Reports on in vivo and in vitro contribution of medicinal plants to improve the female reproductive function / Relatos sobre a contribuição in vivo e in vitro de plantas medicinais na melhora da função reprodutiva feminina

Medicinal plants are known as a prolific source of secondary metabolites which have important function both in vivo and in vitro during the ovarian folliculogenesis and steroidogenesis in many animal species. Some secondary metabolites can act as antioxidants generally through their ability to scavenge reactive oxygen species (ROS) or can regulate ovarian hormonal production. In general, these properties are responsible for the medicinal functions to treat woman infertility disorder. Some plants are constituted of biological actives substances which have been used to treat reproductive dysfunction. However, until recently, little was known about the implication of plants and/or their secondary metabolites on in vitro folliculogenesis and steroidogenesis. With the development of the technology, there is an increase implication of those substances in assisted reproductive technology (ART). The present review highlights some medicinal plants used in the treatment of woman disorders related to infertility. In addition, it provides an in vivo and in vitro overview of herbs and their active compounds with claims for improvement of ovarian activity thus showing their implication in female reproductive health care.(AU)

Sabe-se que as plantas medicinais são uma fonte abundante de metabólitos secundários que têm função importante tanto in vivo quanto in vitro durante a foliculogênese e a esteroidogênese ovarianas em muitas espécies animais. Alguns metabólitos secundários podem atuar como antioxidantes, geralmente através de sua capacidade de eliminar espécies reativas de oxigênio (ROS) ou podem regular a produção hormonal ovariana. Em geral, essas propriedades são responsáveis pelas funções medicinais usadas para tratar distúrbios da infertilidade feminina. Algumas plantas contêm substâncias biológicas ativas que têm sido utilizadas para tratar a disfunção reprodutiva. No entanto, até recentemente, pouco se sabia sobre o efeito das plantas e/ou seus metabólitos secundários na foliculogênese e na esteroidogênese in vitro. Com o desenvolvimento da tecnologia, há uma implicação crescente dessas substâncias na tecnologia de reprodução assistida (TRA). A presente revisão destaca algumas plantas medicinais utilizadas no tratamento de distúrbios femininos relacionados à infertilidade. Além disso, fornece uma visão in vivo e in vitro de ervas e seus compostos ativos com alegações de melhora da atividade ovariana, mostrando assim seu envolvimento nos cuidados de saúde reprodutiva feminina.(AU)

Importância das comunicações intercelulares para o desenvolvimento de folículos ovarianos / Intercellular communications in ovarian follicles

Durante a foliculogênese em mamíferos, ocorre um longo e complexo processo no qual o oócito adquire a competência necessária para a fecundação. Nesse processo ocorre uma comunicação metabólica bidirecional entre os oócitos e as células somáticas dentro do folículo que garante substratos para o oócito em desenvolvimento. Essa comunicação é mediada pelas junções celulares (junções comunicantes e junções aderentes) presentes nas projeções transzonais. As junções celulares e moléculas de adesão são responsáveis principalmente por promover a adesão entre as células foliculares; mas podem atuar em vias de sinalização celular e na regulação da transcrição gênica nas células somáticas e oócitos. Além disso, as junções comunicantes (junções gap) são canais intermembranares que intermediam a comunicação entre essas células através da passagem de pequenas moléculas. Essas junções comunicantes são compostas por proteínas denominadas conexinas; as conexinas 37 e 43 são as predominantes nos folículos ovarianos. Dessa forma, o conhecimento acerca das junções celulares é de extrema importância para o estudo da foliculogênese. A presente revisão teve como objetivo abordar os principais tipos de junções celulares existentes entre as células foliculares, com destaque para as junções gap e as principais proteínas de membranas (conexinas) presentes nos diferentes estágios do desenvolvimento folicular.

During the mammalian folliculogenesis, a long and complex process occurs, which the oocyte acquires the necessary competence for fecundation. In this process there is a metabolic bidirectional communication among the oocyte and somatic cells inside the follicle, which provides substrates for the oocyte developmental competence. This communication is mediated by cellular junctions (occlusions, adherens and gap junctions) localized in the transzonal projections. Cellular junctions and adhesion mollecules are responsable mainly for promoving the adhesion among follicular cells, however they can act in cellular signaling pathways and in regulation of genic transcription in the follicular cells and oocyte. Moreover, the communication junctions (gap junctions) are intermembrane channels that intermediate the communication among these cells through the passage of small molecules. These gap junctions are composed by connexins, of which the connexins 37 and 43 are the most frequently found in the ovarian follicle. Thus, knowledge of these cellular junctions are of great importance for studying the folliculogenesis process. The aim of this review was to report the main types of cellular junctions localized among the follicular cells, especially the gap junctions and the main membrane proteins (connexins) found in different stages of the follicular development.

