguidos de sequenciamento direto ou clonagem e novo sequenciamento dos insertos. A análise das sequências obtidas permitiu a identificação do BPV-1, -2, -6 e -8, além de supostos novos tipos (BPV/BR-UEL3, BPV/BR-UEL4, e BPV/BR-UEL5), descritos anteriormente. Infecções por dois tipos diferentes de BPV foram identificadas em quatro animais (A, B, D e E) dos seis incluídos nesse estudo. A estratégia adotada neste estudo permitiu a identificação de infecção múltipla por dois ou três diferentes tipos virais do BPV no mesmo animal. Além disso, a avaliação de quatro animais de um mesmo rebanho demonstrou a presença de seis tipos virais circulantes. Esses resultados sugerem que tanto as infecções múltiplas quanto a grande diversidade viral podem ser frequentes nos bovinos, assim como o observado nos humanos. O reconhecimento da multiplicidade e complexidade das infecções pelo BPV pode colaborar para o entendimento dos aspectos epidemiológicos, clínicos e imunológicos da papilomatose cutânea nos rebanhos bovinos.
RESUMO
Chlamydophila abortus (C. abortus) infection is related to reproductive failure in domestic ruminants. Although it has not been well characterized worldwide, this pathogen has already been identified in some European countries and in the USA. In Brazil, preliminary studies have shown serological evidence of C. abortus infection in herds with low antibody prevalence. Until now, the identification of C. abortus in biological samples from females presenting reproductive failures has not been described in Brazilian herds of domestic ruminants. The aim of this study was to evaluate the presence of the C. abortus in a collection of abortions from cattle (n=85), sheep (n=12), and goats (n=8), in samples of vaginal mucus from cows (n=13), sheep (n=90), and goats (n=20), and in semen from sheep (n=10) and goats (n=5). The specimens (n=243) were evaluated using a PCR assay developed to amplify the 16S-23S rRNA intergenic space of C. abortus. A PCR assay with an internal control, which amplifies a fragment from the ND5 gene of bovine mitochondrial DNA, was used in order to evaluate the efficiency of the DNA extraction and of the PCR reaction. All biological samples (n=243) included in this study were negative for C. abortus in the PCR assay. The internal control enabled the amplification of a product from the bovine mitochondrial ND5 gene in all cattle abortion samples (n=85). Given the serological evidence indicating the presence of C. abortus infection in Brazilian herds of domestic ruminants, and considering the wide sampling evaluated, the failure to identify C. abortus in this survey suggests that the frequency of clinical signs in infected animals may be low or even absent.
A infecção pela Chlamydophila abortus (C. abortus) em ruminantes domésticos está relacionada com distúrbios reprodutivos. Apesar de ainda pouco estudada em todo o mundo, a infecção já foi identificada em alguns países europeus e também nos EUA. No Brasil, estudos preliminares demonstraram evidências sorológicas da infecção em alguns rebanhos com baixa prevalência de anticorpos. Até o momento ainda não foi possível a identificação de C. abortus a partir de material biológico proveniente de fêmeas com problemas reprodutivos em rebanhos brasileiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença da C. abortus em uma coleção de abortos bovinos (n=85), ovinos (n=12) e caprinos (n=8), em amostras de muco vaginal bovino (n=13), ovino (n=90) e caprino (n=20), e em sêmen ovino (n=10) e caprino (n=5). As amostras biológicas (n=243) foram avaliadas por meio de técnica de PCR desenvolvida para a amplificação do espaço intergênico 16S-23S RNAr da C. abortus. Um controle interno da reação, que amplifica um fragmento do gene ND5 do DNA mitocondrial de bovino, foi utilizado para a avaliação da eficiência da extração e da amplificação do DNA nas amostras provenientes de abortamento bovino. Todas as amostras biológicas (n=243) incluídas nesse estudo resultaram negativas para a C. abortus na PCR. O controle interno da reação possibilitou a amplificação de um produto do gene ND5 mitocondrial bovino em todas as amostras de aborto bovino (n=85). Apesar de evidências,,sorológicas indicarem a presença da infecção por C. abortus em rebanhos de ruminantes no Brasil, e considerando o número de amostras biológicas avaliadas, a não identificação de C. abortus nesse estudo sugere que a frequência de sinais clínicos nos animais infectados pode ser baixa ou mesmo ausente.