RESUMO
Objetivos: Identificar espécies de anofelinos presentes na região do Vale do Ribeira, Sudeste de São Paulo, e a circulação de plasmódios por estes anofelinos. Método: Foram utilizadas armadilhas CDC com atração luminosa e armadilhas de Shannon no período que compreende das 17:00 às 22:00 horas e atração por humano protegido realizadas das 9:00 às 12:00 horas durante três dias consecutivos em seis campanhas, realizadas de setembro de 2021 a novembro de 2022. Os espécimes capturados foram identificados morfologicamente, separados por espécie e tiveram seu DNA genômico extraído em grupos de até 10 mosquitos, considerando os métodos de captura, locais, datas e horas. Os grupos de DNA genômico foram analisados utilizando tecnologia de PCR em tempo real para amplificar fragmento de 157 a 165 pares de bases da unidade 18S do DNA ribossômico, que permite identificar a presença de plasmódios. As amostras positivas foram submetidas a técnicas de PCR aninhado de fragmento do gene citocromo b do genoma mitocondrial. De oito amostras analisadas, duas foram positivas e tiveram seus amplicons sequenciados empregando tecnologia de Sanger. Resultados: Foram coletados 5.577 mosquitos classificados no gênero Kerteszia (99,62%) e gênero Anopheles (0,38%), agrupados em 811 grupos. Foram identificados oito grupos positivos para plasmódios, sendo um para Plasmodium vivax / Plasmodium simium, um para Plasmodium malariae / Plasmodium brasilianum, dois para Plasmodium falciparum e quatro grupos positivos apenas para Plasmodium spp. O sequenciamento Sanger confirmou a infecção por P. vivax / P. simium em uma amostra, e P. malariae / P. brasilianum em outra. A proporção total de anofelinos infectados por Plasmodium spp. foi 0,5% (4/811), 0,2% dos anofelinos coletados apresentavam infecção por P. falciparum (2/811), 0,1% apresentavam infecção por P. vivax (1/811) e a mesma proporção de infectados por P. malariae (1/811). A razão mínima de infecção (RMI) para Plasmodium spp. nos anofelinos coletados foi 0,125, para P. vivax foi 0,02, assim como para P. malariae e, para P. falciparum foi 0,035. As estimativas de razão entre mosquitos infectados e mosquitos coletados foram 0,007 para Plasmodium spp., 0,0002 para P. vivax, 0,0005 para P. falciparum e 0,0005 para P. malariae. A razão de infecção absoluta por P. vivax foi 0,02 em março de 2022 e 0,01 por P. falciparum em novembro de 2022 no mesmo ponto de coleta. Conclusão: Foi identificada a presença de plasmódios zoonóticos em área de reserva da Mata Atlântica do sudeste brasileiro, onde a presença de hospedeiros humanos é restrita aos moradores, turistas, trabalhadores da reserva e pesquisadores. A densidade de mosquitos infectados por P. falciparum foi maior do que a de P. vivax e P. malariae. O encontro de mosquitos, naturalmente, infectados por estas espécies de plasmódios indica a necessidade de programas de educação ambiental delineados aos frequentadores e moradores da região da reserva e do entorno. Acresce considerar a necessidade de pesquisas detalhadas sobre as taxas de Plasmodium ocorrendo na área estudada e na Mata Atlântica, com sequenciamentos dos genomas das espécies que são encontradas em localidades diversas do Brasil e América Latina.
Objectives: Identify species of anophelines present in the Vale do Ribeira region, Southeast of São Paulo, and the circulation of plasmodia by these anophelines. Method: CDC light traps and Shannon traps were used in the period from 5:00 p.m. to 10:00 p.m. and attraction by protected human carried out from 9:00 a.m. to 12:00 p.m. for three consecutive days in 6 campaigns, carried out from September 2021 to November 2022. The captured specimens were morphologically identified, separated by species, and had their genomic DNA extracted in pools of up to 10 mosquitoes, considering capture methods, locations, dates and time. By utilizing real-time PCR technology, a 157 to 165 base pairs segment of the 18S ribosomal DNA unit was amplified to identify plasmodia within the genomic DNA pools. The positive samples were submitted to nested PCR techniques of cytochrome b gene fragment of the mitochondrial genome. Of 8 samples analyzed, two were positive and had their amplicons sequenced using Sanger technology. Results: A total of 5,577 mosquitoes belonging to the genus Kerteszia (99.62%) and to the genus Anopheles (0.38%) were collected, grouped into 811 pools. Eight positive pools for plasmodia were identified, one for Plasmodium vivax / Plasmodium simium, one for Plasmodium malariae / Plasmodium. brasilianum, two for Plasmodium falciparum and four pools positive only for Plasmodium spp. Sanger sequencing confirmed P. vivax / P. simium infection in one sample, and P. malariae / P. brasilianum in the other. The total proportion of anophelines infected with Plasmodium spp. was 0.5% (4/811), 0.2% of the collected anophelines had P. falciparum infection (2/811), 0.1% had P. vivax infection (1/811) and the same proportion of infected with P. malariae (1/811). The minimum infection rate (MIR) for Plasmodium spp. in anophelines collected was 0.125, for P. vivax was 0.02, as well as for P. malariae, and for P. falciparum it was 0.035. The ratio estimates between infected and collected mosquitoes were 0.007 for Plasmodium spp., 0.0002 for P. vivax, 0.0005 for P. falciparum, and 0.0005 for P. malariae. The absolute infection ratio for P. vivax was 0.02 in March 2022 and 0.01 for P. falciparum infection in November 2022 at the same collection point. Conclusion: The presence of zoonotic plasmodia was identified in a reserve area of the Atlantic Forest in southeastern Brazil, where the presence of human hosts is restricted to residents, tourists, reserve workers and researchers. The density of mosquitoes infected with P. falciparum was higher than that of P. vivax and P. malariae. The finding of mosquitoes naturally infected by these species of plasmodia shows the need for environmental education programs designed for visitors and residents of the reserve region and surroundings. In addition, consider the need for detailed research on the rates of Plasmodium occurring in the studied area and in the Atlantic Forest, with sequencing of the genomes of the species that are found in different locations in Brazil and Latin America.