Papel da homeopatia na regulação da foliculogênese in vivo e in vitro / Role of homeopathy in vivo and in vitro regulation of folliculogenesis

A homeopatia apresenta­se como uma excelente opção de baixo custo e toxicidade para uso na prática da reprodução tanto humana quanto animal. Entretanto, desperta um alto nível de ceticismo em relação a sua real eficácia, notadamente devido ao possível efeito placebo. O uso de modelos in vitro, como a tecnologia do ovário artificial, apresenta­se como uma ferramenta de grande precisão para dirimir tal controvérsia. Diante disso, esta revisão tem como objetivo fornecer algumas bases sobre a foliculogênese e sua regulação, relatar a importância do cultivo in vitro, com ênfase no hormônio folículo estimulante (FSH), na avaliação do papel dos medicamentos homeopáticos no tratamento de distúrbios reprodutivos ovarianos e no seu uso para melhorar as biotécnicas reprodutivas.

The homeopathy is a low­cost and toxicity alternative to using in the human and animal reproduction. However, the effect homeopathy awakens a skepticism about its effectiveness, because of the possible placebo effect. The in vitro models, as artificial ovary, is a excellent tool to resolve this controversy. Therefore, the aim of this review to provide some basis on folliculogenesis and its regulation, to report the importance of in vitro culture, with an emphasis on follicle stimulating hormone (FSH), in assessing the role of homeopathic medicines in treating ovarian reproductive disorders and its use to improve reproductive biotechnologies.

Impacto dos agentes antineoplásicos sobre os folículos ovarianos e importância das biotécnicas reprodutivas na preservação da fertilidade humana / Impact of antineoplastic agents on the ovarian follicles and importance of reproductive biotechnologies in the preservation of human fertility

A preservação da fertilidade de jovens mulheres em idade reprodutiva tem se tornado um dos grandes desafios da medicina, já que a maioria dos tratamentos contra o câncer pode causar insuficiência ovariana prematura, devido à toxicidade ovariana dos agentes quimioterápicos.Com base nessa sensibilidade e com vistas a reverter ou minimizar os danos às células reprodutivas decorrentes da quimioterapia, cada vez se tornam mais frequentes os estudos e a busca tanto por opções para preservar a fertilidade feminina quanto por tratamentos para células cancerosas que sejam mais seletivos. Este artigo tem como objetivo apresentar uma visão geral sobre os danos causados pelos quimioterápicos à função ovariana e as possíveis opções para a preservação da fertilidade feminina em pacientes com câncer e as perspectivas em oncofertilidade. Foi feita uma pesquisa no banco de dados National Library of Medicine (PubMed), em que foram recuperados artigos publicados entre 1967 e 2015 sobre agentes quimioterápicos e seus danos à fertilidade feminina.

The preservation of fertility in young women of reproductive age has become a major challenge in medicine, since most cancer treatments can cause premature ovarian failure due to ovarian toxicity of chemotherapeutic agents. Based on this sensitivity it is necessary to revert or minimize damage to reproductive cells resulting from chemotherapy. It have become more frequent studies and researches for alternatives to preserve female fertility and treatments that are more selective for cancer cells. Currently there are several options for preservation of fertility in women undergoing chemotherapy treatments.This article aims to present an overview of the damage caused by chemotherapy ovarian function and possible options for preserving fertility in female cancer patients and prospects in oncofertilidade. A search on databases were searched for relevant articles: the National Library of Medicine (PubMed) and the Virtual Health Library. Articles published between 1967 and 2015 on chemotherapeutic agents and their damage on female fertility was held.

