Presencia de Salmonella spp. en tortugas de río en cautiverio y en libertad en Urabá, Colombia / Presence of Salmonella spp in captivity and wild river turtles in Urabá, Colombia / Presença de Salmonella spp. em tartarugas de rio em cativeiro e em liberdade em Urabá, Colômbia

Resumen La salmonelosis es una enfermedad infecciosa de alta prevalencia a nivel mundial en la cual las tortugas han sido reconocidas como portadores crónicos. Diferentes estudios han reportado la presencia de Salmonella spp. en tortugas de río en diferentes países, sin embargo, ha sido poco reportada en individuos en libertad. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de Salmonella spp. en tortugas de río en cautiverio (n= 55) y en libertad (n= 50) en el Urabá antioqueño (Colombia) entre 2015-2016. Se incluyeron las especies Trachemys venusta, Rhinoclemmys melanosterna y Kinosternon leucostomum. Se tomó la muestra de materia fecal por hisopado cloacal, se cultivó y de las colonias aisladas se realizó extracción de ADN y reacción en cadena de polimerasa (PCR). De la población muestreada (n=105) se encontraron dos individuos positivos a Salmonella spp., ambos en cautiverio, machos, adultos y pertenecientes a la especie R. melanosterna. Los resultados obtenidos no excluyen la posibilidad de infección debido a la intermitencia en la excreción de la bacteria en heces. Esta investigación aporta evidencia a la presencia de la bacteria en las tortugas de la región de estudio y la necesidad de implementar medidas preventivas que disminuyan el contacto con estas especies, y por lo tanto la probabilidad de transmisión de salmonelosis no tifoidea en la población humana de la región.

Abstract Salmonellosis is a high prevalence infectious diseases worldwide and turties have been recognized as chronic carriers. Studies have reported the presence of Salmonella spp in river turtles in different countries; however, studies in wild individuals are less common. The objective of this study was to identify the presence of Salmonella spp in wild (n=50) and in captivity (n=55) river turtles in Uraba Antioqueño (Colombia) between 201 5-2016. Trachemys venusta, Rhinoclemmys melanosterna, and Kinosternon leucosto-mum were included. Feces samples were taken by cloaca swab׳ cultures were performed, and DNA extraction and PCR were made from the colonies isolated. From total population(n=105) two male, adults in captivity were positive, the specie was R. melanosterna. The results obtained do not exclude infection due to the intermittence in the excretion of the bacteria in feces. This research provides evidence of the presence of the bacteria in turtles from the region and highlights the requirement to implement preventive activities to reduce contact with these species, and decrease the probability of transmission of nontyphoidal salmonellosis in human population around the region.

Resumo Salmonelose é uma doença de alta prevalência mundial. As tartarugas são reconhecidas como portadoras crônicas. Em diferentes países tem sido relatado a presença de Salmonella spp. em tartarugas de rios embora, poucos são os estudos em indivíduos selvagens. O objetivo deste estudo foi identificar na região do Urabá Antioqueño (Colombia) nos anos 2015 e 2016 a presença de Salmonella spp. em tartarugas selvagens (n = 50) e em cativeiro (n = 55). Foram incluídas tartarugas das espécies Trachemys venusta, Rhinoclemmys melanosterna e Kinosternon leucostomum. Foi coletada por esfregaço cloacal e para cultura uma amostra de fezes. A partir das colônias isoladas foi realizada extração de DNA para testes moleculares (PCR). Da população total (n = 105) foram positivos do grupo de cativeiro dois machos adultos da espécie R. melanosterna. Devido à intermitência na excreção das bactérias nas fezes os resultados obtidos não excluem a infecção. Esta pesquisa fornece evidências da presença da bactéria em tartarugas da região do Urabá e destaca a necessidade de implementar atividades preventivas para reduzir o contato com essas espécies selvagens e diminuir a probabilidade de transmissão zoonótica de salmonelose não tifoidal na população humana da região.

Infección por Brucella canis en humanos: propuesta de un modelo teórico de infección a través de la ruta oral / Brucella canis infection in humans: Proposal of a theoretical model of infection through the oral route

La infección por Brucella canis en los humanos se ha reconocido recientemente como una zoonosis, pero frecuentemente es sub reportada debido a que los síntomas pueden confundirse con los de un resfriado común u otras infecciones causadas por otros patógenos. Los caninos son los hospederos primarios de Brucella canis ; el incremento en la tendencia de tener perros como mascotas podría también aumentar la posibilidad de transmisión de la infección a los humanos por el estrecho contacto entre la mascota infectada y su propietario. En Colombia, hay reportes de aislamientos de B. canis de caninos de criaderos y de un humano en contacto con perros infectados, al igual que reportes de caninos seropositivos a la infección. Sin embargo, no hay mucha información disponible sobre los mecanismos de interacción hospedero-patógeno que conduzcan al establecimiento de la infección por Brucella canis en perros y en humanos esta información es todavía menor. En esta revisión se propone un modelo para la infección humana con Brucella canis a través de la ruta oral utilizando la información disponible para otras especies de Brucella que infectan al humano, incluyendo B. abortu s y B. melitensis , que difieren de B. canis en la composición estructural de su lipopolisacárido. También se hipotetiza el mecanismo de infección celular que es usado por B. canis para invadir y establecer la infección en células no fagocíticas y fagocíticas.

