Cloreto de sódio a 0,9%, adicionado ou não de dexametasona, intrapleural, na prevenção de aderências pulmonares após toracotomia intercostal em cães / Intrapleural use of sodium chloride 0.9%, with or without dexamethasone, in the prevention of pulmonary adhesions in dogs after intercostal thoracotomy

As aderências pulmonares em cães são sequelas comuns após trauma penetrante, fratura costal, infecção, intervenção cirúrgica, entre outras que prejudicam eventuais intervenções ou reintervenções. Neste estudo, pretendeu-se verificar, em cães, a eficiência da solução de cloreto de sódio (NaCl) 0,9%, adicionada ou não com dexametasona, na prevenção de aderências após toracotomia intercostal. Para isso, foram utilizados três cães, em estudo piloto, e 15 cães, separados em três grupos (A, B, C), submetidos a toracotomia no quinto espaço intercostal esquerdo. Nos cães do grupo A, foi feita somente a toracotomia e a toracorrafia; nos do grupo B, foram realizadas a toracotomia e a toracorrafia e injeção na cavidade pleural ipsolateral de 1mg kg-1 de dexametasona, diluída em 10ml de NaCl a 0,9%. Nos do grupo C, além da toracotomia e toracorrafia, foram injetados no tórax 10ml kg-1 de solução de NaCl a 0,9%. Após 15 dias, foi efetuada videotoracoscopia transdiafragmática para se determinar a presença e o escore de aderências entre o pulmão e a parede costal. Os resultados demonstraram presença de aderências na maioria dos animais do grupo A e reduzida a nenhuma aderência nos demais grupos. Na avaliação estatística, foi aplicado o teste qui-quadrado, com nível de significância de 5%. O uso de solução de NaCl a 0,9% adicionada ou não com dexametasona no espaço pleural evita ou reduz aderências pulmonares após a toracotomia intercostal.

Pulmonary adhesions in dogs are a common sequel after surgical intervention, undermining any interventions. This study aimed to determine in dogs, the efficacy of sodium chloride solution 0.9% with or without dexamethasone in order to prevent adhesions after intercostal thoracotomy. Fifteen dogs were separated into three groups of five animals, A, B and C and underwent thoracotomy in the fifth left intercostal space. Three other dogs were submitted to a previous study. In the dogs of Group A it was performed only a thoracotomy and thoracorraphy; in group B, it was performed a thoracotomy, thoracorraphy and injection into the pleural cavity of isotonic sodium chloride (10ml) and dexamethasone (1mg kg-1). In the dogs of the group C, it was performed the thoracotomy thoracorraphy and injected isotonic sodium chloride (10ml kg-1) into the pleural cavity. After 15 days of thoracotomy, it was performed transdiaphragmatic thoracocospy to determine the presence and score of adhesions between the lung and chest wall. The results demonstrated the presence of adhesions in the majority of group A and reduced or no adhesions in the other groups. For statistical evaluation, it was pplied the chi-square test with significance level of 5% (P≤0.05). The sodium chloride solution 0.9% with or without dexamethasone in the pleural space prevented or reduced lung adhesions after intercostal thoracotomy.

Transplante de fração total de células mononucleares ou fração vascular estromal associada à membrana celulósica em feridas cutâneas experimentais de coelhos / Total fraction of mononuclear cell or stromal vascular fraction transplant associated with cellulosic membrane in experimental cutaneous wounds in rabbits

A pele apresenta diversas funções importantes para o organismo. A manutenção de sua integridade é fundamental, entre outras, para impedir a penetração de microrganismos e a perda de líquidos essenciais à manutenção da vida. Por estar constantemente exposta ao meio ambiente, a pele é altamente susceptível a traumas que podem acarretar soluções de continuidade. A cicatrização da pele ferida deve ser rápida e diversas alternativas são buscadas, visando à redução do tempo de reparo a fim de garantir cicatriz funcional e esteticamente aceitável. Uma opção cada vez mais viável para reparar tecidos danificados é a terapia celular com células-tronco adultas. Os objetivos deste trabalho consistiram em avaliar o transplante da fração total de células mononucleares (FTCM) da medula óssea (MO) e da fração vascular estromal (FVE) do tecido adiposo (TA), associado ao uso da membrana celulósica. Para realização deste experimento, 20 coelhos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos com cinco animais cada. Após a indução da ferida cutânea experimental, o grupo A, não recebeu nenhum tratamento, o grupo B, recebeu apenas membrana celulósica e os grupos C e D, além de receberem a membrana, foram submetidos a transplante autólogo da FTCM, com valor total de células entre 6,92 x 106 a 4,91 x 107 e uma viabilidade de 82 a 97% ou da FVE, com valor total de células entre 9,6 x 105 e 6,5 x 106 e uma viabilidade de 66 a 87%, respectivamente. Ao final do período de avaliação, os três grupos tratados apresentaram diferença estatística significativa da área da ferida em relação ao grupo controle e o grupo que recebeu a FVE do tecido adiposo apresentou o menor tempo de cicatrização da ferida.

