Método fluorométrico para identificar agentes naturales citotóxicos y su aplicación en la evaluación de agentes antiparasitarios selectivos / Fluorometric method for the identification of cytotoxic natural agents and its application in the evaluation of selective antiparasitic agents

El ministerio de salud tiene como una de las prioridades en investigación a las enfermedades infecciosas, entre las que incluye a las leishmaniasis y la tripanosomiasis americana. En la Facultad Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas se estudian especies vegetales medicinales utilizadas por la cultura Tacana como fuente de agentes antiparasitarios potenciales. Los laboratorios dedicados al descubrimiento de moléculas naturales con actividad antiparasitaria, tienen el desafío de desarrollar protocolos que permitan detectar biomoléculas selectivas, efectivas y menos tóxicas que las disponibles. Por ende, las evaluaciones antiparasitarias in vitro (CI50), deberían ir acompañadas de evaluaciones de citotoxicidad (DL50), con el fin de calcular un Índice de Selectividad (IS=DL50 / CI50) como parámetro de especificidad biológica. La citotoxicidad fue medida sobre líneas de macrófagos (RAW 264.7, murino), células involucradas en las infecciones por parásitos intracelulares. El protocolo fluorométrico parte con una población de 5x104 células/mL, incubada a 37ºC en DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's médium), por 96 horas, con adición de resazurina (2mM) 3 horas antes de las lecturas finales. Bajo estas condiciones se evaluó la citotoxicidad de drogas control y 15 extractos vegetales seleccionados por su actividad anti-kinetoplastida. El extracto de Cosmailu fue el más citotóxico, Ejije bid'u resultó selectivo para T. cruzi y Leishmania amazonensis, mientras que Id'ene eidhue, fue selectivo para L. amazonensis. Finalmente, los otros 12 extractos resultaron ser poco selectivos o citotóxicos.

The Ministry of Health has infectious diseases as one of the research priorities, including leishmaniasis and American trypanosomiasis. The Faculty of Pharmaceutical and Biochemical Sciences develops evaluations of medicinal plant species used by the Tacana culture as a source of potential antiparasitic agents. Laboratories dedicated to the discovery of natural molecules with antiparasitic activity, have the challenge of developing protocols that allow the detection of selective, effective and less toxic biomolecules than those available. Therefore, in vitro antiparasitic evaluations (IC50) should be accompanied by cytotoxicity evaluations (LD50), in order to calculate a Selectivity Index (IS = LD50/ IC50) as a parameter of biological specificity. The cytotoxicity was measured on macrophage line (RAW 264.7, murine), cells engaged on intracellular parasites infections. The fluorometric protocol starts with an initial population of 5x104 cells/mL, incubated at 37ºC, in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's medium) for 96 hours with addition of resazurin (2mM) 3 hours, before final readings. Under these conditions the cytotoxicity of control drugs and 15 plant extracts, selected by their anti-kinetoplastid activity, was evaluated. Cosumailu extract was the most cytotoxic, Ejije bid'u was selective for T. cruzi, and Leishmania amazonensis, while Id'ene eidhue, was selective for L. amazonensis. Finally, the other 12 extracts were little selective or cytotoxic.

Incidencia de mycobacterium tuberculosis en muestras extrapulmonares procesadas por el ensayo MODS ­ TB en el Instituto SELADIS de junio del 2015 a diciembre del 2016 / Incidence of Mycobacterium Tuberculosis in Extrapulmonary Specimens Processed by the MODS - TB Assay Seladis Institute from June 2015 to December 2016

La tuberculosis extrapulmonar es una manifestación de la tuberculosis que se da cuando la bacteria Mycobacterium tuberculosis pasa del parénquima pulmonar a otros órganos por vía hematógena, linfática o por contigüidad. Entre diversos métodos de detección del bacilo de Koch en sitios diferentes al parénquima pulmonar, el ensayo de Susceptibilidad a Fármacos mediante Observación Microscópica para tuberculosis (MODS TB) consiste en un cultivo en medio líquido selectivo para M. tuberculosis y que permite además hallar el perfil de susceptibilidad a Isoniacida y Rifampicina. En este estudio se recurrió a los reportes del laboratorio de Microbiología Molecular del Instituto SELADIS, tomando en cuenta las muestras ingresadas de junio del 2015 a diciembre del 2016, hallándose los siguientes resultados: la incidencia de tuberculosis extrapulmonar es del 17,16% en muestras de origen extrapulmonar; el líquido cefalorraquídeo (LCR), líquido ascítico y líquido pleural son los tipos de muestra extrapulmonar con mayor incidencia de Mycobacterium tuberculosis (con 65%, 21,74% y 8,7% de resultados positivos respectivamente); los pacientes de género masculino, adultos (de 27 a 59 años de edad) y procedentes de la Ciudad de La Paz son los que presentan mayor incidencia de tuberculosis extrapulmonar. Los resultados de este estudio permiten tener un panorama de la situación de la tuberculosis extrapulmonar en La Paz, contando con la herramienta MODS TB, cuya sensibilidad y especificidad ha sido reportada en otros trabajos y ha sido validada en el laboratorio de Microbiología Molecular del Instituto SELADIS, donde se realizó este trabajo. La información proporcionada permitirá además aumentar el conocimiento científico ­ epidemiológico que se tiene de la tuberculosis extrapulmonar e incentivar la investigación en este campo.

Extrapulmonary tuberculosis manifests tuberculosis that happens when the bacteria Mycobacterium tuberculosis crosses the pulmonary parenchyma to other organs through hematogenous, lymphatic vias or by contiguity. Among diverse detection methods of the Koch bacillus in different place's trough pulmonary parenchyma, the Microscopic Observation Drug Susceptibility Assay (MODS TB) consists in a liquid medium selective culture for M. tuberculosis that allows finding susceptibility profiles for Isoniazid and Rifampicin. In this study we appealed to the Molecular Microbiology laboratory reports of SELADIS Institute, from June 2015 to December 2016. Found out the following results: the incidence of extrapulmonary tuberculosis is of 17,16% in samples of extrapulmonary origin; cerebrospinal fluid (LCR), ascetic liquid and pleural liquid are the kinds of extrapulmonary samples with the highest incidence of Mycobacterium tuberculosis (with 65%, 21,74% and 8,7% of positive results respectively); male patients, adults (from 27 to 59 years-old) and citizens from La Paz City showed a higher occurrence of extrapulmonary tuberculosis. The results of this study allow having an overview of extrapulmonary tuberculosis in La Paz. Counting with the MODS TB tool, wich sensitivity and specificity has been reported in other jobs and has been standardized at the Molecular Microbiology laboratory of SELADIS Institute, where this this research accomplished. The provided information will allow to increase the cientific ­ epidemiological knowledge that we have about extrapulmonary tuberculosis and encourage the research in this field.