The effects of riboflavin and ultraviolet light on keratocytes cultured in vitro / Avaliação do efeito da riboflavina e luz ultravioleta sobre os ceratócitos in vitro

ABSTRACT Purpose: To culture quiescent human keratocytes and evaluate the effects of ultraviolet light and riboflavin on human corneal keratocytes in vitro. Methods: Keratocytes were obtained from remaining corneoscleral ring donor corneas previously used in corneal transplant surgeries and cultured in DMEM/F12 with 2% FBS until confluence. Characterization of cultured cells was performed by immunofluorescence analysis for anti-cytokeratin-3, anti-Thy-1, anti-α-smooth muscle actin, and anti-lumican. Immunofluorescence was performed before and after treatment of cultured cells with either ultraviolet light or riboflavin. Corneal stromal cells were covered with collagen (200 µL or 500 µL) and 0.1% riboflavin, and then exposed to ultraviolet light at 370 nm for 30 minutes. After 24 hours, cytotoxicity was determined using MTT colorimetric assays, whereas cell viability was assessed using Hoechst 33342 and propidium iodide. Results: Cell cultures achieved confluence in approximately 20 days. Expression of the lumican was high, whereas no expression of CK3, Thy-1, and α-SMA was observed. After crosslinking, MTT colorimetric assays demonstrated a low toxicity rate, whereas Hoechst 33342/propidium iodide staining demonstrated a low rate of apoptosis and necrosis, respectively, in all collagen-treatment groups. Conclusion: Keratocytes can be successfully cultured in vitro and characterized by immunofluorescence using lumican. MTT colorimetric assays, and Hoechst 33342, and propidium iodide staining demonstrated a higher rate of cell death in cells cultured without collagen, indicating collagen protects keratocytes from the cytotoxic effects of ultraviolet light.

RESUMO Objetivo: Avaliar o efeito da aplicação da luz ultravioleta e riboflavina sobre ceratócitos da córnea humana in vitro. Métodos: Os ceratócitos foram obtidos a partir das rimas corneoesclerais remanescentes da trepanação de córneas previamente utilizadas em cirurgias de transplante de córnea e cultivadas em meio DMEM/F12 com 2% de FBS até atingir confluência. As culturas de células foram caracterizadas por imunofluorescência com os anticorpos K3 (marcador de células epiteliais), Thy-1 (marcador de fibroblasto) SMA (marcador de miofibroblasto) e Lumican (marcador de ceratócitos). Imunofluorescência também foi feita após o tratamento. As células do estroma da córnea foram cobertas com colágeno (200 µL e 500 µL) e 0,1% de riboflavina e exposta a luz UVA a 370 nm por 30 minutos. Após 24 horas, citotoxicidade foi determinada por ensaio de MTT e a viabilidade celular foi feita por Hoechst 33342/Iodeto de propideo. Resultados: As culturas de células atingiram confluência em aproximadamente 20 dias. Imunofluorescência apontou alta expressão para o marcador de ceratócitos (Lumican) e expressão negativa par os marcadores de células epiteliais (K3), fibroblasto (Thy-1) e miofibroblasto (α-SMA). Após o cross linking a análise de MTT mostrou baixa taxa de toxicidade e com a coloração de Hoechst 33342/Iodeto de propideo baixa taxa de apoptose e necrose respectivamente em todos os grupos que continham colágeno. Conclusão: As culturas de ceratócitos foram obtidas e caracterizadas por imunofluorescência através do marcador Lumican com sucesso. O ensaio de MTT e a coloração por Hoechst 33342 e iodeto de propídio, apresentaram maior índice de morte celular nos grupos que não continham colágeno, provando que protege as células contra os efeitos da luz UVA.

Rejeiçäo corneana pós transplante de córnea: análise de dados do Banco de Olhos do Hospital Säo Paulo - Escola Paulista de Medicina / Corneal graft rejection after penetrating keratoplasty: analysis of the Eye Bank of the Hospital Säo Paulo - Escola Paulista de Medicina

Dentre todos os transplantes, o corneano tem sido o mais realizado na atualidade. Geralmente é bem mais bem sucedido, mas a rejeiçäo é estudada há muitos anos, já tem sido estabelecidos alguns fatores predisponentes. Este estudo tem como objetivo analisar os casos de rejeiçäo ocorridos em nosso serviço para detectar algum fator peculiar para a ocorrência da mesma. Métodos: Realizamos um estudo retrospectivo analisando 113 casos de transplante de córnea ópticos efetuados no ano de 1998. Destes, selecionamos todos os casos de rejeiçäo e avaliamos a patologia da base, presença de sinéquias, neovasos, aumento da pressäo intra-ocular, antecedente de transplante prévio, idade do doador, tempo de captaçäo e de preservaçäo da córnea, experiência do cirurgiäo. Resultados: Dos 113 transplantes realizados, 20 casos (17,69 por cento) apresentavam rejeiçäo do botäo transplantado. Destes 20 casos, 9 apresentavam sinéquias, 4 tinham neovasos, 8 apresentavam aumento de pressäo intra-ocular e 7 já haviam se submetido a transplante de córnea prévio.

