RESUMO
Durante el transcurso de los últimos años se ha reportado un gran número de aplicaciones de la técnica FISH, la cual es utilizada en la detección de microorganismos en su propio hábitat sin que requieran de su previo aislamiento y purificación. La importancia de FISH radica en la capacidad que tiene la sonda de ADN de detectar una región específica del ácido nucleico de la célula microbiana y ser visualizada por microscopía de epifluorescencia. En esta revisión se describe los diversos usos que tiene FISH, que van desde la identificación de la microbiota en ambientes acuáticos y su empleo en la biorremediación hasta la detección de patógenos en el diagnóstico clínico. Asimismo, se presentan algunas limitaciones, y los posibles correctivos que se deben tener encuenta cuando se aplica esta técnica.
During these recent years, a large number of FISH technique applications have been reported. These techniques have been used in the detection of microorganisms in their own habitat without requiring their previous isolation and purification. The importance of FISH lies in the ability of the DNA probe to detect a specific region of the nucleic acid of microbial cells and to be visualized by epifluorescence microscopy. This review describes the various FISH uses ranging from the identification of the microbiota in aquatic environments and their use in bioremediation, to the detection of pathogens in clinical diagnosis. It also presents some limitations as well as the potential solutions to be applied when the FISH technique is used.
RESUMO
La hibridación in situ fluorescente (FISH), es una técnica que emplea sondas de oligonucleótidos marcadas con fluorocromos las cuales van dirigidas hacia secuencias específicas del ácido ribonucleico ribosomal (ARNr), lo que permite la identificación rápida y específica de células microbianas ya sea que estén como células individuales o se encuentren agrupadas en su ambiente natural. El conocimiento de la composición y distribución de los microorganismos en los hábitats naturales, proporciona un soporte sólido para comprender la interacción entre las diversas especies que componen el micro hábitat. El objetivo de la revisión es presentar la forma como ha evolucionado la hibridación, el empleo del ARNr como molécula diana, los tipos de marcaje, los marcadores fluorescentes empleados hoy en día, la metodología, así como las mejoras que se le han hecho a la técnica FISH al emplearse en conjunto con otras técnicas en la identificación microbiana. Salud UIS 2011; 43 (3): 307-316.
Fluorescence in situ hybridization (FISH), is a technique that uses oligonucleotides probes labeled with fluorochromes which are directed to specific sequences of ribosomal ribonucleic acid (rRNA), this allows the rapid and specific identification of microbial cells whether as individual cells or grouped cells in their natural environment. Knowledge of the composition and distribution of microorganisms in natural habitats provides a solid support to understand interaction between different species in the microhabitat. This review shows how hybridization has evolved, the use of rRNA as target molecule, the type of labeling, the labeled uses today in fluorescent and the methodology, as well as the improvements that have been made to the FISH technique when is used in conjunction with other techniques in microbial identification. Salud UIS 2011; 43 (3): 307-316.