Influência de diferentes sistemas e curvas de congelamento na congelabilidade e fertilidade do sêmen equino / Influence of systems and freezing curve in equine semen freezability and fertility

Avaliou-se o efeito de curvas de congelação nos parâmetros espermáticos e na fertilidade, usando sêmen de alta e baixa congelabilidade. Experimento 1 - utilizou-se sêmen de quatro garanhões resistentes à congelação: grupo 1, palhetas refrigeradas até 5°C e congeladas com curva de -8°C/min; grupos 2 e 3, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min.) e congeladas com curvas de -20°C/min e -10°C/min, respectivamente. Experimentos 2 e 3 - utilizaram-se cinco garanhões (Mangalarga Marchador), respectivamente, de alta e baixa congelabilidade: grupo 4, a mesma metodologia descrita no grupo 1; grupos 5 e 6, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min) e congeladas com curva de -20°C/min, entre 5°C e -60°C, e -10°C/min, entre -60°C e -100ºC (grupo 5), e -25°C/min, de 5°C até -100°C (grupo 6). O sêmen foi avaliado após descongelamento pelo método computadorizado. No experimento 1, não houve diferença nos parâmetros avaliados. No experimento 2, os parâmetros motilidade total (MT) e motilidade progressiva foram superiores aos do grupo 6 em relação ao grupo 4. No experimento 3, a MT foi superior no grupo 6 em relação ao grupo 4. As curvas de congelação mais rápidas apresentaram melhores parâmetros de cinética espermática, após a descongelação, para o sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador.(AU)

The effect of freezing curves on sperm parameters and fertility, using resistant and sensitive semen to cryopreservation, was evaluated. In experiment 1, Semen from 4 stallions resistant to freezing was used: Group 1, straws were cooled to 5°C and frozen with a curve of - 8°C/min; Groups 2 and 3, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with curves of - 20°C / min and - 10°C/min, respectively. In experiments 2 and 3, 5 stallions (Mangalarga Marchador) presenting respectively resistant and sensitive sperm to cryopreservation were used: Group 4, same methodology described for Group 1 was performed; Groups 5 and 6, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with a curve of - 20°C/min. between 5°C and - 60°C and -10°C/min. between - 60°C and - 100°C (Group 5) and - 25°C/min. 5°C to - 100°C (Group 6). Thawed-semen was evaluated by the computerized method CASA. In Experiment 1, there was no difference in the evaluated parameters. In Experiment 2, total motility (MT) and progressive motility (PM) were higher in Group 6 compared to Group 4. In Experiment 3, TM was higher in Group 6 than Group 4. The faster freezing curves showed better parameters of sperm kinetics after thawing, for the Mangalarga Marchador stallion semen.(AU)

Efeito da adição de plasma seminal oriundo de animais de alta e baixa fertilidade na criopreservação de espermatozoides da cauda do epidídimo e do ejaculado de garanhões subférteis / Effect of seminal plasma addition from high and low fertility animals on the cryopreservation of epididymal tail and ejaculated sperm from subfertile stallions

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e a viabilidade de espermatozoides do ejaculado (EJ) e do epidídimo (EP) de garanhões subférteis. Foram utilizados seis garanhões com histórico de subfertilidade. Após coleta, espermatozoides do ejaculado foram divididos em três alíquotas: BotuSêmen® (EJ-CT); plasma seminal de alta qualidade espermática (EJ-PS1); e plasma seminal de baixa qualidade espermática (EJ-PS2). O mesmo protocolo foi realizado com espermatozoides da cauda do epidídimo após orquiectomia (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Foram realizadas avaliações da cinética espermática pelo CASA e análises de integridade de membrana, acrossoma, fragmentação de DNA, capacitação espermática e peroxidação espermática por citometria de fluxo. Não foram observadas diferenças na cinética espermática entre EJ e EP, logo após a descongelação. Porém, foi observada maior (P<0,05) porcentagem de células com membranas plasmática e acrossomal íntegras nos grupos EP (EP-CT:31,7±7,5b; EP-PS1:35,2±7,0b; EP-PS2:33,9±7,2b) em comparação aos grupos EJ (EJ-CT:15,1±4,9a; EJ-PS1:11,7±4,5a; EJ-PS2:13,1±5,2a). Adicionalmente, foram observadas diferenças no índice de fragmentação de DNA (EJ-CT:2,6±0,6a; EJ-PS1:2,4±0,8a; EJ-PS2:3,0±0,8a; EP-CT:1,4±0,4b; EP-PS1:1,2±0,3b; EP-PS2:1,3±0,2b). Concluiu-se que a adição de 20% de plasma seminal, oriundo de animais férteis ou subférteis, previamente à congelação de espermatozoides epidídimários de animais subférteis não interfere na qualidade espermática.(AU)