Brucella canis infection in humans has recently been recognized as a zoonosis, but it is frequently under reported because the flu-like symptoms are often confused with the presence of other disease-causing pathogens. Dogs are the primary hosts for Brucella canis ; the increasing trend to adopt dogs as pets also enhances the likelihood of transmission of Brucella canis infection through contact between infected dogs and owners. In Colombia, there are reports of isolates of B. canis from kennel dogs and also from one human being along with seropositive results from dogs and humans. However, the mechanism of hostpathogen interactions leading to the infection of Brucella canis in dogs is still unknown and even less is known about human infections. This review proposes a model for human infection with Brucella canis through the oral route. We use the information available for other human-infecting Brucella species, including B. abortu s and B. melitensis, which differ from B. canis in the structural composition of the lipopolysaccharide molecule. The mechanism of cellular infection used by B. canis to invade and establish infection in nonphagocytic and phagocytic cells is also hypothesized.

Factores asociados con la seropositividad a Brucella canis en criaderos caninos de dos regiones de Antioquia, Colombia / Factors associated with Brucella canis seropositivity in kennels of two regions of Antioquia, Colombia / Fatores associados à soropositividade por Brucella canis em cães reprodutores em duas regiões no Estado de Antioquia, Colômbia

El objetivo fue determinar la seroprevalencia a Brucella canis en perros y humanos convivientes en criaderos caninos y explorar los factores de riesgo asociados a la seropositividad. Se tomaron 20 criaderos, en los cuales se realizó diagnóstico serológico por PARP-2ME de 428 caninos y 91 humanos. Se aplicó una encuesta para determinar los factores de riesgo y se analizaron los datos mediante regresión logística. Se determinó una seroprevalencia de 15% en caninos y 9% en humanos convivientes. Se determinaron como factores asociados a la seropositividad canina el historial de seropositividad canina, conservar los caninos seropositivos, historial de aborto, higiene y protección del operario deficientes durante el servicio reproductivo, y procedimiento inseguro durante la atención de abortos. Como factores protectores se establecieron la ubicación rural de los criaderos, facilidad de aseo de los caniles, PARP-2ME premonta, y procedimiento seguro durante la atención de partos. En humanos se determinaron factores asociados: criaderos ubicados en el Valle Aburrá y de tipo urbano.

The objectives of this study were to determine Brucella canis seroprevalence in dogs and in humans living near kennels and to explore risk factors associated with seropositivity. Twenty kennels were included in a serological survey with RSAT-2ME, and samples were collected from 428 dogs and 91 humans. An interview was applied to determine risk factors, and the data were analyzed using logistic regression. Seroprevalence was 15% in dogs and 9% in humans. Factors associated with current canine seropositivity were: history of canine seropositivity, non-culling of seropositive dogs, history of abortion, poor hygiene and personal protection during reproductive service, and unsafe procedures during care for abortions. Protective factors included: rural location of kennels, ease of cleaning kennels, pre-mating RSAT-2ME, and safe procedures during care for delivery. Factors associated with seropositive status in humans were: kennels located in Valle de Aburrá and urban location.

O objetivo desta pesquisa foi determinar a soroprevalência de brucelose dada por Brucella canis na população canina e os seres humanos que moram junto com os cães reprodutores, e explorar os fatores de risco associados à soropositividade.Vinte cães foram amostrados, nestes se fez o diagnóstico sorológico por PARP-2ME para 428 caninos e 91 pessoas. Para o estudo de fatores de risco associados à doença foi realizada uma análise por regressão logística. Encontrou-se uma soroprevalência de 15% e 9% nos caninos e humanos, respectivamente. Foram identificados como fatores de risco associados à soropositividade canina nos canis avaliados a história clínica com antigos diagnósticos de abortos e de soropositividade, conservar caninos que sejam soropositivos, a má higiene no canil e uma indumentária laboral insuficiente para o trabalhador que mexe com os cães, tanto durante o serviço reprodutivo quanto na atenção de abortos que possam ser inseguros. Encontraram-se como fatores de proteção nesta pesquisa as regiões rurais onde estava a incubadora, a facilidade de limpeza que possibilita uma melhor higiene dos canis, PARP-2ME pré-nupcial e procedimento seguro durante o parto. Em humanos foram determinados como fatores associados: criadores localizados no Valle Aburrá e do tipo urbano.