Bone morphogenetic protein-6 (BMP-6) induces atresia in goat primordial follicles cultured in vitro / A proteína morfogenética óssea-6 (BMP-6) induz a atresia em folículos primordiais caprinos cultivados in vitro

This study investigated the effects of bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) on in vitro primordial follicle development in goats. Samples of goat ovarian cortex were cultured in vitro for 1 or 7 days in Minimum Essential Medium (control medium) supplemented with different concentrations of BMP-6. Follicle survival, activation and growth were evaluated through histology and transmission electron microscopy (TEM). After 7 days of culture, histological analysis demonstrated that BMP-6 enhanced the percentages of atretic primordial follicles when compared to fresh control (day 0). Nevertheless, BMP-6 increased follicular and oocyte diameter during both culture periods. As the culture period progressed from day 1 to day 7, a significant increase in follicle diameter was observed with 1 or 50ng/ml BMP-6. However, on the contrary to that observed with the control medium TEM revealed that follicles cultured for up to 7 days with 1 or 50ng/ml BMP-6 had evident signs of atresia. In conclusion, this study demonstrated that BMP-6 negatively affects the survival and ultrastructure of goat primordial follicles.

O presente estudo investigou os efeitos da proteína morfogenética óssea-6 (BMP-6) no desenvolvimento in vitro de folículos primordiais caprinos. Amostras de córtex ovariano de cabras foram cultivados por 1 ou 7 dias em Meio Essencial Mínimo (meio controle) suplementado com diferentes concentrações de BMP-6. As taxas de sobrevivência, ativação e crescimento foram avaliadas por histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão (MET). Após 7 dias de cultivo, a análise histológica demonstrou que a BMP-6 aumentou o percentual de folículos primordiais degenerados no dia 7 quando comparados ao controle fresco (D0). Além disso, houve um aumento significativo do diâmetro folicular e oocitário em ambos os períodos de cultivo em todos os tratamentos na presença de BMP-6. Com a progressão do cultivo do dia 1 para o dia 7, nos tratamentos com 1 ou 50ng/ml de BMP-6, foi observado um aumento significativo no diâmetro folicular. Entretanto, contrário ao observado no meio controle, a MET revelou que os folículos cultivados nesses tratamentos apresentavam sinais evidentes de atresia. Em conclusão, esse estudo demonstrou que a BMP-6 afeta negativamente a sobrevivência e a ultra-estrutura de folículos primordiais caprinos.

Teste de toxicidade e criopreservação de folículos pré-antrais ovinos isolados utilizando Glicerol, Etilenoglicol, Dimetilsulfóxido e Propanodiol / Toxicity test and cryopreservation of sheep isolated preantral follicles using glycerol, ethylen glycol, dimethil sulfoxyde and propanediol

O objetivo deste estudo foi avaliar foliculos pré-antrais (FOPA) ovinos isolados após sua exposição e criopreservação utilizando glicerol (GLI), etilenoglicol (EG), propanodiol (PROH) ou dimetilsulfóxido (DMSO) a 1,5 e 3,0 M. Cada par ovariano de 5 ovelhas sem raça definida foi coletado em abatedouro local e submetido ao isolamento folicular. Da suspensão obtida, uma aliquota foi imediatamente destinada à análise da viabilidade folicular com o auxílio do corante vital azul de trypan. O restante da suspensão foi dividida em 16 aliquotas de 0,9 mL, suspensas (v/v) em MEM+ com EG, DMSO, GLI ou PROH a 1,5 ou 3,0 M, para teste de toxicidade e criopreservação. Após o término de cada tratamento, a viabilidade folicular foi analisada e os FOPA considerados viáveis se não corados ou não viáveis, quando corados. A análise dos dados mostrou que após o teste de toxicidade e criopreservação, em todos os crioprotetores e em ambas as concentrações, a percentagem de FOPA viáveis foi significativamente reduzida quando comparada ao controle. No teste de toxicidade, quando os crioprotetores foram comparados entre si nas mesmas concentrações, foram observadas percentagens signifIcativamente menores de FOPA viáveis no PROH 3,0 M (38,9%), apresentando-se, portanto, mais tóxico quando comparado aos demais crioprotetores. Após criopreservação, obteve-se percentagens significativamente maiores de foliculos pré-antrais viáveis quando o EG e o DMSO foram utilizados. Em conclusão, FOPA ovinos isolados podem ser criopreservados com sucesso utilizando-se D MSO e EG a 1,5 e 3,0 M.

