Complicações hepáticas na doença falciforme / Hepatic complications in sickle cell disease

Doentes falciformes podem apresentar alterações hepáticas agudas ou crônicas. As agudas são caracterizadas por dor no quadrante superior direito e icterícia. O diagnóstico diferencial inclui crise aguda de falcização hepática, seqüestro hepático, colestase intra-hepática, colelitíase, coledocolitíase, colecistite e hepatite viral aguda. Estas complicações devem ser diagnosticadas precocemente, através de história clínica, testes de função hepática e exames radiológicos, e o tratamento deve ser prontamente iniciado. Transfusão sangüínea é essencial para o tratamento das manifestações agudas causadas pelo processo de vaso-oclusão, como seqüestro hepático e colestase intra-hepática. As alterações hepáticas crônicas são freqüentemente causadas pela hemólise crônica e múltiplas transfusões. Para prevenção, diagnóstico precoce e orientação terapêutica da alteração hepática crônica, os doentes falciformes devem ser submetidos a exames de rotina: testes de função hepática, sorologia para hepatite B e C, dosagem sérica de ferritina e ultra-sonografia de abdômen. A biópsia hepática deve ser realizada em pacientes com hepatite viral e em pacientes com alterações hepáticas crônicas acentuadas e persistentes, afora das manifestações agudas.

Patients with sickle cell disease may present acute or chronic hepatopathy. The acute syndrome is characterized by right upper quadrant abdominal pain and jaundice. The differential diagnoses include acute sickle hepatic crises, hepatic sequestration, sickle cell intrahepatic cholestasis, cholecystitis, choledocholithiasis and acute viral hepatitis. These alterations can be differentiated by a careful history, liver function tests and hepatobiliary imaging studies. The specific treatment must be promptly initiated. Red blood cell transfusion is essential for the treatment of the clinical syndromes caused by the sickling process such as hepatic sequestration and sickle cell intrahepatic cholestasis. Chronic liver disease is frequently caused by chronic hemolysis and multiple transfusions. In an attempt to prevent, early diagnosis and treatment of chronic liver disease, sickle cell disease patients must be routinely submitted to liver function tests, serologic tests for hepatitis B and C, serum ferritin levels and abdominal ultrasound. Liver biopsy may be indicated in patients with virus hepatitis and in patients with persistent and accentuated alterations in liver function tests, out of acute sickle cell hepatic crises.

Quelação oral de ferro na Beta-Talassemia / Oral Iron chelation therapy in Beta-Thalassaemia

A quelação do ferro com deferroxamina (DFO) melhorou dramaticamente o prognóstico de pacientes com beta talassemia. A DFO reduz os estoques de ferro, bem como a morbidade e mortalidade destes pacientes. No entanto, a necessidade de infusões parenterais prolongadas estimulou a busca por novos quelantes. Deferiprone (DP) é o único quelante oral em uso clínico e já avaliado em estudos clínicos. A terapia combinada com DP e DFO surgiu como alternativa para pacientes talassêmicos. Ela tem o potencial de minimizar os efeitos adversos, aumentar a adesão e a eficácia, e, talvez, atingir compartimentos distintos de ferro no organismo. A disponibilização de novos quelantes e métodos de avaliação do ferro no organismo poderá permitir a individualização do tratamento quelante

Iron chelation therapy with desferrioxamine (DFO) hasdramatically improved the outlook in beta-thalassaemiapatients. DFO reduces tissue iron stores, prevents ironinducedorgan damage, and reduces morbidity andmortality. However, the need for prolongedsubcutaneous portable pump infusions, high cost, andpatient noncompliance have prompted thedevelopment of new iron chelators. Deferiprone, is theonly oral iron chelator in clinical use and has beenstudied in large long-termclinical trials. Combinationtherapy with deferiprone and DFO has emerged as anew alternative for beta-thalassaemia patients.Combination therapy may minimize side effects,improve compliance, enhance iron excretion and targetspecific iron pools. The availability of new chelatingcompounds and new methods for body-iron storeevaluation may lead to individualized therapy in thefuture.

Unsuccessful treatment of sideroblastic anaemia with chloroquine / Insucesso da cloroquina no tratamento da anemia sideroblástica

As anemias sideroblásticas representam um grupo de moléstias heterogêneas. O seu tratamento é restrito e baseado em transfusões de sangue. Relatos descrevem um potencial benefício no uso da cloroquina na anemia sideroblástica (AS). Neste estudo, seis pacientes com AS foram tratados pelo período de seis meses com 300g/dia de cloroquina. Epigastralgia foi um sintoma freqüente nos pacientes do estudo obrigando à interrupção do tratamento em dois deles. A necessidade transfusional permaneceu a mesma em dois pacientes e não ocorreu em nenhum paciente o aumento dos níveis de hemoglobina ou a redução do percentual de sideroblastos em anel. A ausência de resultados e os efeitos colaterais sugerem que o uso de cloroquina seja inadequado para o tratamento de AS.

