Proteoglycans production by aortic vascular smooth muscle cells from hypertensive rats

Remodeling of large and small arteries contributes to the development and complications of hypertension. Artery structural changes in chronic sustained hypertension include vascular smooth muscle cells (VSMC) proliferation and extracellular matrix (ECM) modifications. Extracellular constituents such as proteoglycans (PGs), may modulate vascular stiffness and VSMC growth and differentiation. We examined the effect of growth factors on secreted and membrane-bound PGs synthesis by cultured aortic smooth muscle cells (SMC) from 12- to 14- week-old spontaneously hypertensive rats (SHR) and age-matched Wistar rats. After stimulation with platelet-derived growth factor (PDGF-BB), 10% fetal calf serum (FCS) or 0.1% FCS as control, PGs synthesis (dpm/ng DNA) was evaluated in the medium (M-ECM) and in the cell layer (P-ECM) by a double-isotopic label method using both [3H]-glucosamine and [35S]-sodium sulfate which are incorporated into all complex carbohydrates or only into sulfated dysaccharides, respectively. Data are presented as percent of the control (0.1% FCS). SHR VSMC displayed a significantly greater synthesis of M-ECM [3H]-PGs than Wistar rat cells, with both treatments, but no differences in M-ECM [35S] uptake were found in any case. In the P-ECM, both PDGF-BB and 10% FCS produced a greater effect on [3H]-PGs and sulfated PGs synthesis in VSMC from SHR. An important change seen in SHR cells was a significant decreased sulfation, assessed by [35S]/[3H] ratio, in basal and stimulation conditions. Present results indicate the existence of changes in PGS synthesis and modulation in VSMC from a conduit-artery of SHR and support the pathophysiological role proposed for matrix proteoglycans in the vascular wall changes associated to hypertension and related vascular diseases as atherosclerosis.

Acumulación de actina y adherencia a células HEp-2 de cepas de Escherichia coli aisladas de niños con diarrea en Mendoza, Argentina / Actin accumulation and HEp-2 cell adherence assay for Escherichia coli isolated from children in Mendoza, Argentina

Entre los niños menores de 2 años atendidos en el Hospital Infantil H. Notti de Mendoza, Argentina, es frecuente la diarrea causada por E. coli. La identificación se realiza por medio de marcadores bioquímicos y seroagrupamiento con antisueros que incluyen la mayoría de los serogrupos tradicionales de E. coli enteropatógeno (EPEC). Aunque se ha comprobado que existen serogrupos O y serotipos H de E. coli comúnmente asociados a diarrea infantil, en algunos estudios existe discrepancia tanto en relación a su presencia en controles sanos, en cuanto a su clasificación como EPEC en estudios genotípicos con sondas de ADN. En este trabajo se comparó la información proporcionada por la metodología estándar con los patrones de adherencia a células HEp-2, de cepas obtenidas de coprocultivos de 140 niños menores de 2 años con diarrea aguda, prolongada y crónica. Se hizo un grupo control de 40 casos sin diarrea. Las cepas se clasificaron según serología positiva (+) y negativa (-) frente a antisueros polivalentes. Se identificaron 3 tipos de adherencia: localizada (LA), difusa (DA) y EAagg (agregativa). Además, se realizó la prueba denominada "Fluorescence Actin Staining" (FAS) que pone en evidencia la lesión característica de EPEC, denominada "attaching-effacing" (A/E) producida por la formación de un pedestal de filamentos de actina en el sitio de adhesión bacteriana, en tejido intestinal y células en cultivo. En diarreas agudas, la adherencia fue relacionada con la serología + (P=0,001). La presencia de LA en diarreas fue del 11 por ciento con predominio significativo en niños menores de 12 meses (P=0,0001) y serología + (P=0,0001). El 80 por ciento de estas cepas dieron positiva la prueba FAS. El patrón DA apareció en diarreas (29 por ciento P=0,0001) y controles (2,5 por ciento); EAgg sólo en diarreas (20 por ciento P=0,0001). Este trabajo postula que la patogenicidad no estaría restringida a serogrupos. Debido a la frecuencia del aislamiento de cepas enteroadherentes de las que no se conoce bien la patogenia y que no son detectadas por las pruebas fenotípicas estándares, sería importante complementar al laboratorio clínico con técnicas que evidencien factores de virulencia