Bupropion and paraxetine do not affect natural killer cell activity in vitro / Antidepressivos inibidores seletivos de recaptação da serotonina e inibidores da recaptação de noradrenalina e dopamina não afetam a atividade celular natural killer in vitro

OBJETIVO: Avaliar o efeito citotóxico de dois antidepressivos comumente utilizados na prática, a paroxetina e a bupropriona. Além disso, buscou-se avaliar a atividade natural killer (ANK) após a incubação dos linfócitos com esses fármacos. MÉTODOS: Sangue venoso de 15 participantes foi coletado e as células mononucleares (PBMCs) foram separadas e incubadas por 24h com (ou sem = grupo-controle) concentrações de paroxetina e bupropiona em 30, 100 e 1.000 ng/ml. Após a incubação, a quantidade das células mortas foi contada utilizando-se o método trypan blue. Posteriormente foi avaliada a ANK por meio do ensaio clássico de liberação do Cr51. CONCLUSÕES: Ocorreu morte celular de PBMCs proporcionais às doses dos fármacos, no entanto, a ANK não foi afetada, mesmo com a redução do número de células efetoras.

Objective: This study aims to evaluate the citotoxic activity of two commonly used anti-depressants: paroxetine and bupropion. We also evaluated the in vitro natural killer activity (NKA) afterincubating the blood samples with the antidepressants. Methods: Peripheral blood samples from 15 healthy volunteers were collected and the mononuclear cells (PBMCs) were isolated and incubated for 24h with (or without = control cells) paroxetine and bupropion, in concentrations of 30, 100 and 1000 ng/ml. After the incubation period in both groups, the amount of dead cells was calculated using trypam blue technique. NKA was evaluated using the classic51Cr release assay. Conclusions: PBMCs dead cells occurred in both groups and in proportion to all pharmacological concentrations. Nevertheless, the NKA was not affected, even with the reduction in the number of effective cells.

Ouabain exacerbates activation-induced cell death in human peripheral blood lymphocytes

Quando linfócitos são ativados por lectinas mitogênicas apresentam mudanças do potencial de membrana, elevação das concentrações citoplasmáticas de cálcio, proliferação e/ou morte celular induzida por ativação (AICD). Concentrações baixas de ouabaína (um inibidor da Na,K-ATPase) suprimem a proliferação induzida por mitógenos e aumentam a morte celular. Para entender os mecanismos envolvidos, uma série de parâmetros foram avaliados usando sondas fluorescentes e citometria de fluxo. A adição de 100nM de ouabaína para culturas de linfócitos de sangue periférico ativadas por fitohemaglutinina (PHA) não modificou o aumento de expressão do receptor Fas ou de seu ligante FasL induzida pelo mitógeno. No entanto, o tratamento com ouabaína potenciou a apoptose induzida por um anticorpo anti-Fas funcionando como agonista. Um sinergismo entre ouabaína e PHA também foi observado com relação à despolarização da membrana plasmática. Com relação à membrana mitocondrial, PHA por si só não produziu despolarização, mas quando as células foram também expostas à ouabaina uma dissipação do potencial foi observado, mas isso foi um evento tardio. É possível que o efeito inibitório da ouabaína em linfócitos de sangue periférico ativados envolva a potencialização de alguns aspectos do processo apoptótico e reflita uma exacerbação do mecanismo de AICD.

Ciclosporina A e seus análogos como reversores da resistência a múltiplas drogas em células tumorais / Cyclosporin A and analogues as multidrug resistance modulating agents in tumour cell

A resistência a múltiplas drogas (MDR) é um dos principais obstáculos no tratamento quimioterápico de pacientes com câncer. O processo de resistência é multifatorial, mas o mecanismo mais bem caracterizado é a superexpressão da glicoproteína P (Pgp), uma proteína de membrana plasmática que funciona como uma bomba de efluxo levando a uma diminuição da concentração intracelular do quimioterápico. A circunvenção da resistência pode ser obtida utilizando-se agentes reversores capazes de inibir a atividade funcional da Pgp e de outras bombas de efluxorelacionadas. Nesta revisão, discutimos o uso do imunossupressor Ciclosporina A (CSA) e de seus análogos como agentes reversores da MDR. Aspectos como sua combinação com ciclofilinas, sua capacidade de inibir a atividade funcional da Pgp e seu uso clínico, especialmente em leucemias, são discutidos baseados tanto na literatura quanto em resultados dos próprios autores.

Atividade imunossupressora de preparaçöes de cicliosporina A em células mononucleares / Immunossupressive activity of cyclosporine A formulations in mononuclear cells

Compara a atividade imunossupressora in vitro de duas preparaçöes comerciais de ciclosporina A (Sigmasporin Microoral, da Sigmapharma, e Sandimmun Neoral, da Novartis) em células mononucleares de voluntários sadios e pacientes renais crônicos. Os dois medicamentos, em suas embalagens comerciais, foram solicitados a uma farmácia hospitalar, tranferidos para frascos indênticos e rotulados como ciclosporina 1 (CsA1) e 2 (CsA2) por pesquisador independente. Foi estabelecida uma curva de concentraçäo das duas preparaçöes, e avaliada sua capacidade de inibiçäo da proliferaçäo de células mononucleares induzida por fito-hemaglutina (PHA) em culturas de células mononucleres do sangue periférico e em sangue total obtidas a partir de voluntários sadios e, também, em sangue total de pacientes hemodialisados. O estudo demonstrou que as duas preparaçöes comerciais säo imunossupressoras com curvas semelhantes, embora estatísticamente diferentes no que se refere à inibiçäo da proliferaçäo de células mononucleares induzida por PHA em linfócitos do sangue periférico e em sangue total de pacientes hemodialisados nas concentraçöes testadas. As duas preparaçöes comerciais de ciclosporina apresentam atividade imunossupressora equivalente in vitro.(au)