Genotyping of Kell, Duffy, kidd and RHD in patients with B Thalassemia

A determinaçäo dos fenótipos Rh, Kell, Duffy e Kidd, associada ao ABO é utilizada para prevenir a aloimunizaçäo a antígenos eritrocitários e participam também no processo de identificaçäo de anticorpos nos pacientes com B talassemia. Todavia, a fenotipagem desses pacientes é trabalhosa e de difícil interpretaçäo. Nesta situaçäo, deve ser avaliada uma alternativa ao teste de hemaglutinaçäo para determinar o padräo antigênico dos pacientes. Utilizamos para tal fim o método PCR-RFLP. Foram preparados DNAs de 50 pacientes com Btalassemia que haviam sido anteriormente fenotipados pela hamglutinaçäo e testados para Kell, Kidd, Duffy/GATA mutaçäo por PCR-RFLP. RHD/näo-D foi analisado pelo tamanho do produto, do PCR associado à seqüência do gene RHD no intron 4 e exon 10/3' UTR. Os testes de genotipagem foram realizados sem o conhecimento dos resultados dos fenótipos. Para os RHD/näo-D, 47 foram RHD+ e RHD+/RHCE+, e 3 foram RHD- e RHD-/RHCE+. Para o Kell, 48 kk foram K2K2 e 2 Kk foram K1K2. Para o Duffy, das 44 amostras que haviam sido normais, GATA box, 8 Fy(a+b-)foram FYA/FYA, 15Fy(a+b-) foram FYB/FYB; e 19 Fy(a+b+) foram FYA/FYB; das outras 4 amostras, 3 foram FYA/FYB; homozigoto GATA mutaçäo. Duas amostras fenotipadas como Fy(a+b-), que eram normais GATA, apresentavam as mutaçöes 265T/298a e 2 amostras fenotipadas como Fy(a+b+) haviam sido genotipadas como FYA/FYB. Para o Kidd, 15Jk(a+b+) foram JKA/JKA, 12jk(aa-b+) foram JKB/JKB, e 20 jk(a+b+) haviam sido genotipadas como JKB/JKB. A genotipagem é mais acurada que a fenotipagem para determinaçäo de grupos sangüíneos em pacientes portadores de B talassemia poli transfundidos. A genotipagem nesses pacientes pode ser importante para selecionar hemácias antigenicamente negativas para transfusäo de glóbulos vermelhos.

Investigaçäo genético-epidemiológica e molecular da deficiência de G-6-PD em uma comunidade brasileira / G-6-PD deficiency in a Brazilian community: an investigation involving epidemiological genetics and molecular techniques

Teve por objetivo estudar a deficiência de G-6-PD em uma comunidade do interior do Estado de Säo Paulo (Bragança Paulista). Durante 36 meses foram selecionados 4.621 doadores de sangue do sexo masculino, detectando-se 80 deficientes em G-6-PD. A análise molecular foi realizada em 70 deficientes näo consangüíneios mediante a amplificaçäo de DNA por PCR seguida de digestäo por enzimas de restriçäo e análise de polimorfismo de conformaçäo em hélice simples (SSCP). Em 98,6 por cento dos casos, foi identificada a mutaçäo G-6-PD A- (202 G->A), por digestäo do exon 4 com Nla III. Verificou-se a presença de mutaçäo mais rara no exon 9, por SSCP. Näo foi constatado caso da variante Mediterrânea. Tais resultados mostraram que a variante A- (202->A), quase que exclusiva, foi introduzida na comunidade näo apenas por descedentes de africanos, como também pelos imigrantes italianos, espanhóis e portugueses. A contribuiçäo italiana em termos da variante Mediterrânea de G-6-PD foi menor do que a sua participaçäo em termos de talassemia beta, provavelmente devido à origem no Norte da Itália.

Programa comunitário e deficiência de G-6-PD no Brasil / Community program and G-6-PD deficiency in Brazil

A viabilidade e a eficiência da implantaçäo de um programa comunitário relativo à deficiência de desidrogenase de 6-fosfato de glicose foram investigadas em uma populaçäo brasileira (Bragança Paulista, SP). A comunidade foi abordada a partir dos seus doadores de sangue, examinando-se 4.621 indivíduos do sexo masculino e diagnosticando-se 80 portadores da alteraçäo genética. O índice de positividade na amostra foi de 1,7 por cento, a taxa de aceitaçäo à orientaçäo genética oferecida em caráter opcional atingiu 61 por cento e a percentagem de assimilaçäo satisfatória dos deficientes de desidrogenase de 6-fosfato de glicose quanto às informaçöes fornecidas foi de 81 por cento. A análise molecular demonstrou a presença quase que exclusiva na comunidade da variante A ou Africana de desidrogenase de 6-fosfato de glicose, relativamente benigna do ponto de vista clínico. Com um baixo custo anual, foi possível diagnosticar e orientar de forma ética um número significativo de famílias com a deficiência de desidrogenase de 6-fosfato de glicose, além de iniciar a educaçäo da comunidade a respeito do problema.