The aim of this study was to compare the effect of the addition of seminal plasma from high and low fertility stallions on sperm viability of frozen-thawed sperm cells from ejaculate and from epididymal tail of subfertile stallions. Six stallions with a history of subfertility were used. After collection, ejaculate spermatozoa were divided into three aliquots: Botu-Semen® (EJ-CT); High-quality seminal plasma (EJ-PS1); Low-quality seminal plasma (EJ-PS2). The same was done with sperm cells from epididymis tail after orchiectomy (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Evaluations of sperm kinetics were assessed by CASA and membrane and acrosome integrity, DNA fragmentation, sperm capacitation and sperm peroxidation were assessed by flow cytometry. After thawing, no differences were observed between ejaculated sperm (EJ) and epididymal sperm (EP) in any CASA evaluations. However, higher (P< 0.05) percentage of cells with intact plasma and acrossomal membranes was observed in EP groups (EP-CT:31.7±7.5b; EP-PS1:35.2±7.0b; EP-PS2:33.9±7.2b) compared to EJ groups (EJ-CT:15.1±4.9a, EJ-PS1:11.7±4.5a, EJ-PS2:13.1±5,2a). In addition, differences in DNA fragmentation index were observed (EJ-CT:2.6±0.6a; EJ-PS1:2.4±0.8a; EJ-PS2:3.0±0.8a; CT:1.4±0.4b; EP-PS1:1.2±0.3b; EP-PS2:1.3±0.2b). It was concluded that the addition of 20% seminal plasma from fertile or subfertile animals prior to the freezing of epididymal spermatozoa from subfertile animals does not interfere in sperm quality.(AU)

Cooling of ejaculated and epididymal stallion sperm / Refrigeração de espermatozoides do ejaculado e epidídimo em garanhões

After a serious injury or sudden death, epididymis cauda sperm recovery and cryopreservation may present as the last opportunity to obtain genetic material from a valuable stallion. This study evaluated the viability of cooled equine sperm collected by three different methods: sperm of ejaculated (G1), sperm recovered from the epididymal cauda immediately after orchiectomy (G2) and sperm recovered from the epididymal cauda after storage for 24 hours at 5°C (G3). To obtain G1 sperm, two ejaculates were collected. After 1 week, all stallions underwent a bilateral orchiectomy, and one of the removed epididymides was flushed to obtain G2 sperm. The contralateral epididymis was stored at 5°C for 24 hours before being flushed to obtain G3 sperm. The sperm samples were evaluated immediately after the addition of the refrigeration extender, and after 24 and 48 hours of storage at 5°C. After 24 and 48 hours of storage, the epididymal sperm demonstrated higher motility traits when compared to the ejaculated sperm (P<0.05). These results indicate that sperm recovered from the epididymal cauda of stallions are more resistant to the cooling process, with higher kinetic parameters and plasma membrane integrity when compared to the ejaculated sperm.

A recuperação de espermatozoides da cauda do epidídimo pode ser a última chance para preservação do germoplasma quando ocorre morte súbita ou lesão grave em garanhões de alto valor genético. O presente trabalho comparou a viabilidade após refrigeração dos espermatozoides do ejaculado (G1), recuperados da cauda do epidídimo imediatamente após a orquiectomia (G2) e recuperados após armazenamento do epidídimo por 24 horas a 5ºC (G3). No G1 foram colhidos dois ejaculados. Uma semana após a colheita dos ejaculados os garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral e realizada a colheita dos espermatozoides da cauda do epidídimo de um testículo de cada garanhão (G2). O testículo contralateral permaneceu a 5°C por 24 horas, antes da recuperação espermática (G3). A análise das amostras foi realizada imediatamente após a adição do meio de refrigeração, e após 24 e 48 horas de armazenamento a 5°C. Após 24 e 48 horas de armazenamento, os espermatozoides do epidídimo demonstraram características de cinética maiores que os do ejaculado (P<0.05). Estes resultados indicam que espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo foram mais resistentes ao processo de refrigeração, com maiores parâmetros de cinética espermática e integridade da membrana plasmática quando comparados aos espermatozoides do ejaculado.

Morte embrionária precoce em éguas: aspectos clínicos e hormonais / Early embryonic death in mares: clinical and hormonal aspects

O presente estudo objetivou diagnosticar as causas da morte embrionária precoce em 128 éguas. Amostras de soro foram coletadas nos dias 4, 7, 10, 13, 16, 19, 21 e 30 após ovulaçäo, para dosagens hormonais e mensuraçöes do corpo lúteo. O diâmetro e as características da vesícula embrionária foram avaliados, através da ultra-sonografia, a partir do 12º dia pós-ovulaçäo. Das 128 éguas estudadas, 17 (13.28 por cento) apresentaram morte embrionária. O diâmetro do corpo lúteo, bem como as concentraçöes plasmáticas de progesterona, foi semelhante nos grupos que apresentaram morte embrionária e nos que mantiveram a gestaçäo. Os níveis de estrogeno plasmáfico foram mais elevados no grupo das fêmeas que mantiveram a gestaçäo. Os exames citológicos, microbiológicos e histopatológicos revelaram que a maioria das éguas com diagnóstico de morte embrionária eram portadoras de endometrites

