Occurrence of anti-Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leptospira spp. antibodies in opossums (Didelphis spp.) in São Paulo State, Brazil / Ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e antiLeptospira spp. em gambás (Didelphis spp.) no estado de São Paulo, Brasil

Opossum (Didelphis spp.) is an omnivorous marsupial native to the Americas that shows synanthropic behavior in urban areas. Despite its proximity to domestic animals and humans, knowledge of its participation in the epidemiology of some zoonotic agents is substantial. This study aimed to determine the presence of antibodies against Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Leptospira spp. in blood samples collected from opossums in 18 municipalities in the state of São Paulo, Brazil, between 2003 and 2008. Blood samples from 343 opossums: Didelphis aurita (n = 256) and Didelphis albiventris (n = 87) were obtained. These were tested to detect antibodies against T. gondii, using the modified agglutination test (MAT-Toto; cutoff ≥ 25); Neospora spp., using the indirect fluorescent antibody test (IFAT; cutoff ≥ 25); and Leptospira spp., using the microscopic agglutination test (MAT-Lepto; cutoff ≥ 100). Frequency of anti-T. gondii, Neospora spp. and Leptospira spp. antibodies were in 22.7%, 1.5% and 3.5%, respectively. The serogroups-serovars of Leptospira spp. presenting positive MAT-Lepto reactions were: AutumnalisButembo; Mini-Mini; Ballum-Castellonis; Icterohaemorrhagiae-Icterohaemorrhagiae; Icterohaemorrhagiae-Copenhageni and Grippotyphosa-Grippotyphosa or Bananal. This study demonstrated that these zoonotic agents are circulating in opossum populations in the state of São Paulo. Therefore, investigations regarding the role of marsupials in the epidemiology of each of these diseases should be conducted, especially to understand the behavior of these animals as zoonosis maintenance hosts.(AU)

O gambá (Didelphis spp.) é um marsupial onívoro nativo das Américas que apresenta comportamento sinantrópico em áreas urbanas. Apesar da sua proximidade com animais domésticos e o homem, o conhecimento da sua participação na epidemiologia de alguns agentes zoonóticos é fundamental. Este estudo objetivou determinar a presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Leptospira spp. em amostras de sangue colhidas de gambás de 18 municípios do estado de São Paulo, Brasil, entre 2003 e 2008. Foram obtidas amostras sanguíneas de 343 gambás: Didelphis aurita (n = 256) e Didelphis albiventris (n = 87). As amostras foram testadas para detecção de anticorpos contra T. gondii, utilizando o teste de aglutinação modificado (TAM-Toxo; ponto de corte ≥ 25); Neospora spp., utilizando a reação de imunofluorescência indireta (RIFI; ponto de corte ≥ 25); e Leptospira spp., utilizando a soroaglutinação microscópica (SAM-Lepto; ponto de corte ≥ 100). As frequências de anticorpos contra T. gondii, Neospora spp. e Leptospira spp. foram 22,7%, 1,5% e 3,5%, respectivamente. Os sorogrupossorovares de Leptospira spp. que apresentaram soropositividade foram: Autumnalis-Butembo; Mini-Mini; Ballum-Castellonis; Icterohaemorrhagiae-Icterohaemorrhagiae; Icterohaemorrhagiae-Copenhageni e Grippotyphosa-Grippotyphosa ou Bananal. Esse estudo demonstrou que esses agentes estão circulando em populações de gambás no estado de São Paulo. Desta forma, investigações que visam determinar o papel dos marsupiais na epidemiologia de cada doença devem ser conduzidas, especialmente visando o entendimento do comportamento desses animais como hospedeiros dessas zoonoses.(AU)

Serologic and molecular diagnostic and bioassay in mice for detection of Toxoplasma gondii in free ranges chickens from Pantanal of Mato Grosso do Sul / Diagnóstico sorológico e molecular e bioensaio em camundongo para detecção de Toxoplasma gondii em galinhas de criação livre do Pantanal do Mato Grosso do Sul

The aim of this study was to investigate the occurrence of Toxoplasma gondii and compare the results obtained in the Modified Agglutination Test (MAT), Polimerase Chain Reaction (PCR) and bioassay in mice. In order to accomplish this, 40 free-range chickens from eight farms in neighboring areas to the Pantanal in Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, were euthanized and blood samples, brain and heart were collected. The occurrence of anti-T. gondii antibodies found in chickens was 67.5% (27 samples), considering as a cutoff point the dilution 1:5. Among the samples analyzed, 7 (25.9%) were positive in the dilution 1:5, 3 (11.1%) in 1:10, 2 (7.4%) in 1:20, 3 (11.1%) in 1:320, 1 ( 3.7%) in 1:640, 3 (11.1%) in 1:1280, 2 (7.4%) in 1:2560, 4 (14.8%) in 1:5120 and 2 (7.4%) in 1:10.240. From the mixture of tissue samples (brain and heart) from the chickens analyzed, 16 (40%) presented electrophoretic bands compatible with T. gondii by PCR (gene B1). In the comparison of techniques, 59.26% positivity in PCR was revealed among animals that were seropositive in MAT (cutoff 1:5). From 141 inoculated mice, six (4.44%) died of acute toxoplasmosis between 15 and 23 days after inoculation. Surviving mice were sacrificed at 74 days after inoculation, and a total of 28 cysts were found in the brains of 10 distinct groups. From the seropositive hens, 27 bioassays were performed and 11 (40.7%) isolates were obtained. A greater number of isolations happened in mice that were inoculated with tissues from chickens that had high titers for anti-T. gondii antibodies. Chronic infection in mice was observed in nine groups (33.3%) from five different properties. Among the surviving mice, 25.6% were positive for T. gondii in MAT (1:25). From mice positive in PCR, 87.5% were also positive in MAT. Among the PCR-negative mice, 5.2% were positive for T. gondii in MAT. It can be concluded through this study that the occurrence of infecton by T. gondii in the rural properties studied was high, that PCR directed to gene B1 does not confirm the viability of the parasite, but it can be used as a screening method for the selection of chickens infected by T. gondii, that the animals with titer greater than 10 must be prioritized for the selection of animals for bioassay, since for them, the chances of isolating the parasite are greater and that seroconversion in experimentally infected mice is not a good indicator for isolating the agent.