The skin presents various important functions to the organism. The maintenance of its integrity is fundamental, among others, to prevent penetration of microorganisms and exit of liquids essential to life maintenance. Due to its constant environment exposure, the skin is highly susceptible to trauma which can result solutions of continuity. The healing of wounded skin should be fast and many alternatives are searched for, aiming to reduce repair time and to guarantee a functional and esthetically acceptable scar. One option to repair injured tissues which is ever more viable is cellular therapy with adult stem cells. The aims of this study consisted in evaluating the transplant of total mononuclear cell fraction (TMCF) from bone marrow (BM) or stromal vascular fraction (SVF) from adipose tissue (AT), associated with the use of cellulose membrane. To carry out this experiment, 20 rabbits were randomly divided in four groups with five animals each. After induction of the experimental cutaneous wound, Group A did not receive any treatment; group B received only cellulose membrane; and groups C and D, in addition to receiving the membrane, were submitted to autologous transplant of TMCF, with total cell value between 6,92 x 106 and 4,91 x 107 and a viability of 82 to 97% or SVF, with total cell value between 9,6 x 105 and 6,5 x 106 and a viability of 66 a 87%, respectively. At the end of the evaluation period, the three treated groups presented significant statistical difference of wound area in relation to the control group, and the group which received SVF from adipose tissue presented the shortest wound healing time.

Técnicas e sítios de coleta de medula óssea em cães e gatos / Techniques and bone marrow sites sampling in dogs and cats

Atualmente, o incremento das pesquisas enfoca a medula óssea como fonte potencial para o tratamento de doenças, uma vez que seu uso como diagnóstico já é largamente empregado. Os objetivos deste artigo são revisar os melhores acessos à medula óssea e destacar a importância desse material como diagnóstico e tratamento de doenças. São abordadas particularidades sobre as técnicas de coleta e as complicações observadas pelos autores, a fim de facilitar os procedimentos, tornando-os mais seguros.

Currently, the research focuses on bone marrow as a potential source for the treatment of diseases, since its use as a diagnosis is already largely employed. This paper aims to promote a practical review on the best access to the bone marrow and the importance of this material as diagnosis and treatment. Sampling techniques are observed and detailed by the authors, in order to facilitate the procedures and make them safer.

Transplante autólogo de células mononucleares da medula óssea em úlcera de córnea experimental em cães / Bone marrow mononuclear cells autotransplant in experimental corneal ulcer in dogs

As células mononucleares (CM) da medula óssea (MO) despertam grande interesse nas pesquisas sobre regeneração tecidual. O limbo é a fonte de células-tronco (CT) para repor ceratócitos lesados e uma disfunção destas é denominada deficiência límbica. Essa condição é desenvolvida por diversas afecções, sendo que a queimadura por base é a mais comum. A fim de confirmar a presença das CM da MO transplantadas, a ocorrência de quimiotaxia destas e comparar histopatologicamente os grupos tratado e controle, utilizou-se um modelo experimental de úlcera de córnea associado ao autotransplante de CM. Para tanto, 16 cães machos ou fêmeas, sem raça definida, foram submetidos à úlcera experimental de córnea com papel filtro embebido em hidróxido de sódio (NaOH). Após as lesões, os animais foram submetidos a transplante subconjuntival de CM da MO, previamente marcadas com nanocristais. A avaliação pós-operatória foi realizada por imunofluorescência no sexto dia após o transplante e por histopatologia passados 15 dias do procedimento, quando foi possível notar que as CM fixaram-se na região lesionada, não sofreram quimiotaxia e, apesar de diminuírem a inflamação, não auxiliaram o processo de cicatrização corneana a curto prazo. Assim, sugerem-se estudos adicionais no transplante de CM da MO na cicatrização da córnea.