Estudo microbiológico e citológico do trato genital de éguas / Microbiological and cytological study of the genital tract of mares

Estudou-se a flora microbiana de 810 amostras de "swabs" colhidos do trato genital de éguas de diferentes raças, com idades entre seis e 13 anos, durante o período de estro, e a citologia de esfregaços de secreçäo endometrial e a sensibilidade dos microrganismos isolados, frente a diferentes drogas antimicrobianas. Dos cultivos bacterianos realizados, 445 (54,9 por cento) foram isolados um ou mais microrganismos. Os mais frequente foram: Streptococcus sp (S. zooepidemicus 24,9 por cento, S. equisimilis 6,1 por cento, S. faecalis 5,6 por cento e S. equi 4,0 por cento), Staphylococcus sp (S. aureus 13,9 por cento, S. epidermidis 6,5 por cento e S. intermedius 3,1 por cento), Escherichia coli (E. coli näo hemolítica 8,5 por cento e E. coli beta hemolítica 3,8 por cento), Rhodococcus equi 7,4 por cento, Klebsiella pneumoniae 3,8 por cento, Candida albicans 3,4 por cento, Acinetobacter calcoaceticus 2,5 por cento, Pseudomonas aeruginosa 2,2 por cento, Proteus mirabilis 1,8 por cento, Alcaligines faecalis 1,6 por cento, Nocardia asteroides 0,7 por cento e Pasteurella hemolytica 0,4 por cento. A associaçäo entre os resultados obtidos nos exames microbiológicos e citológicos revelou x2 = 280,128 (P<0,001) e coeficiente de associaçäo significativa Psi = 0,59, concluindo-se que existe associaçäo significativa entre os dois tipos de exames. Segundo os antibiogramas, as drogas que melhor agiram sobre a maioria dos microrganismos foram cloranfenicol e gentamicina

Estudo da técnica de coleta, congelaçäo e descongelaçäo de embriöes de caprinos (Capra hircus), da raça Saanen, portadores da translocaçäo 5/15 / Study of embryos colect technique, frozen and thawing of Saanen (Capra hircus), goats bearing 5/15 translocation

No presente trabalho foi realizado um estudo da técnica cirúrgica de coleta de embriöes na espécie caprina, utilizando-se doadoras heterozigotas para a translocaçäo 5/15, acasaladas com animal translocado. Simultaneamente foram observados aspectos técnicos inerentes à criopreservaçäo, descongelaçäo e cultivo das estruturas recuperadas. Frente ao tratamento superovulatório, o cio foi observado em 24 ou 48 horas após a remoçäo da esponja intravaginal e foram recuperadas 71 estruturas viáveis em 43 coletas. O 1-2 Propanodiol mostrou-se eficiente criopreservador, permitindo cultivo de todos os embriöes, fato näo observado quando utilizou-se o Glicerol. As aderências provocadas pelas repetidas coletas constituem-se no grande desafio no sentido de se aperfeiçoar a técnica, pois säo consideradas um fator limitante ao uso de doadores no início da vida reprodutiva

Modificaçöes na técnica de correçäo cirúrgica de dilaceraçäo perineal de 3§ grau em éguas / Modifications of surgical correction of the 3rd degree perineal laceration in mares

Em 52 éguas de diferentes raças e idades, praticou-se cirurgia corretiva de dilaceraçäo perineal de 3§ grau, com modificaçöes na técnica de GOTZE, na tentativa de restabelecer a anatomia do sistema reprodutor, bem como a vida reprodutiva destas fêmeas. Das éguas que sofreram a cirurgia, a totalidade (100//) retornou à reproduçäo, alcançando-se o índice máximo de fertilidade após inseminaçäo artificial ou cobertura. Os resultados obtidos pelo emprego da técnica proposta permite indicá-la como uma conduta correta e eficiente na recuperaçäo anátomo-funcional do genital de éguas com dilaceraçäo de períneo de 3§ grau

Influencia da centrifugacao sobre a motilidade do semen de equinos em resistencia termica e congelamento. / Influence of centrifugation on equine semen motility in thermal resistance and freezing

Os resultados mostraram que a centrifugacao e um metodo adequado para o nivelamento da grande variacao dos ejaculados de equinos e que o aumento da forca de 1000xg para 2000xg nao apresenta nenhum efeito sobre a qualidade dos espermatozoides. Alem disso, o numero de espermatozoides que permaneceram no sobrenadante apos centrifugacao de 2000xg por 5 minutos foi pequeno e a perda consequentemente diminuida. A centrifugacao mostrou um efeito positivo na intensidade da motilidade dos espermatozoides, alem do que intensificacao nao depreciou a qualidade do semen "in vitro".Com relacao a motilidade e a coloracao supravital, melhores resultados foram obtidos com as centrifugacoes do que com o semen que nao foi centrifugado (congelado)