The aim of this study was to evaluate isolated sheep preantral follicles (PF) after exposure and cryopreservation using glycerol (GLI), ethylene glycol (EG), propanediol (PROH) or dimethyl sulfoxide (DMSO) at 1.5 and 3.0 M. Each ovarian pair from 5 mixed breed adult sheeps was obtained at a local slaughterhouse and submited to follicular isolation. From the obtained suspension, one aliquot was immediately analysed with trypan blue. The remaining suspension was divided in 16 aliquots of 0.9 mL, suspended in (v /v) in MEM+with EG, DMSO, GLI or PROH at 1.5 or 3.0 M to the toxicity test and cryopreservation. After the end of each treatment, the follicular viability was analysed and the PF were classified as viable if not dyed or not viable if dyed with trypan blue. The analysis of the results showed that after the toxicity test and cryopreservation, using all cryoprotectants and at both concentrations, the percentage of viable PF was significandy reduced when compared to the control. At the toxicity test, when the cryoprotectants were compared at the same concentrations, the lowest percentage of viable preantral follicles was obtained when 3.0 M PRO H (38,9%) was used, being, more toxic when compared to the others cryoprotectants. After cryopreservation, significantly higher percentual of viable PF was observed when the EG and DMSO were used. In conclusion, sheep PF can be cryopreserved successfully using DMSO and EG at 1.5 and 3.0 M.

Degeneration rate of goat primordial follicles maintained in TCM 199 or PBS at different temperatures and incubation times

The present work has investigated the degeneration rate of goat primordial follicles in situ after preservation in PBS or TCM 199 at different temperatures and incubation times. For each animal the ovarian pair was divided into 19 fragments. One ovarian fragment was taken randomly and immediately fixed (control). The other 18 ovarian fragments were randomly distributed in tubes containing PBS or TCM 199 and stored at 4º, 20º or 39ºC for 4, 12 or 24h. The storage of ovarian fragments in PBS or TCM 199 at 20ºC for 12h and 24h or at 39ºC, in all incubation times tested, increased significantly the percentage of degenerated primordial follicles (P<0.05). In contrast, for both media tested the degeneration rate of primordial follicles preserved at 4ºC for up to 24h and at 20ºC for 4h was similar to control values (P>0.05). In conclusion, this study shows that PBS was as efficient as TCM 199 in the preservation of goat primordial follicles in situ, being the best results observed at 4ºC

Preservation of goat preantral follicles in saline or coconut water solution

The present study investigated the efficiency of saline solution and coconut water solution in the preservation of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue, at different temperatures and for different incubation periods. At the slaughterhouse, the ovarian pair was divided into 19 fragments; one ovarian fragment was immediately fixed for histology (control-time zero). The other 18 ovarian fragments were preserved in both solutions at 4ºC, 20ºC or 39ºC for 4 h, 12 h or 24 h. The histological analysis showed that the storage of ovarian fragments in both solutions at 4ºC for up to 24 h kept the percentage of normal preantral follicles similar to the control values. In contrast, preservation at 20°C or 39ºC, in either solution, reduced significantly the percentage of normal preantral follicles compared to the control values, except in saline solution at 20ºC for 4 h or in coconut water solution at 20ºC for 4 h and 12 h. In conclusion, this study shows that both solutions can be used with the same efficiency to preserve goat preantral follicles at 4°C, irrespective of the incubation time. However, to preserve goat preantral follicles at higher temperatures, coconut water solution is recommended

Effect of 0.9 percent saline solution and phosphate buffer saline at different temperatures and incubation times on the morphology of goat preantral follicles

The present work investigated the efficiency of 0.9 percent saline solution and Phosphate Buffered Saline (PBS) in the preservation of goat preantral follicles in situ at different temperatures and incubation times. The ovarian pair of each animal was divided into 19 fragments. One ovarian fragment was taken randomly and fixed (control). The other 18 fragments were randomly distributed in tubes containing 0.9 percent saline solution or PBS at 4, 20 or 39 ºC for 4, 12 or 24 h. A total of 5,921 preantral follicles were examined. The quality of preantral follicles was evaluated by classical histology. The storage of ovarian fragments in 0.9 percent saline solution or PBS at 4 ºC did not reduce significantly the percentage of morphologically normal follicles when compared with the control, except after preservation in 0.9 percent saline solution for 24 h. The storage of ovarian fragments at 20 or 39°C reduced the percentage of normal preantral follicles when compared to the control, except after preservation in PBS at 20°C for 4 h. In conclusion, this study showed for the first time that goat preantral follicles can be stored in situ successfully at 4 ºC in 0.9 percent saline solution for 12 h and in PBS for 24 h, and at 20 ºC in PBS for 4 h