Standardization of a rapid quadruplex PCR method for the simultaneous detection of bovine, buffalo, Salmonella spp, and Listeria monocytogenes DNA in milk / [Padronização de um método rápido de PCR quadriplex para a detecção simultânea de DNA de bovino, bubalino, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em leite]

The objective of the present study was to Standardize a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for the authentication of bovine and buffalo milk, and to detect the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. For this, the target DNA was extracted, mixed, and subjected to a PCR assay. Milk samples were defrauded and experimentally contaminated with microorganisms to assess the detection of target DNA at different times of cultivation, bacterial titers, and concentration of genetic material. In addition, the protocol was tested with DNA extracted directly from food, without a pre-enrichment step. The proposed quadruplex PCR showed good accuracy in identifying target DNA sequences. It was possible to simultaneously identify all DNA sequences at the time of inoculation (0h), when the samples were contaminated with 2 CFU/250mL and with 6h of culture when the initial inoculum was 1 CFU/250mL. It was also possible to directly detect DNA sequences from the food when it was inoculated with 3 CFU/mL bacteria. Thus, the proposed methodology showed satisfactory performance, optimization of the analysis time, and a potential for the detection of microorganisms at low titers, which can be used for the detection of fraud and contamination.

O objetivo do presente estudo foi padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a autenticação de leite bovino e bubalino e a detecção da presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. Para isso, o DNA-alvo foi extraído, misturado e submetido ao ensaio de PCR. Amostras de leite foram fraudadas e contaminadas experimentalmente com os micro-organismos, para se avaliar a detecção do DNA-alvo em diferentes tempos de cultivo, os títulos bacterianos e a concentração de material genético. Além disso, o protocolo foi testado com DNA extraído diretamente do alimento, sem a etapa de pré-enriquecimento. A PCR quadriplex proposta mostrou boa precisão na identificação de sequências de DNA-alvo. Foi possível identificar simultaneamente todas as sequências de DNA no momento da inoculação (0h), quando as amostras estavam contaminadas com 2 UFC/250mL, e com seis horas de cultura, quando o inóculo inicial foi de 1 UFC/250mL. Também foi possível detectar diretamente as sequências de DNA do alimento quando este foi inoculado com 3 UFC/mL de bactérias. Dessa forma, a metodologia proposta apresentou desempenho satisfatório, otimização do tempo de análise e potencial para detecção de micro-organismos em baixos títulos, podendo ser utilizada para detecção de fraude e contaminação.

Quality and stability of oral extemporaneous formulations developed from commercial tablets containing spironolactone / Desenvolvimento e estudo de estabilidade de formulações extemporâneas de uso oral a partir de comprimidos comerciais contendo espironolactona

The purpose of this study was to develop extemporaneous liquid pharmaceutical formulations from commercial tablets containing spironolactone and to assess their stability for use in children or adults with difficulty in swallowing. The content and stability of spironolactone in the tablets, as well as in water, 1.5% carboxymethylcellulose (CMC) or simple syrup dispersions were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) analysis on a C18 silica column (250 mm ? 4.6 mm ? 5 ?m), with a mobile phase of methanol:water (75:25 v/v), flowing at 1 mL/min, and UV detection at 240 nm. The extemporaneous formulations were tested over a 35-day period at 8, 27, and 40 ºC. Drug content in the aqueous dispersion was far lower than expected, with significant fluctuations at all temperatures, owing to rapid sedimentation. The content proved adequate in aqueous 1.5% CMC dispersion at 27 ºC, with undesirable variations at the other temperatures. The syrup-based dispersion remained stable at all three temperatures, with suitable drug content and no significant variability. No degradation products were observed in any of the formulations. The syrup-based dispersion is easy to prepare, self-preserving, stable, palatable, offering satisfactory drug content per dose, and can therefore be recommended as an extemporaneous formulation for enhancing treatment adherence and effectiveness...

O objetivo desse trabalho foi desenvolver e avaliar a estabilidade de formas farmacêuticas líquidas extemporâneas, a partir de amostras comerciais (comprimidos), contendo espironolactona, para que possam ser empregadas em pacientes pediátricos ou adultos com dificuldade de deglutição. A metodologia empregada para a análise do teor e da estabilidade do fármaco espironolactona nos comprimidos e nas dispersões utilizando água, carboximetilcelulose (CMC) 1,5% e xarope simples foi a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), utilizando coluna de sílica C18 (250 mm x 4,6 mm x 5 μm), fluxo de 1 mL/min, comprimento de onda 240 nm e fase móvel metanol:água (75:25 v/v). As formulações extemporâneas foram analisadas durante 35 dias nas temperaturas de 8, 27 e 40 ºC. A dispersão aquosa apresentou teor muito abaixo do esperado, com variações significativas em todas as temperaturas, devido à rápida sedimentação. A dispersão aquosa de CMC 1,5% apresentou teor adequado na temperatura de 27 ºC com variações indesejadas nas demais temperaturas. A dispersão de xarope simples apresentou-se estável nas três temperaturas, com teor adequado e sem variações significativas. Não foi observado produto de degradação em nenhuma das formulações propostas. Por ser de fácil preparação, autoconservante, estável e de sabor agradável, a dispersão de xarope simples é a formulação extemporânea recomendada, pois garante teor satisfatório por dose e, portanto, favorece aumento à adesão e à eficácia do tratamento...