Biofilm formation by Stenotrophomonas maltophilia isolates from device-associated nosocomial infections / Formación de biopelículas por aislamientos de Stenotrophomonas maltophilia recuperados de infecciones nosocomiales asociadas al uso de dispositivos médicos

Medical devices are often colonized by bacteria which may cause severe infections. The aim of this work was to evaluate biofilm formation by S. maltophilia isolates from device-associated nosocomial infections. The 13 local isolates exhibited different capacities of biofilm formation on hydrophilic and hydrophobic surfaces. All isolates formed strong biofilms in polystyrene microplates, while strong, moderate or weak biofilms were detected in borosilicate (BS) or polypropylene (PP) tubes. The proficiency of biofilm formation was better evaluated by the level of crystal violet staining expressed relative to the final culture density. The microscopic analysis of biofilms formed on glass coverslips revealed the presence of a matrix of exopolysaccharides and microcolonies typical of biofilm architecture. Isolates with increased adhesion to BS showed larger microcolonies. According to our results, twitching correlated well with attachment to the three abiotic surfaces tested, while swimming only showed a slight correlation with biofilm formation on PP. Poor correlation was observed between cell surface hydrophobicity and biofilm formation. One of the highest biofilm-producing isolates adhered to urethral catheters of different materials, and exhibited an increased resistance to oxidative stress, one of the common stresses encountered by bacteria during the infection process due to the immune response.

El objetivo de este trabajo fue evaluar la formación de biopelículas por parte de aislamientos de Stenotrophomonas maltophilia. Los 13 aislamientos locales evaluados mostraron diferente capacidad de formar biopelículas en superficies hidrofílicas e hidrofóbicas. Todos ellos formaron biopelículas fuertes en microplacas de poliestireno (PS), mientras que se observaron biopelículas fuertes, moderadas o débiles en tubos de borosilicato (BS) o polipropileno (PP). La medida del cristal violeta unido a la biopelícula expresada en función de la densidad final de los cultivos permitió una mejor evaluación de la eficiencia de formación de biopelículas. El análisis microscópico de biopelículas formadas sobre cubreobjetos mostró la presencia de una matriz de exopolisacáridos y microcolonias típicas de la arquitectura de las biopelículas. Los aislamientos con mayor adhesión a BS mostraron microcolonias de mayor tamaño. La motilidad asociada a superficies ( twitching) presentó buena correlación con la adhesión a BS, PP y PS, mientras que la motilidad asociada a flagelos solo correlacionó ligeramente con la adhesión a PP. La correlación entre la hidrofobicidad de la superficie bacteriana y la formación de biopelículas fue escasa. Uno de los aislamientos productores de biopelículas fuertes evidenció capacidad de adhesión a catéteres uretrales de diferentes materiales y mayor resistencia al estrés oxidativo.

Selección de variantes Bvg- de Bordetella pertussis / Selection of Bordetella pertussis Bvg- variants

Las cepas virulentas (Bvg+) de Bordetella pertussis expresan numerosos factores de virulencia. Estos factores están regulados por el locus bvg en respuesta a estímulos ambientales, a través del proceso reversible de modulación antigénica. A su vez, mutaciones en el locus bvg originan variantes avirulentas (Bvg-) que no expresan factores de virulencia en ninguna condición de cultivo. En este trabajo hemos seleccionado variantes espontáneas Bvg- de B. pertussis Tohama I y 10536, potencialmente útiles para el estudio de marcadores de virulencia, utilizando como medios selectivos Stainer-Scholte agarizado suplementado con 1 o/o de Casamino-acids (SSA-CAS) y Jones-Kendrick con 0,20 microgramos/ml de eritromicina (JK-Ery). Paralelamente hemos estudiado la eficiencia de recuperación de células de B. pertussis Tohama 1, 10536 y 40103 (cepas Bvg+) y de la cepa Bvg- 347 (control del fenotipo avirulento) en SSA-CAS y en Steiner-Scholte agarizado (SSA), y analizado el fenotipo de las células recuperadas a partir de ellos. Para la caracterización fenotípica se utilizaron los siguientes marcadores de fase virulenta: producción de hemólisis, producción de hemaglutininas y perfiles de proteínas de fracciones enriquecidas en membrana externa. Las tres cepas Bvg+ ensayadas mostraron diferente comportamiento en estos medios. B. pertussis Tohama 1 y 10646 no crecieron en SSA, mientras que la eficiencia de recuperación en el medio SSA-CAS fue inferior al 0,001 o/o, obteniéndose variantes Bvg- estables de la cepa Tohama 1, en cambio la cepa 10536 sufrió el fenómeno de modulación, ya que recuperó el fenotipo virulento al ser subcultivada en Bordel-Gengou. El medio JK-Ery permitió seleccionar variantes Bvg- estables de B. pertussis Tohama 1 y 10536. B. pertussis 40103 mostró alta eficiencia de recuperación en SSA y SSA-CAS y retuvo el fenotipo virulento en todos los medios ensayados. Por otra parte, B. pertussis 347, a pesar de ser avirulenta, presento una eficiencia de recuperación pobre en SSA y un crecimiento escaso en JK-Ery, corroborando que no todas las cepas Bv- adquieren la capacidad de crecer en medios que resultan inhibitorios para muchas cepas virulentas