Detection of Toxoplasma gondii DNA in peripheral blood and aqueous humor of patients with Toxoplasmic active focal necrotizing retinochoroiditis using real-time PCR / Detecção de DNA do Toxoplasma gondii no sangue periférico e humor aquoso por PCR em tempo real

ABSTRACT Purpose: To evaluate the ability of real-time quantitative PCR (qPCR) for detectingToxoplasma gondii DNA in the peripheral blood and aqueous humor of patients with toxoplasmic active focal necrotizing retinochoroiditis. Methods: Fifty-five patients with infectious uveitis seen from 2009 to 2013 at the Department of Ophthalmology and Visual Sciences of the Federal University of São Paulo were enrolled in this study. Forty-three patients had toxoplasmic active focal necrotizing retinochoroiditis, and the remaining 12 had non-toxoplasmic infectious uveitis and served as controls. qPCR analysis forT. gondii DNA was performed on the patients' peripheral blood and aqueous humor samples. Results: The qPCR was positive for T. gondii DNA in 37.21% (16/43) of the aqueous humor samples and 2.33% (1/43) of the peripheral blood samples; further, 16.27% (7/43) of the patients had positive results in both their blood and aqueous humor samples. Conclusion: qPCR was able to detect T. gondii DNA in patients with toxoplasmic active focal necrotizing retinochoroiditis in the blood as well as the aqueous humor and can help with the diagnosis of the disease.

RESUMO Objetivo: Analisar o uso do PCR em tempo real (qPCR) na detecção do DNA do T. gondii no sangue periférico e no humor aquoso de pacientes com lesões de retinocoroidite focal, ativa por toxoplasmose. Métodos: Cinquenta e cinco pacientes com uveite infecciosa foram incluídos neste estudo. Os pacientes foram atendidos entre 2009 a 2013, no Departamento de Oftalmologia e Ciências Visuais da Universidade Federal de São Paulo. Quarenta e três pacientes tiveram o diagnóstico de lesões de retinocoroidite focal, ativa por toxoplasmose e, os outros 12 tiveram o diagnóstico de uveíte infecciosa não toxoplásmica e, por isso foram usados como grupo controle. A técnica de qPCR foi utilizada na detecção de DNA do T. gondii em amostras de sangue periférico e humor aquoso. Resultados: O qPCR foi positivo para o DNA do T. gondii em 37,21% (16/43) das amostras de humor aquoso, 2,33% (1/43) nas amostras de sangue periférico e, 16,27% (7/43) em ambas amostras simultaneamente. Conclusão: O qPCR foi capaz de detectar o DNA do T. gondii em pacientes com lesões de retinocoroidite focal, ativa por Toxoplasmose, no sangue bem como, no humor aquoso, podendo ajudar no diagnostico.

Real-time PCR in infectious uveitis as an alternative diagnosis / PCR em tempo real em uveites infecciosas como um diagnóstico alternativo

PURPOSE: Uveitis is a major visual impairment disease affecting parts or the entire uveal tract and occasionally the sclera, the cornea or the optic nerve. The disease is a major cause of ocular morbidity and blindness in immunocompetent and immunocompromised patients. In this work we analyzed the sensitivity and specificity of real-time PCR to detect the etiological agent from blood, plasma, vitreous and aqueous humor and compared with the diagnostic hypothesis. METHODS: Twenty-seven patients (13 male) were studied and Real-time PCR method was used for the detection of herpes simplex virus 1 (HSV-1), herpes simplex virus 2 (HSV-2), varicella zoster virus (VZV), cytomegalovirus (CMV), Mycobacterium tuberculosis (TB) and Toxoplasma gondii (Toxo) in the aqueous humor as well as in the vitreous, blood and plasma. RESULTS: Our results showed the presence of Toxo, CMV, VZV or HSV-2 in 19.2 percent of aqueous humor samples, and in 30 percent of vitreous humor samples. In plasma and blood samples, only CMV was detected (11.1 percent and 3.7 percent, respectively). CONCLUSION: Real-time PCR was able to detect and to confirm diagnostic hypothesis in uveitis. Our data also confirms that vitreous humor is the best source for molecular diagnosis of infectious uveitis but indicates aqueous humor samples that are easier to obtain may also be appropriate to be tested by Real-time PCR.

OBJETIVO: Uveíte é a maior causa de doença ocular que afeta o trato uveal, e ocasionalmente a esclera, cornea e o nervo óptico. Esta doença é a maior causa de morbidade ocular e cegueira em pacientes imunocompetentes e imunossuprimidos. Neste trabalho nós analisamos a sensiblidade e especificidade do PCR em tempo real para detectar agentes etiológicos no sangue, plasma, humor vítreo e aquoso, e comparamos com a hipótese diagnóstica. MÉTODOS: Vinte e sete pacientes (13 homens) foram estudados e o método de PCR em tempo real foi usado para detectar o vírus da herpes simples 1 (HSV-1), vírus da herpes simples 2 (HSV-2), vírus varicella zoster (VZV), citomegalovírus (CMV), Mycobacterium tuberculosis (TB) e Toxoplama gondii (Toxo) no humor aquoso e vítreo, além do sangue e plasma. RESULTADOS: Nossos resultados mostraram a presença de Toxo, CMV, VZV ou HSV-2 em 19,2 por cento das amostras de humor aquoso, e em 30 por cento das amostras de humor vítreo. Nas amostras de plasma e sangue somente CMV foi detectado (11,1 por cento e 3,7 por cento, respectivamente). CONCLUSÃO: PCR em tempo real foi capaz de detectar e confirmar a hipótese diagnóstica em uveíte. Nossos dados confirmam que o humor vítreo é a melhor fonte para diagnóstico molecular de uveíte infecciosa, porém o humor aquoso também foi uma fonte importante de detecção, além de ser mais fácil de se obter.