Polymerase chain reaction for the laboratory diagnosis of aseptic meningitis and encephalitis

A protocol for testing cerebrospinal fluid specimens using a range of PCR assays for the diagnosis of central nervous system infection was developed and used to test prospectively 383 specimens. PCR assays were used for the detection of adenovirus, Borrelia burgdorferi, enteroviruses, Epstein Barr virus, cytomegalovirus, herpes simplex virus, human herpes virus type 6, JC virus, Leptospira interrogans, Listeria monocytogenes, lymphocytic choriomeningitis virus, measles virus, mumps virus, Mycobacterium sp., Mycoplasma pneumoniae, Toxoplasma gondii and varicella zoster virus. Of the 383 specimens tested in this study, 46 (12.0 percent) were found to be positive. The microorganisms detected were CMV, enterovirus, Epstein Barr virus, herpes simplex virus, human herpes virus type 6, JC virus, L. monocytogenes, Mycobacterium genus, Toxoplasma gondii and varicella zoster virus. The introduction of the PCR protocol described has improved the diagnosis of a range of central nervous system infections in our laboratory. We believe however that further evaluation of these assays in immunocompromised patients is necessary to better determine the predictive value of positive PCR results in these patient groups

Diagnóstico molecular das infecçöes do Sistema Nervoso Central pela Reaçäo em Cadeia da Polimerase (PCR) / Molecular diagnosis of Central Nervous System infections by Polimerase Chain Reaction (PCR)

A identificaçäo do agente etiológico é de fundamental importância no tratamento e prognóstico das infecçöes do Sistema Nervoso Central (SNC) porém, os métodos convencionais de diagnóstico tem limitado sucesso. A Reaçäo em Cadeia da Polimerase (PCR) tem possibilitado o diagnóstico de infecçöes virais,bacterianas e por protozoários de maneira mais rápida e precisa. O objetivo deste estudo foi implantar, em nosso serviço, uma rotina ágil para o diagnóstico molecular dos microorganismos que mais freqüentemente acometem o SNC. As amostras de líquor (LCR) foram testadas para 20 agentes infecciosos: Herpes simplex, Herpes zooster, Enterovírus, vírus da Linfocoriomeningite, vírus Epstein-Barr, Adenovírus, Herpes hominis tipo 6, Sarampo, Caxumba, Mycobacterium sp, Citomegalovírus, Toxoplasma gondii, vírus JC, Listeria monocytogenes, Borrelia burgdorferi, Mycoplasma pneumoniae, Leptospira interrogans, Neisseria meningitidis, Haemophylus influenzae e Streptococcus sp. A técnica usada foi o PCR "nested" com extraçäo do RNA ou DNA das amostras pelo método de Boom modificado. Em algumas reaçöes utilizou-se a combinaçäo de "primers" de patógenos diferentes ("multiplex"), possibilitando a pesquisa de até três microrganismos na mesma reaçäo, agilizando os resultados. Foram testadas 281 amostras de LCR suspeitos de meningite ou meningo-encefalite linfocitária ou asséptica. A PCR foi positiva em 18 amostras (6,4 porcento). microrganismos detectados foram: Mycobacterium sp, Herpes simplex, Citomegalovírus, Herpes hominis tipo 6 e Toxoplasma gondii. Em estudo paralelo com 22 amostras liquóricas de pacientes com meningite bacteriana, a PCR foi positiva em 21 casos (95,4 porcento). Os microrganismos encontrados foram: H. influenzae, Streptococcus sp e N. meningitidis. Em quatro pacientes com PCR positiva a cultura do LCR foi negativa. A introduçäo da técnica de PCR em nosso laboratório otimizou o diagnóstico etiológico das infecçöes do SNC e tem se revelado de grande importância clínica.