Diseño y evaluación de una prueba de PCR para detección de Brucella spp. y Brucella abortus / Design and evaluation of a PCR test for detection of Brucella spp. and Brucella abortus / Desenho e avaliação de um teste de PCR para a detecção de Brucella spp. e Brucella abortus

Resumen Problema: el diagnóstico oportuno de la brucelosis, zoonosis que afecta ganado y trabajadores pecuarios, es difícil. Las pruebas serológicas Rosa de Bengala y ELISA, el hemocultivo y mielocultivo, tienen sensibilidades entre 15-70% dependiendo del estadío de la infección. El desarrollo de métodos diagnósticos rápidos, sensibles y específicos utilizando técnicas moleculares como la PCR, permite diagnosticar y tratar oportunamente esta enfermedad. Objetivo: Desarrollar y evaluar dos pruebas de PCR para detección de Brucella spp. y B. abortus. Materiales y métodos: se diseñaron y evaluaron iniciadores para detectar el gen ugpA utilizando Primer3, y otros reportados en la literatura. Se calculó sensibilidad y especificidad, usando 3 grupos (G) de muestras humanas y bovinas utilizando el teorema de Bayes: G1:30 muestras de suero y 30 de sangre de humanos sanos y 30 de suero y 30 de sangre de bovinos sanos, inoculadas con Brucella abortus; G2: 30 muestras de suero y 30 de sangre de humanos sanos y 30 de suero y de 30 sangre de bovinos sanos inoculadas con Salmonella Typhi, Escherichia coli, Klebsiella sp., Psudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae y Enterococcus sp. G3: 60 muestras de suero y 60 sangre de bovinos y 60 muestras de suero y 60 sangre de humanos asintomáticos. Resultados: se obtuvo una sensibilidad y especificidad de detección de Brucella sp. y Brucella abortus del 100% en muestras humanas y bovinas. Conclusiones: por la alta sensibilidad y especificidad encontradas en las pruebas de PCR estudiadas, se recomienda continuar un estudio clínico de aplicación para evaluar su comportamiento en muestras de pacientes y animales infectados.

Abstract Problem: brucelosis is a zoonosis that affects livestock and livestock workers. This disease is characterized by the difficulties for its early diagnosis. Sensitivity of marrow and blood cultures as well as serological tests (Rose Bengal and ELISA) ranges between 15 and 70%, depending on the stage of infection. Development of rapid, sensitive, and specific diagnostic methods using molecular techniques such as PCR would allow timely diagnose and treatment of the disease. Objective: To develop and evaluate two PCR tests for detection of Brucella spp. and B. abortus. Materials and methods: primers to detect ugpA gene were designed and evaluated using Primer3 and others reported in the literature. Sensitivity and specificity were calculated for 3 groups (G) of human and bovine samples using Bayes' theorem. G1 consisted of healthy human and healthy bovine samples (30 serum and 30 blood samples of each species); bovine blood samples were inoculated with Brucella abortus. G2 consisted of healthy human and healthy bovine samples (30 serum and 30 blood samples of each); bovine blood samples were inoculated with Salmonella typhi, Escherichia coli, Klebsiella sp., Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumonia, and Enterococcus sp. G3 consisted of 60 serum and 60 blood samples from asymptomatic bovines, as well as 60 serum and 60 blood samples from asymptomatic humans. Results: sensitivity and specificity of the PCR test to detect Brucella sp. and Brucella abortus reached 100% in human and bovine samples. Conclusiones: considering the high sensitivity and specificity observed in the PCR tests studied, we recommend doing a follow up of the test in a clinical trial to evaluate its performance in infected humans and animals.