Multidrug resistance in tumour cells: characterization of the multidrug resistant cell line K562-Lucena 1

Multidrug resistance to chemotherapy is a major obstacle in the treatment of cancer patients. The best characterised mechanism responsible for multidrug resistance involves the expression of the MDR-1 gene product, P-glycoprotein. However, the resistance process is multifactorial. Studies of multidrug resistance mechanisms have relied on the analysis of cancer cell lines that have been selected and present cross-reactivity to a broad range of anticancer agents. This work characterises a multidrug resistant cell line, originally selected for resistance to the Vinca alkaloid vincristine and derived from the human erythroleukaemia cell K562. This cell line, named Lucena 1, overexpresses P-glycoprotein and have its resistance reversed by the chemosensitisers verapamil, trifluoperazine and cyclosporins A, D and G. Furthermore, we demonstrated that methylene blue was capable of partially reversing the resistance in this cell line. On the contrary, the use of 5-fluorouracil increased the resistance of Lucena 1. In addition to chemotherapics, Lucena 1 cells were resistant to ultraviolet A radiation and hydrogen peroxide and failed to mobilise intracellular calcium when thapsigargin was used. Changes in the cytoskeleton of this cell line were also observed

Multidrug resistance in leukemias: the problem and some approaches to its circumvention

The phenomenon of multidrug resistance (MDR), representing cross-resistance among a number of unrelated chemotherapeutic drugs, is the major cause of chemotherapy failure in many tumors. It has been also detected in leukemias and in these cancers, as well as in many others, resistance can be reversed by a number of substances known as modulators or reversing agents. The capacity of identifying tumors resistant to chemotherapy could orientate the treatment employed. In leukemias, tumor cells are easily obtainable and many techniques have been used to evaluate resistance in these cells. Studying 42 leukemia patients we found a correlation of nearly 60 per cent among surface expression of P-glycoprotein, in vitro resistance reversal by cyclosporin A (CS-A) and extrusion of the rhodamine 123 dye. This latter assay has the advantage of measuring a functional aspect related to resistance (intracellular drug accumulation), being reproducible and affordable by most laboratories. The data generated by this assay were in accordance with those reported by other authors using different methods. To allow for an experimental approach in the study of MDR in leukemias, an in vitro model of a vincristine-induced erythroleukemia resistant cell line was established by us, and was shown to display MDR characteristics: resistance to unrelated drugs, surface expression of P-glycoprotein, extrusion of rhodamine 123 and resistance reversal by trifluoperazine, a reversing agent. Furthermore, this vincristine-resistant line was as sensitive to cell mediated lysis by natural killer (NK) cells as the parental line. Models like this one allow for the in vitro testing of new reversing agents, and when combined to in vitro tests for NK and LAK activity, may select for substances capable of modulating resistance without affecting a potentially useful cell mediated immunotherapy.

Espectro de atividade NK em um pequeno grupo populacional brasileiro / Spectrum of NK activity in a small Brazilian population group

Um painel de atividade NK nos indivíduos normais de nossa populaçäo foi obtido através da realizaçäo de 221 ensaios em 40 indivíduos, sendo 26 do sexo masculino e 14 do sexo feminino; um padräo próprio de atividade NK para as pessoas testadas com maior freqüência foi encontrado, apesar da grande variabilidade intra-individual. Näo foi encontrada diferença significativa entre a atividade NK de homens e mulheres e entre as diversas faixas etárias, sendo a literatura controversa em relaçäo a esses parâmetros. Apesar do pequeno número de indivíduos testados, nossos dados coincidem com os obtidos de populaçöes norte-americanas. A semelhança dos resultados apresentados pode decorrer do fato de a maioria de nossa amostra ser extraída de um padräo sócio-econômico elevado, näo apresentando problemas de desnutriçäo, embora envolvesse pessoas de diferentes origens étnicas

Estabelecimento de um método "in vitro" de controle biológico de agentes antineoplásicos em uso no Instituto Nacional de Câncer

O objetivo do presente trabalho foi desenvolver um método capaz de verificar a eficácia, a nível biológico, das drogas antineoplásicas, que näo necessitem de metabolismo prévio para sua açäo e que atualmente estäo sendo usadas no Instituto Nacional de Câncer (INCa). O princípio de ensaio foi baseado na medida de inibiçäo da proliferaçäo celular da linhagem K562 e de células ativadas por fitohemaglutinina (PHA), usando-se como marcador a incorporaçäo no DNA de timidina tritiada. Conclui-se que esse ensaio näo é adequado para testar a atividade antitumoral do Methotrexate, mas pode ser extremamente sensível para os estudos com derivados da Vinca