Construction and functional identification of CD19-CAR vector based on PiggyBac transposable system / 中国肿瘤生物治疗杂志

@#[摘 要] 目的：开发基于PiggyBac（PB）转座系统的电转染CAR-T细胞制备方法并鉴定其体外抗肿瘤功能。方法：采用健康人外周血单个核细胞（PBMC）制备T细胞，通过分子克隆技术将CD19基因克隆到PB质粒（转座子）中后经电转染法将转座子和转座酶质粒导入激活的T细胞中，并测定其转染效率，最后运用流式细胞术及荧光素酶发光实验评估其对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞的杀伤能力。结果：电转染制备的CD19 CAR-T细胞转染效率较高（>60%），呈剂量依赖性，且CAR-T细胞相对于Pan-T细胞对Raji细胞杀伤能力显著（P<0.05）。结论：开发的PB转座系统的电转染方法可行，在体外对肿瘤细胞具有显著的杀伤能力，具备临床运用于CD19 CAR-T细胞制备的潜力。