Hb Köln [alfa2ß298(FG5) val-met] identified by DNA analysis in a Brazilian family

Hb Köln resulta da substituiçäo do aminoácido valina por metionina na posiçäo 98 da cadeia da hemoglobina. Embora seja a mais freqüente das hemoglobinas instáveis, possui poucas características que permitem distinguí-las sem a realizaçäo de análise estrutural da molécula. Com o objetivo de desenvolver um procedimento alernativo a análise proteíca, este trabalho descreve a identificaçäo da Hb Köln através de análise de DNA. Uma paciente branca, sexo feminino, 4 anos de idade, com icterícia desde o nascimento, foi analisada, apresentando uma banda anômala entre A2 e S em eletroforese em acetato de celulose, e migraçäo eletroforética semelhante a Hb C em gel de agar. Os testes de instabilidade térmica e de precipitaçäo pelo isopropanol foram positivos e foram observados corpúsculos de Heinz no sangue periférico. Os três exons do gene da globina foram seqüenciados e uma transiçäo de G A foi identificada na primeira posiçäo do codon 98. Essa alteraçäo näo cria ou abole nenhum sítio conhecido de enzima de restriçäo. Desta forma, a confirmaçäo da mutaçäo foi levada a efeito através de hibridizaçäo com oligonucleotídeos alelo-específicos, o que permitiu o estabelecimento de um método simples e rápido de identificaçäo de novos casos quando os dados clínicos e o padräo hematológico e eletroforético sugerem Hb Köln.

Célula precursora de sangue de cordäo umbilical humano: viabilidade para transplantes e terapia gênica / Umbilical cord blood: a new source of hematopoietic cells for transplantation and gene therapy

O transplante de células precursoras de linhagem hematopoiética é utilizado como importante arma terapêutica nas neoplasias hematológicas e doenças genéticas. A principal fonte destas células tem sido, há alguns anos, a medula óssea de doadores voluntários. Entretanto, dada à dificuldade em se encontrar doador HLA compatível, houve necessidade de se procurar outros tipos de fonte. Nos últimos 14 anos, o sangue de cordäo umbilical vem sendo analisado como possível fonte alternativa. Apresenta como vantagem, em relaçäo à medula óssea, ser material facilmente obtido e manipulado com facilidade. O sangue de cordäo é extremamente rico em células precursoras, fornecendo em cultura, número de colônias de CFU-GM suficientes para recuperaçäo da linhagem hematopoiética. Outra vantagem é a baixa incidência de doença enxerto versus hospedeiro (GVHD) quando utilizado em transplante. Tanto a criopreservaçäo quanto o tempo de congelamento näo alteraram o número dos vários tipos de linfócitos do sangue de cordäo. Quanto à sua aplicaçäo na prática médica, recentemente dois autores demonstraram a sua viabilidade em transplantes em situaçöes clínicas de grande risco. Kurtzberg et al (1996) e Wagner et al (1996) transplantaram pacientes utilizando sangue de cordäo de indivíduos näo relacionados, alguns incompatíveis até a três antígenos HLA, obtendo bons resultados. O sangue de cordäo pode também ser utilizado em terapia gênica. De acordo com dados de literatura, suas células apresentam maior capacidade de proliferaçäo que as da medula, podendo ser eficientemente infectadas com retrovírus, apresentando alto nível de expressäo da seqüência introduzida. Resultados recentemente obtidos em nosso laboratório demonstraram que houve melhor crescimento celular quando se utilizou a metilcelulose como meio, possibilitando a repicagem das colônicas para replaqueamentos e utilizaçäo em cultura de longa duraçäo. De acordo com os dados da literatura publicados ao longo destes anos, o sangue de cordäo será, no futuro, a fonte de células precrursoras de linhagem hematopoiética mais utilizada em terapia gênica e transplantes.

Glucose induced insulin release in beta-thalassemia heterozygotes

Os genes da beta-globina e insulina estäo localizados no braço curto do cromossomo 11, com evidências de ligaçäo gênica entre os mesmos. estudos recentes demonstraram que na anemia falciformee no trao siclêmico há uma anormalidade na secreçäo de insulina. Com o objetivo de investigar se a beta-talassemia associa-se a uma anormalidade na secreçäo de insulina, foi realizado teste de tolerància à glicose endovenoso (GTT-EV) em 9 pacientes hetrozigotos para beta-talassemia e 15 controles normais. Näo houve diferença significativa entre pacientes e controles quando os níveis de glicose plasmática, em cada tempo do GTT-EV, foram comparados; a velocidade de desaparecimento da glicose também foisemelhante nos dois grupos. Näo houve diferença entre os dois grupos quando comparados os níveis de insulina antes e após a infusäo de glicose. Todos os índices de avaliaçäo da fase rápida de secreçäo de insulina induzida por glicose foram semelhantes nos dois grupos. Os resultados deste trabalho, sugerem que näo há alteraçäo na secreçäo de insulina em pacientes beta-talassemicos, provavelmente porque este defeito seja uma anormalidade independente em ligaçäo gênica com o gene Bs, mas näo com genes da beta-talassemia