Caratite infecciosa pós-transplante de córnea / Infectious keratitis after keratoplasty

Objetivo: Estudar os casos de ceratite infecciosa pós-transplante de córnea do Setor de Doenças Externas Oculares e Córnea da Universidade Federal de Säo Paulo - UNIFESP-EPM. Pacientes e Métodos: Foram revisados os registros de 255 pacientes submetidos a transplante de córnea no período de janeiro de 1995 a junho de 1997. Aqueles que desenvolveram infecçäo foram avaliados quanto: (1) indicaçäo do transplante, (2) tempo entre a cirurgia e o aparecimento da infecçäo, (3) fatores desencadeantes da infecçäo, (4) microorganismo causal e (5) repercusäo final na acuidade visual. Resultados: Foram identificados dez casos de ceratite infecciosa pós-transplante de córnea resultando em uma incidência de 3,9 por cento. Problemas relacionados à sutura, olho seco, ceratite herpética e defeito epitelial crônico foram os fatores desencadeantes identificados. Os principais microrganismos envolvidos foram Streptococcus pneumoniae e Straphylococcus aureus. A perda visual foi grave em 80 por cento dos casos e, apenas dois pacientes tiveram acuidade visual final de 20/40 e 20/60. Conclusäo: Deve ser dado especial atençäo na avaliaçäo tanto pré-operatória como pós-operatória à presença de fatores predisponentes ao desenvolvimento de infecçäo no pós-operatório de transplante, pois embora seja uma complicaçäo infrequente pode comprometer gravemente o prognóstico visual

Perfil das doaçöes de córneas no Banco de Olhos do Hospital Säo Paulo / Corneal donation profile at the Säo Paulo Hospital Eye Bank

Objetivo: O aumento no número de Banco de Olhos no Brasil e na demanda de tecido para transplante de córnea torna necessário um estudo do perfil das doaçöes recebidas. Este estudo tem como objetivo traçar o perfil das doaçöes de córneas obtidas pelo Banco de Olhos do Hospital Säo Paulo. Material e métodos: estudo retrospectivo de fichas de doaçöes realizadas no período de janeiro de 1993 a dezembro de 1995, quanto a diversas variáveis referenes ao doador. Resultados: foram doadas 1904 córneas, sendo que 96,5 por cento foram através da enucleaçäo. Observou-se um decréscimo progressivo a cada ano no número de doaçöes. O aproveitamento de tecido foi de 49,36 por cento em 1993, 51,72 poe cento em 94 e 49,8 por cento em 95. Em todos os anos a principal causa da näo utilizaçäo da córnea foi em decorrência de alteraçöes encontradas ao exame biomicroscópico do tecido ..

Ceratoplastia penetrante em ceratocones em Hospital Universitário / Penetrating keratoplasty for keratoconus: an academic experience

Foram avaliadas 235 ceratoplastias penetrantes realizadas em 206 pacientes com ceratocone no período de 9 anos, de maio de 1984 a julho de 1993, em Hospital Universitário. A acuidade visual final obtida foi igual ou superior a 20/40 em 128 (54,5 por cento) olhos, entre 20/100 e menor que 20/40 em 80 (34,0 por cento), e em menor que 20/100 em 27 (11,5 por cento). A taxa de enxertos claros foi de 86,9 por cento e o tempo médio de seguimento pós-operatório foi de 14,2 meses. Das complicaçöes, a mais frequente foi a rejeiçäo endotelial em 20 (8,5 por cento) pacientes, seguidas por 7 (3,0 por cento) falências primárias, 3 (1,2 por cento) infecçöes no pós-operatório, 1 (0,4 por cento) glaucoma secundário, 1 (0,4 por cento) epitelizaçäo de câmara anterior e 1 (0,4 por cento) deiscência de sutura. Os resultados säo semelhantes aos estudos publicados, demonstrando que a ceratoplastia penetrante em ceratocone tem bom prognóstico quando realizado em Hospital Universitário