Os objetivos deste estudo foram investigar a ocorrência de Toxoplasma gondii e comparar os resultados obtidos no Teste de Aglutinação Modificada (MAT), Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) e o bioensaio em camundongos. Para tanto, 40 galinhas de criação livre de oito fazendas em áreas limítrofes ao Pantanal da Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, foram eutanasiadas e amostras de sangue, o cérebro e o coração foram coletados. A frequência de anticorpos anti-T. gondii encontrada nas galinhas foi de 67,5% (27 amostras), considerando como ponto de corte a diluição 1:5. Entre as amostras analisadas, 7 (25,9%) foram positivas na diluição 1:5, 3 (11,1%) em 1:10, 2 (7,4%) em 1:20, 3 (11,1%) em 1:320, 1 ( 3,7%) em 1:640, 3 (11,1%) em 1:1.280, 2 (7,4%) em 1:2.560, 4 (14,8%) em 1:5.120 e 2 (7,4%) em 1:10.240. A partir da mistura de amostras de tecidos (cérebro e coração) das galinhas analisadas, 16 (40%) apresentaram bandas eletroforéticas compatíveis com T. gondii por PCR (gene B1). Na comparação das técnicas, revelou-se 59,26% de positividade na PCR entre os animais soropositivos no MAT (ponto de corte 1:5). Dos 141 camundongos inoculados, seis (4,44%) morreram de toxoplasmose aguda entre 15 e 23 dias após a inoculação. Os camundongos que sobreviveram foram sacrificados 74 dias após a inoculação, sendo encontrados 28 cistos nos cérebros de 10 grupos distintos. Das galinhas soropositivas, foram realizados 27 bioensaios e obtidos 11 (40,7%) isolados. Um maior número de isolamentos ocorreu em camundongos que foram inoculados com tecidos de galinhas que tinham altos títulos de anticorpos anti-T. gondii. Infecção crônica em camundongos foi observada em nove grupos (33,3%) de cinco propriedades diferentes. Entre os camundongos que sobreviveram, 25,6% foram positivos para T. gondii no MAT (1:25). Dos camundongos positivos na PCR, 87,5% também foram positivos no MAT. Já entre os camundongos PCR negativos 5,2% foram positivos para T. gondii no MAT. Concluiu-se através deste estudo que a ocorrência de infecção pelo T. gondii nas propriedades rurais estudadas foi alta, que a PCR direcionada ao gene B1, não confirma a viabilidade do parasita, porém pode ser utilizada como método de triagem para a seleção de galinhas infectadas por T. gondii, que os animais com título maior que 10 devem ser priorizados para a seleção de animais para bioensaio, pois para eles, as chances de isolamento do parasita são maiores e que a soroconversão em camundongos infectados experimentalmente não é um bom indicador de isolamento do agente.

Ocorrência de parasitos gastrintestinais em fezes de gatos das cidades de Säo Paulo e Guarulhos / Occurrence of gastrointestinal parasites in feces of cats from the cities of Säo Paulo and Guarulhos

Amostras de fezes foram colhidas de 138 gatos, de idade, sexo e raça variadas, capturados nas ruas das cidades de Säo Paulo e Guarulhos, para determinaçäo da presença de parasitos gastrintestinais. Os animais encontravam-se alojados individualmente no Centro de Controle de Zoonoses dos Municípios de Säo Paulo (107 gatos) e Guarulhos (31gatos). As fezes foram colhidas individualmente e processadas pela técnica de flutuaçäo em soluçäo de sacarose (d=1,203g/cm³). Dentre os protozoários o agente mais freqüente foi o Cystoisospora felis, em 36 gatos (26,09 por cento), seguido pelo Cystoisospora rivolta, em 34 (24,64 por cento), pelo Cryptosporidium parvum, em dois (1,45 por cento) e pelo Sarcocystis spp. em um animal (0,72 por cento). Dentre os helmintos, Toxocara cati foi o de maior ocorrência, com 39 gatos positivos (28,26 por cento), seguido pelo Ancylostoma spp., com 12 gatos positivos (8,70 por cento) e pelo Platynosomun fastosum em dois gatos (1,45 por cento). A presença de proglotes de Dipylidium caninum foi observada em duas amostras, quando da colheita nas gaiolas, dado este certamente subestimado, uma vez que o encontro de cápsula ovígera em fezes é bastante raro, sendo o diagnóstico feito pela observaçäo de proglotes nas fezes frescas. Os parasitos estavam presentes em infecçöes múltiplas em 25 animais (18,12 por cento) sendo as ocorrências mais comuns T.cati com Cystoisospora spp. e T.cati com Ancylostoma spp., ambas com 7,97 por cento de ocorrência (11 amostras)