Bone marrow (BM) mononuclear cells (MC) are a great subject in tissual regeneration. The main stem cell source to the eye is the limbus. Theses cells replace injured corneal cells, however, if the limbal stem cells are not functional, a limbal deficiency with concomitant conjunctivalization takes place. This pathological condition can be caused for several reasons, in which alkali burns are the most common. To conduct a research about transplanted BM MC presence, the cells homing and to histopathologically compare the treated and sham group, an experimental corneal ulcer model associated with MC autotransplant was used. Sixteen, male or female, stray dogs suffered experimental corneal ulceration with sodium hydroxide soaked filter discs. After the lesions, animals were submitted to subconjunctival autotransplant of previously marked BM MC. The evaluation was made by immunofluorescence on the sixth day after lesions creation and histopathology was conducted 15 days after the same procedure, when it was possible to observe that the MC grafted in the injured area, the cells did not execute the homing process and, despite the inflammatory decrease, they did not help the corneal epithelial healing process in a short term evaluation. Thus, future studies about MC transplantations in corneal ulcers are indicated.

Colheita de medula óssea em cães: modelo para obtenção da fração total de células mononucleares / Bone marrow harvest in dogs: model for acquisition of the total fraction of mononuclears cells

No presente trabalho foi elaborada uma técnica para protocolo de colheita de medula óssea (MO) (10ml. kg-1), do osso femoral, para isolamento, quantificação e viabilidade da fração total de células mononucleares (CM). Para tanto, 40 cães machos ou fêmeas, sem raça definida, com idade aproximada de dois anos, pesando em torno de 10kg, foram submetidos a procedimento asséptico em ambiente cirúrgico para colheita de MO. Para a obtenção de uma quantidade suficiente de CM, durante o procedimento foi utilizada a agulha tipo Steis anatômica, que favoreceu a colheita de volume sangüíneo em menor espaço de tempo e não danificou a viabilidade celular. Também foi utilizado o Kit Bone Marrow collection, que teve a finalidade de filtrar as espículas ósseas, mantendo a integridade das CM colhidas durante o período decorrido para o acondiconamento do sangue. Durante o período da colheita de MO, os animais foram submetidos à collheita de sangue periférico (pré, trans e pós-operatório) para avaliações hematológicas e sofreram autotransfusão sangüínea para suprir a queda acentuada de hemoglobina ocorrida nos primeiros momentos da coletaheita. O total de MO colhida e filtrada foi colocado lentamente sob gradiente de densidade Histopaque (1.077g ml-1). O material foi centrifugado a 440 x g por 30 minutos e o anel de células foi colhido, lavado e centrifugado três vezes em meio contendo solução salina 0,9 por cento, DMEM e soro sangüíneo autólogo estéril. Foi realizada a contagem do anel celular em câmara de Neubauer e foi verificada sua viabilidade utilizando corante vital. Neste estudo foi verificado que no volume de MO colhido foi possível obter a média de 2,57 x 10(6) (± 1,56) CM kg-1 e a viabilidade celular foi superior a 90 por cento (96,72 ± 2,9 por cento). Conclui-se que a técnica de colheita de MO com agulha Steis com lavagem celular no meio contendo soro autólogo e Kit Bone Marrow e agulha Steis com lavagem celular no meio contendo...

In the present research a new protocol to harvest 10ml kg-1 femoral bone marrow (BM) was developed to allow isolation, quantification and to test the mononuclear cell (MC) fraction viability. Forty male or female stray dogs, aging and weighting around two years old and 10kg respectively, were submitted to aseptic bone marrow harvest in a surgical environment. To achieve an ideal cell count of MC, an anatomical Steis needle was used during the procedure, which favored the indicated volume harvest in a shorter period of time without interfering cellular viability. A bone marrow collection kit was also used to filter bone fragments while maintaining harvested MC integrity during blood packaging. Meanwhile BM harvesting was conducted, animals peripheral blood collection was performed (pre, trans and post-operatory) to hematological evaluations and autologous blood transfusion was made to overcome the increased hemoglobin fall that takes place in the initial harvesting moments. The harvested and filtered BM was slowly placed over a Histopaque density gradient (1.077g ml-1). The material was centrifuged at 440g x for 30 minutes. The cellular ring was harvested, washed and three times centrifuged in saline 0.9 percent, DMEM and autologous sterile serum. Cellular ring count was conducted in neubauer chamber and its viability was performed with vital dye. In this study was possible to notice that with the harvested BM volume an average of 2.57 x 10(6) (± 1.56) MC kg-1 was obtained and the cell viability was over 90 percent (96.72 ± 2.9 percent). It was concluded that the bone marrow kit and Steis needle with autologous serum cellular wash BM harvesting technique allow an ideal MC number isolation which can be administered in tissue lesions to enhance the regeneration process.