Resumo Problema: é difícil o diagnostico oportuno da brucelose, zoonose que afeta o gado e os trabalhadores pecuários. Os testes serológicos Rosa de Bengala e ELISA, e a hemocultura e mielocultura têm sensibilidades entre 15 e 70% dependendo do estádio da infecção. O desenvolvimento de métodos diagnósticos rápidos, sensíveis e específicos utilizando técnicas moleculares como a PCR, permite diagnosticar e tratar oportunamente esta doença. Objetivo: desenvolver e avaliar dois testes de PCR para a detecção de Brucella spp. e B. abortus. Materiais e métodos. Desenharam-se e avaliaram-se iniciadores utilizando o software Primer3 para detectar o gene ugpA, também se avaliaram outros iniciadores reportados previamente na literatura. Calculou-se a sensibilidade e especificidade do teste por PCR usando três grupos (G) de amostras humanas e bovinas utilizando o teorema de Bayes: G1: 30 amostras de soro e 30 de sangue de humanos sãos e 30 de soro e 30 de sangue de bovinos sãos, inoculadas com Brucella abortus; G2: 30 amostras de soro e 30 de sangue de humanos sãos e 30 de soro e de 30 sangue de bovinos sãos inoculadas com Salmonella Typhi, Escherichia coli, Klebsiella sp., Psudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae e Enterococcus sp. G3: 60 amostras de soro e 60 de sangue de bovinos e 60 amostras de soro e 60 sangue de humanos assintomáticos. Resultados. Obteve-se uma sensibilidade e especificidade de detecção da Brucella spp. e Brucella abortus de 100% em amostras humanas e bovinas. Conclusões: pela alta sensibilidade e especificidade encontrada com o teste de PCR estudado, recomenda-se continuar um estudo clínico de aplicação para avaliar seu comportamento em amostras de pacientes e animais infetados.

Caracterización de dos brotes de fiebre tifoidea en Apartadó, Antioquia, 2005 / Characterization of two typhoid fever outbreaks in Apartadó, Antioquia, 2005

Introducción. La caracterización de los brotes de fiebre tifoidea es importante epidemiológicamente, debido a que esto permite la búsqueda de la fuente y el desarrollo de medidas de control. Objetivo. Describir un brote de fiebre tifoidea en el municipio de Apartadó y caracterizar fenotípica y genotípicamente los aislamientos de Salmonella Typhi relacionados con él. Materiales y métodos. Se estudiaron 44 pacientes, a 15 de ellos se les tomaron muestras para hemocultivos y a 7, muestras para coprocultivos. Los aislamientos bacterianos se estudiaron con pruebas bioquímicas y serotipificación y se determinó el perfil de susceptibilidad a antibióticos. Los aislamientos se evaluaron fenotípicamente por reacción en cadena de la polimerasa para los genes hilA, invA e IS- 200, y por electroforesis en campo pulsado con XbaI. Se estudiaron ocho muestras de agua asociadas al brote por reacción en cadena de la polimerasa y cultivo para la búsqueda de Salmonella. Resultados. A 15/44 pacientes se les confirmó el diagnóstico clínico de fiebre tifoidea, a 13 por hemocultivos y a 2 por coprocultivos positivos para S. Typhi. Todos los aislamientos de S. Typhi fueron sensibles a los antibióticos probados. La reacción en cadena de la polimerasa confirmó la presencia de los genes hilA y invA e IS-200 en todos los aislamientos estudiados. La electroforesis en campo pulsado agrupó 10 aislamientos en el patrón COINJPP.X01.0035, tres en el patrón COINJPPX01.0002, uno COINJPP.X01.0012 y uno COINJPPX01.0037. El estudio de aguas fue negativo para Salmonella spp. Conclusiones. La electroforesis en campo pulsado estableció la presencia de dos brotes, que inicialmente, por epidemiología y pruebas fenotípicas del patógeno, habían sido descritos como uno solo. Además, permitió diferenciar dos aislamientos de origen clonal diferente, que indicaron casos aislados. No se pudo corroborar la fuente de infección en el agua.

Introduction. The characterization of typhoid fever outbreaks is important because it is necessary to find the source of the infection and development control measures. Objective. A typhoid fever outbreak is described from Apartadó and the Salmonella Typhi isolates characterized by phenotypic and genotypic methods. Materials and methods. From 44 patients, 15 blood cultures and 7 stools cultures were recovered. Phenotypic identification of isolates was done by biochemical and serological tests, and antibiotic susceptibility was tested. Genes hilA, invA and the IS200 marker were evaluated by polymerase chain reaction; pulsed field gel electrophoresis was used for the XbaI gene. Eight water samples were examined by polymerase chain reaction and culture methods in order to isolate Salmonella spp. Results. Fifteen patients were confirmed for typhoid fever, 13 by blood cultures and two by stools cultures. All S. Typhi isolates were susceptible to the antimicrobials tested. The presence of hilA, invA and IS200 were confirmed by polymerase chain reaction in all isolates. The pulsed field gel electrophoresis method grouped 10 isolates in COINJPP.X01.0035 pattern, three in COINJPPX01.0002, one in COINJPP.X01.0012 and one in COINJPPX01.0037. Water isolates were negatives for Salmonella spp. Conclusions. Pulsed field gel electrophoresis discriminated the isolates in two outbreaks. Initially the cases were described as only one outbreak, by epidemiological criteria and phenotypic test. Additionally two isolates with different clonal origin were discriminated, indicating that they were unrelated to the other cases. It was not possible to confirm the infection source from water samples.